de Sangre
Realizado por Samuel Utrera
Quesada
ndice
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Inmunohematologa
Introduccin
Componentes de la sangre
- Hemates
- Leucocitos
- Plaquetas
- Agua
- Protenas
- Azcares
- cidos Grasos
- Sales Minerales
Clulas Sanguneas
Glbulos Rojos o
Hemates: Son clulas que tienen
como funcin transportar el O2 a
los tejidos y eliminando el CO2.
Proceden a la regulacin del
equilibrio acido/base de la sangre.
Tienen forma de disco bicncavo
de unos 7 a 7,5 m de dimetro.
Estn compuestos por el 65% de
agua y el 35 % de sustancias
slidas (95% de hemoglobinas y
5% de lpidos).
Poseen en su superficie el
antgeno que determina el grupo
sanguneo llamado aglutinina. La
cantidad normal de hemates
oscila alrededor de los 4,2 a los 6
millones/mm.
Clulas Sanguneas
Clulas Sanguneas
Plaquetas: Son los elementos
mas pequeos de la sangre con
un dimetro que mide unos 2-3
m de dimetro. En un mm cbico
hay cerca de 300.000 plaquetas.
La vida media de una plaqueta
oscila entre 8 y 12 das.
Son una fuente natural de factores
de crecimiento y estn
involucradas en la hemostasia,
iniciando la formacin de cogulos
o trombos.
Plasma
Conceptos bsicos en
Inmunohematologa
Antgeno. Los antgenos son molculas capaces de producir una respuesta
inmune adaptativa. Normalmente son de naturaleza proteica aunque
tambin pueden ser carbohidratos. Los antgenos pueden ser reconocidos
por los anticuerpos producidos por linfocitos B o los linfocitos T.
Cada antgeno est definido por su anticuerpo, los cuales interactan por
complementariedad espacial. La zona donde el antgeno se une al
anticuerpo recibe el nombre de eptopo o determinante antignico, mientras
que el rea correspondiente de la molcula del anticuerpo es el paratopo.
Las clulas presentan los antgenos al sistema inmune mediante una
molcula de histocompatibilidad. Dependiendo del antgeno presentado y
del tipo de molcula de histocompatibilidad, podran activarse diferentes
tipos de leucocitos.
Conceptos bsicos en
Inmunohematologa
10
Conceptos bsicos en
Inmunohematologa
Antgenos Eritrocitarios. Se encuentran presentes en la membrana de los
hemates.
Anticuerpos antieritrocitarios. Partculas proteicas que tienen afinidad
por los glbulos rojos. Se encuentran en el plasma/suero sanguneo.
11
Reacciones Serolgicas
12
Reacciones Serolgicas
13
Reacciones Serolgicas
14
Grupos Sanguneos
Un grupo sanguneo es una forma de agrupar ciertas caractersticas en
base a la presencia o ausencia de determinados antgenos sobre la
superficie de los hemates.
Los grupos sanguneos se dividen en:
15
Sistema ABO
1.
Las personas con sangre del tipo A tienen glbulos rojos que expresan
antgenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antgenos B
en el plasma de su sangre.
2.
3.
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguno de los dos
antgenos (A o B) en la superficie de sus glbulos rojos pero tienen
anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB
expresan ambos antgenos en su superficie y no fabrican ninguno de los
dos anticuerpos.
16
Sistema ABO
17
Sistema ABO
Son controlados por un solo gen con tres alelos: O (SIN, por no poseer los
antgenos ni del grupo A ni del grupo B), A, B.
El alelo A da tipos A, el B tipos B y el alelo O tipos O siendo A y B
alelos dominantes sobre O.
As, las personas que heredan dos alelos OO tienen tipo O; AA o AO dan
lugar a tipos A; y BB o BO dan lugar a tipos B. Las personas AB tienen
ambos genotipos debido a que la relacin entre los alelos A y B es
de codominancia.
Por tanto, es imposible para un progenitor AB el tener un hijo con tipo O, a
excepcin de que se de un fenmeno poco comn conocido como el
'fenotipo Bombay' o diversas formas de mutacin gentica relativamente
extraas.
Entonces por lo que se puede decir que el alelo A es dominante sobre el
alelo B y esto hace que el alelo O sea un alelo dominante tambin por eso
se llama codominancia.
18
El factor RH es una protena adicional que puede estar presente en la membrana de los hemates. Fue
descubierto por los doctores Alexander Wiener y Karl Landsteiner en 1940 en los monos Macacus Rhesus.
Cuando una persona tiene esta protena se le considera que tiene Rh positivo, pero si est ausente se
trata de un Rh negativo.
El factor Rh est constitudo por un complejo de seis antgenos fundamentales, formados por tres pares de
genes alelos: Cc, Dd y Ee. El antgeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e
y el E.
19
20
Variante Du. Presenta una estructura que consta como mnimo de 4 partes;
sifaltan una o ms partes del antgeno, el resto puede tener una expresin
dbil. Poresta razn los individuos que pertenecen a dicha variante, deben
ser transfundidoscon sangre Rh(-). Los centros de transfusin sangunea
efectan la prueba para elfactor Du a todos sus donantes Rh(-), ya que la
sangre de un Du inyectada a unreceptor Rh (-) puede producir un este
ltimo una sensibilizacin del mismo alantgeno D.
21
22
Banco de Sangre
23
Procedimiento de trabajo
La muestra llega con el volante del mdico con las pruebas a realizar.
Cuando la peticin es rosa se trata de una transfusin sangunea. Cuando
se trata de una peticin blanca se usa un procedimiento de rutina. En el
banco de sangre llegan que en su mayora son de carcter urgentes, en las
que se trabaja en:
Urgencias vitales: Se transfunde segn el protocolo estandarizado.
24
Procedimiento de trabajo
Adems en esta seccin tambin llegan las bolsas de sangre de los
donantes, que sern clasificadas segn el grupo sanguneo y la fecha de
caducidad. Todo esto se hace mediante la ayuda de tarjetas de
identificacin.
Una vez se han separado las bolsas segn el grupo sanguneo, se
almacenan segn la fecha de caducidad, teniendo las que se caducan
antes en la zona delantera, y al fondo estarn las bolsas que caducarn
ms tarde.
25
Procedimiento de trabajo
26
Aparatos
Centrfuga de tarjetas.
Incubador de tarjetas.
Centrfuga de tubos.
Visor.
Agitador de plaquetas.
Pipetas automticas.
Descongelador de plasma.
Frigorfico de concentrado de sangre.
Congelador de plasma.
Frigorfico de suero de muestras del paciente.
PDA.
Casillero.
27
Reactivos
28
29
Determinacin de grupo
hemtico/Rh
Mediante esta tcnica podremos determinar el grupo sanguneo y el Rh de una
persona. Puede determinarse en tubo y en tarjeta.
Determinacin del grupo sanguneo en tarjeta. Con esta tcnica vamos a
determinar el grupo sanguneo usando una tarjeta con unos reactivos a la que
aadiremos la sangre y el suero del paciente, previamente separados.
30
Centrifugacin
1)
2)
31
Centrifugacin
Tapadera
Cmara o gabinete
Base
Interruptor de encendido
Marcador de tiempo
Tacmetro
Freno
Control de velocidad
32
Centrifugacin
33
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh tarjeta
(Diamed)
Objetivo: Determinar el grupo sanguneo A, B, AB y O, y tambin el Rh.
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
34
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh tarjeta
(Diamed)
35
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh tarjeta
(Diamed)
36
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh tarjeta
(Diamed)
Lectura de resultados:
La presencia del botn en la zona superior nos indicar aglutinacin, por lo
que la lectura ser positiva. En el grupo srico debe darse la reaccin a la
inversa tal y como aparece en el hemtico (izquierda de la tarjeta).
37
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh en tubo
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
38
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh en tubo
Interpretacin:
39
Determinacin grupo
Sanquneo ABO/Rh en tubo
40
Determinacin de anticuerpos
irregulares y autoanticuerpos
en tarjeta (Diamed)
Objetivo:
41
Determinacin de anticuerpos
irregulares y autoanticuerpos en
tarjeta (Diamed)
Desarrollo:
Se trabaja en una tarjeta de Liss-Coombs
Se identifican los anticuerpos con nmeros romanos y en la tarjeta
ponemos I, II y III y el A de auto.
En las 4 primeras se pone el nmero del paciente y las 2 ltimas son las
pruebas cruzadas, en las que se cruzan las unidades que se solicitan.
Para los anticuerpos irregulares se emplean 25 nL de suero y
posteriormente se adiciona 1 gota de reactivo I, II y III en el pocillo I, II y III.
En el A usaremos 50 uL diludo de solucin de hemates y se mezcla con 25
uL de suero del mismo paciente.
Posteriormente se incuba a 37C, se centrifuga y se procede a la lectura.
42
Determinacin de anticuerpos
irregulares y autoanticuerpos
en tarjeta (Diamed)
43
Determinacin de anticuerpos
irregulares y autoanticuerpos
en tarjeta (Diamed)
Interpretacin:
44
Pruebas Cruzadas
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
45
Pruebas Cruzadas
Interpretacin:
46
Procedimiento de Transfusin
Tras haber realizado las pruebas anteriores, se procede a la transfusin de
sangre.
Esto se lleva a cabo mediante un sistema informtico en el que se
introducen los datos del paciente en el programa informtico y se
transfunde con el sistema PDA.
El sistema PDA sirve para ver la trazabilidad de la unidad transfundida.
Inicia el abertura y cierre de la unidad.
47
Procedimiento de
Transfusin
48
Procedimiento de
Transfusin
49
50
Introduccin
Este procedimiento est diseado para controlar los reactivos, la
realizacin de las tcnicas de trabajo empleadas y los materiales de las
pruebas, as como el personal que realiza dicho trabajo.
La casa comercial entrega cada dos meses unos controles internos (grupo
hemtico-srico, anticuerpos irregulares, test de Coombs directo, Du y
fenotipos). Se realizan cada 15 das.
El objetivo es describir los mecanismos que permitan asegurar la correcta
realizacin de las tcnicas (PNT) de trabajo empleadas.
51
Objetivo y alcance
52
Reactivos
53
1)
2)
3)
4)
5)
54
1)
500 l Id-Diluent 2.
5-10 l concentrado de hemates.
2)
55
1)
2)
Con los reactivos del Control Calidad Interno viene un impreso donde
deberemos apuntar los resultados obtenidos, una vez realizados segn
el mismo procedimiento usado en rutina para las muestras de pacientes.
56
Desarrollo:
A) Tarjeta ABO/Rh. Identificaremos una tarjeta ABO/Rh para cada muestra
de clulas reactivo incluidas en el Control de Calidad Interno:
1)
2)
3)
4)
5)
Depositar 10-12 l de la dilucin de hemates en los pocillos con anti-A antiB, anti-AB, anti-D y control.
B) Tarjeta hemates A1 y B:
1)
2)
3)
Interpretacin:
59
Coombs Directo
DESARROLLO
Identificar una tarjeta Diamed LISS/Coombs para cada muestra de clulas reactivo
incluida en el Control de Calidad Interno.
1)
2)
3)
4)
5)
Coombs Directo
Interpretacin:
61
Coombs directo
monoespecficos
Desarrollo:
Identificar una tarjeta DC Screning con el nmero de clulas para cada
muestra de clulas reactivo incluida en el Control de Calidad Interno.
1)
2)
3)
4)
5)
62
Proceder a la lectura.
63
Coombs directo
monoespecficos
Interpretacin:
64
Desarrollo:
En una tarjeta LISS-Coombs se enfrentarn estos hemates I- II III, a
cada uno de los sueros del CCI de Inmunohematologa, incluida en el
Control de Calidad Interno, que contiene un anticuerpo de especificidad
conocida.
1)
2)
3)
65
1)
2)
3)
Depositar:
50 l hemates I + 25 l del Suero 1 del CCI en el pocillo identificado
como I.
50 l hemates II + 25 l del Suero 1 del CCI en el pocillo identificado
como II.
50 l hemates III + 25 l del del Suero 1 del CCI en el pocillo
identificado como III.
Incubaremos la ID-Tarjetas durante 15 minutos a 37C
Centrifugar durante 10 minutos.
Proceder a la lectura.
Los resultados obtenidos sern reflejados la solicitud adscrita del CCI.
66
67
Desarrollo:
Sacar del frigorfico las cajas con los paneles comerciales de hemates
papainizados y no papainizados. Comprobar la fecha de caducidad. Dar
suavemente varias vueltas a la caja entera con el fin de resuspender los
hemates de cada frasco.
Rotular: 11 pocillos de tarjeta Diamed ClNa 1 al 11, 11 pocillos de tarjeta
Diamed LISS/Coombs del 1 al 11.
Aadir a cada pocillo 25 l del control problema: Suero 1 del CCI; Suero 2
del CCI; Suero 3 del CCI, que nos dio como resultado positivo.
68
69
Todos los resultados dentro del CCI deben ser los esperados.
Si algn resultado no es el esperado se debe repetir prestando especial
cuidado a todos los pasos de la tcnica.
Si sigue dando un resultado no esperado se debe informar al hematlogo
responsable.
Registrar el incidente, medidas tomadas y acciones correctoras llevadas a
cabo.
Control de nuevos lotes: Se realizar cada vez que se reciba un nuevo
lote de antisueros lquidos. Se realizar lo antes posible desde que entre
el lote de reactivos. Se anotarn los resultados
70
Responsabilidades
Es responsabilidad del Personal Tcnico encargado del equipo, la
realizacin de las tcnicas segn estos procedimientos y la interpretacin y
validacin delegada de los resultados.
Es responsabilidad del Hematlogo responsable del Servicio de
Transfusin, la supervisin de todo el proceso y la interpretacin y
validacin de los resultados dudosos.
71
72
Introduccin
73
Control Cuatrimestral
74
75
Controles
76
Muestras
1)
2)
3)
4)
5)
77
Determinaciones
78
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
79
80
Interpretacin:
1)
2)
3)
4)
81
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
82
Interpretacin:
1.
2.
3.
83
Investigacin (escrutinio) de
Anticuerpos Irregulares en tarjeta
(Diamed)
Objetivo. Los nicos anticuerpos de grupo que se suelen poseer son los
anti-A y anti-B. Los dems anticuerpos de grupo no relacionados con el
sistema AB0, se les conoce como anticuerpos irregulares. Para detectar
estos anticuerpos se enfrenta el suero a estudiar a una serie de hemates
de grupo 0 que poseen la mayora de antgenos frente a los cuales estos
anticuerpos son especficos.
84
Investigacin (escrutinio) de
Anticuerpos Irregulares en tarjeta
(Diamed)
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
6)
85
Investigacin (escrutinio) de
Anticuerpos Irregulares en tarjeta
(Diamed)
Interpretacin:
1)
2)
3)
4)
5)
86
Investigacin (escrutinio) de
Anticuerpos Irregulares en tarjeta
(Diamed)
87
Identificacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Panel
88
Identificacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Panel
Desarrollo:
a) Sacar del frigorfico las cajas con los paneles comerciales de hemates
papainizados y no papainizados. Comprobar la fecha de caducidad. Dar
suavemente varias vueltas a la caja entera con el fin de resuspender los
hemates de cada frasco.
b) Preparar una suspensin de 10-25 l de sangre total del control 1 y
control 2, con 0.5 ml de Id-Diluent 2.
c) Rotular : 11 pocillos de tarjeta Diamed LISS/Coombs del 1 al 11.
d) Aadir a cada pocillo 25 l del control problema positivo.
e) Aadir: 50 l de los hemates no papainizados del vial 1 a los pocillos
rotulado 1 de las tarjetas Liss/Coombs y as haremos con todos los viales
hasta el rotulado como 11.
Al pocillo nmero 12 (est destinado para el autocontrol del paciente), en
estas tarjetas no se utilizara (los controles no tienen auto).
89
Identificacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Panel
f) Incubar en la incubadora Diamed durante 15 minutos a 37 C las tarjetas
Diamed LISS/Coombs y las tarjetas Diamed ClNa con los hemates
papainizados.
g) La centrifugacin se realizar mediante el ciclo pre programado de la
centrfuga Diamed.
h) Los resultados se anotaran en los cuadros en blanco que hay a la
izquierda de la hoja de Panel, que viene en cada caja, de la manera
siguiente:
Identificacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Panel
Interpretacin:
1)
2)
3)
4)
5)
91
Identificacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Panel
92
Titulacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
93
Titulacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Desarrollo:
1)
Rotular los tubos con la dilucin del suero (2, 4, 8, 16, 32, 64) y aadir
0,1 ml de Id solucin 2 a todos los tubos excepto al primero.
2)
3)
Mezclar con una pipeta limpia varias veces el contenido del segundo
tubo y transferir 0,1 ml al siguiente tubo. Repetir el procedimiento con
todas las diluciones, utilizando una punta de pipeta nueva con cada tubo.
4)
94
Titulacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
95
Titulacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Observaciones:
96
Titulacin de Anticuerpos
Irregulares en tarjeta (Diamed)
Interpretacin:
97
Desarrollo:
1)
2)
3)
4)
5)
98
Interpretacin:
99
Evaluacin de resultados:
Control de calidad externo
Todos los resultados dentro del CCE deben ser los esperados.
Responsabilidades
101
Responsabilidades
102
Responsabilidades
103
Gestin de Residuos
104
Gestin de Residuos
105
Gestin de Residuos
106
107
Gestin de Residuos
108
Gestin de Residuos
109
Gestin de Residuos
GRUPO II: en bolsas de color marrn los cuales estn destinados a residuos
sanitarios asimilables a urbanos. Estos seran gasas, pipetas de plstico,
guantes, envases, papel de secarse las manos (este nunca debe depositarse
en contenedor para papel reciclado). En estos contenedores tambin se
depositarn residuos procedentes de los analizadores como cubetas de
reaccin... que pese a llevar restos de suero, estos son en cantidad muy
pequea.
110
Gestin de Residuos
GRUPO III:
111
Gestin de Residuos
112
Gestin de Residuos
Precauciones:
Como profesional debes conocer lo que tienes entre manos, asegrate que va al
contenedor que le corresponde.
Si tienes dudas, infrmate, no lo arrojes al contenedor equivocado.
Si tienes un residuo y no encuentras el contenedor que le corresponde contacta
con el servicio de limpieza.
Minimiza siempre que puedas los residuos generados.
Utiliza la proteccin adecuada.
No saques la bolsa del contenedor, ni manipules su contenido.
No llenes las bolsas completamente, para facilitar su cierre.
No empujes con las manos el contenido del tubo.
No arrojes objetos punzantes o cortantes directamente al cubo. Deben ir en el
contenedor especfico de punzantes.
En caso de vertidos de residuos contaminantes como metales pesados contacta
con el servicio de limpieza que se encargar de la recogida del mismo.
Si el contenedor de residuos necesita ser sustituido por otro, contacta con el
servicio de limpieza.
113
Riesgos Laborales
114
Introduccin
115
Organizacin
116
Organizacin
117
Organizacin
La organizacin y distribucin fsica del laboratorio (distribucin de
superficies, instalacin de aparatos, procedimientos de trabajo,
instalaciones generales, etc.) debe ser estudiada a fondo y procurar que
sea adecuada para el mantenimiento de un buen nivel preventivo.
118
119
120
121
122
123
Almacenamiento de productos
124
Almacenamiento de productos
Formacin de perxidos inestables con el consiguiente peligro de explosin
al destilar la sustancia o por contacto.
Polimerizacin de la sustancia que, aunque se trata en principio de una
reaccin lenta, puede en ciertos casos llegar a ser rpida y explosiva.
El recipiente que contiene el producto puede atacarse y romperse por si
slo.
Descomposicin lenta de la sustancia produciendo un gas cuya
acumulacin puede hacer estallar el recipiente.
125
Almacenamiento de productos
Vertidos
Atmsfera contaminada
127
Las acciones a llevar a cabo para el control del riesgo son las siguientes:
Si la contaminacin es dbil
Si la contaminacin es importante
128
129
Incendio
130
131
Accidentes
132
Norma general:
133
135
Electrocucin
136
Quemaduras trmicas
137
Intoxicacin digestiva
Debe tratarse en funcin del txico ingerido, para lo cual se debe disponer
de informacin a partir de la etiqueta y de la ficha de datos de seguridad. La
actuacin inicial est encaminada a evitar la accin directa del txico
mediante su neutralizacin o evitar su absorcin por el organismo.
138
139
140