IDENTIFICACIN BIOQUMICA DE

BACTERIAS GRAM NEGATIVAS,

BACTERIAS PIOGENAS GRAM
NEGATIVAS
Y
Pseudomonas

MICROBIOLOGA 2014 II

Mblgo. Max Siadn Ortega.

BACTERIAS GRAM
NEGATIVAS
COCOS

BACILOS
Son los ms
abundantes

Familia Enterobacteriaceae
Familia Vibrionaceae
Familia Aeromonaceae
Bacilos Gram Negativos
Aerobios o Facultativos

Familia Campylobacteriaceae
Familia Helicobacteriaceae
Familia Pseudomonaceae
Familia Pasteurellaceae

FAMILIA
ENTEROBACTERIA
CEAE

Responsables del 30 a 35 % de todas las septicemias,

Ms del 70 % de todas las infecciones del tracto
urinario y Muchas infecciones intestinales.
Varios pertenecen a la flora intestinal normal
Otros estn asociados a infecciones entricas
Otros a procesos infecciosos (especialmente cuando
estas bacterias invaden otros rganos o sistemas

Es posible que las infecciones procedan de un

reservorio animal, de un portador sano, o de la
diseminacin endgena de la bacteria en un sujeto
susceptible, pudindose ver afectados casi cualquier
rgano del cuerpo

Familia Enterobacteriaceae
Gnero Escherichia
Gnero Klebsiella
Gnero Salmonella
Gnero Shigella
Gnero Citrobacter
Gnero Enterobacter
Gnero Morganella
Gnero Proteus
Gnero Serratia
Gnero Yersinia

Es el grupo ms grande y heterogneo de

bacilos Gram negativos con importancia
clnica
Estos gneros se han clasificado segn
sus propiedades bioqumicas (bateras
bioqumicas), estructura antignica
(serotipificacin) e hibridacin y
secuenciacin de su material gentico
A pesar de la complejidad de la familia
menos de 20 especies son responsables de
ms del 95% de las infecciones

HBITAT
AGUA, TIERRA, PLANTAS, TRACTO G.I.
HOMBRE Y ANIMALES
PRESENCIA EN AGUA INDICA
CONTAMINACIN FECAL
UBICUAS (Klebsiella) O DE DISTRIBUCIN
LIMITIDA (Salmonella typhi)

CARACTERSTICAS
BACILOS RECTOS, 0,4-0,6 X 2-3
m, GRAM NEGATIVOS
NO ESPORULADOS,
ANAEROBIOS FACULTATIVOS,
MVILES O INMVILES
(Klebsiella , Shigella y Yersinia)
FERMENTAN GLUCOSA,
CATALASA POSITIVOS, OXIDASA
NEGATIVOS (ausencia de citocromo
oxidasa)

MEDIOS DE AISLAMIENTO
PRIMARIO
En medios
selectivos
Pueden ser de capacidad:
moderada (como en EMB y McConkey),
alta (como en SS, desoxicolato y citrato)
completamente especfica (sulfato de bismuto y
verde brillante).
Algunos de los medios selectivos contienen lactosa y un indicador de
pH, lo que permite desde un principio tener colonias aisladas de
bacterias fermentadoras como Escherichia coli y no fermentadoras
de la lactosa (como Salmonella y Shigella)

Agar MacConkey
Es un medio diferencial selectivo que permite distinguir
entre enterobacterias que hidrolizan lactosa y las que
no lo hacen.
La hidrlisis de la lactosa produce cidos orgnicos y las
colonias que la hidrolizan adquieren un color rojo.
Las colonias lactosas negativas permanecen incoloras
aunque el medio vira a amarillo por la subida de pH que
origina la utilizacin de las protenas (peptona) del medio.

INDICADOR DE pH: ROJO NEUTRO.

Las sales biliares y el cristal violeta lo hace selectivo

Sin
crecimient
o

Escherichia
coli: en Mc
Conckey

MC CONKEY

Escherichia coli: en XLD

XILOSA, LISINA, DESOXICOLATO

Utilizacin de azcares: Xilosa, Lactosa y

Sacarosa,
TIOSULFATO: produccin de H2S
LISINA: la descarboxilacin a

MEDIO EMB: Eosina azul de

metileno

El colorante de anilina(Eosina y azul de metileno) inhiben

bacteria Gram (+) y a las Gram (-) exigentes
Bacterias fermentadoras de lactosa da colonias de color
verdoso con brillo metlico
No fermentadoras de lactosa Transparentes

Medios
diferenciales
Son aquellos que se ponen de manifiesto las propiedades
metablicas de los microorganismos frente a diferentes substratos
y que permiten observar una, dos o ms caractersticas
metablicas de la bacteria inoculada.

TSI
Agar hierro
triple
azcar

LIA
(Agar hierro
lisina)

MIO
Movilidad
indol ornitina

CITRATO
DE
SIMMON
S

TSI
(Triple Sugar Iron)

Contiene: glucosa, sacarosa,

lactosa, hierro y un indicador de pH
(ROJO FENOL).
Permite
conocer
capacidad de la bacteria para
fermentar los carbohidratos.
Tambin se detecta la produccin
de H2S.
Produccin de gas.
Tipo de siembra por picadura y
en estra.

LECTURA

K: si el medio se mantuvo ROJO (color inicial, alcalino).

A: si el medio se volvi cido (color amarillo).
G: si forma burbujas.
H2S: si forma acido sulfurico.

(K/A) Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el

microorganismo solamente fermenta la glucosa.
(A/A) Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo):
el Microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
(K/K)Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azcares.
G)La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo,
indica que el microorganismo produce gas.
(H2S) El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce cido sulfhdrico.
EJM: E. coli: A/A Produccin de gas: +, Produccion de
H2S: -

LIA
Agar Hierro
Lisina

Contiene lisina, sales de fierro,

glucosa y un indicador de pH
Prpura de Bromocresol
Permite
conocer

la descarboxilacin y desanimacin
oxidativa de la lisina.
la produccin de H2S
Fermentacin de la glucosa.
Tipo de siembra por picadura y
estra

LECTURA

Descarboxilacin o desanimacin de la lisina

LISINA

CADAVERINA (amina - alcalino)

DESCARBOXIL
ASA

Produccin de Ac. Sulfhdrico.

Fermentacin de la glucosa
El medio es de color amarillo (cido), pero si utiliza lisina,
entonces alcaliniza el medio y lo vuelve violeta.
Ejm: Salmonella typhi: Lisina descarboxilasa +, Proteus sp: desamina

La descarboxilacin da color violeta (alcaliniza)

La desanimacin color rojo (acidifica)

1.LDC -, NO
H2S,
PRODUCTORA
GAS.
2. LDC + -,
PRODUCTOR
A H2S Y
GAS.
3.LDC - , NO
H2S,
PRODUCTORA
DE GAS

Descarboxilacin de
aminocidos
(arginina, lisina, ornitina)

CITRTATO DE
SIMONS

Contiene citrato de sodio como

fuente de carbono, fosfato de amonio
como nica fuente de fosfato y un
indicador de pH Azul de
bromotimol
Permite
conocer

Utilizacin del citrato de sodio

(fermentacin) con la produccin de
subproductos alcainos
Tipo de siembra por picadura y
estra

LECTURA

El color azul intenso indica

Citrato (+) e indica que el
microorganismo ha sido capaz
de utilizar el citrato con
formacin de subproductos
alcalinos

si el medio continua verde es

citrato (-)

Ejm: E. coli (+)

Enterobacter sp (-)

MEDIO MIO
Movilidad indol
ornitina

Medio semislido, contiene ornitina,

triptfano y glucosa.

Permite
conocer

movilidad de la bacteria.
Descarboxilacin de la ornitina.
Produccin de indol a partir del
triptfano.
Fermentacin de la glucosa.
Tipo de siembra por picadura con
asa recta

LECTURA MOTILIDAD

Se observa la motilidad sin sulfuros en

el medio semi-slido . En el centro
del tubo se observa el eje de siembra
y en la periferia de este eje se
observa el movimiento de las
bacterias hacia el resto del medio. A
manera de comparacin, justo al final
del tubo donde no llega el eje de
crecimiento (la puncin) no se
observa crecimiento, en comparacin
con el resto del medio que se observa
opaco. MOTILIDAD +. SULFUROS -.

LECTURA PRODUCCION DE
SULFUROS

Produccin de sulfuros, a partir del

tiosulfato de sodio presente en el
medio.
La prueba positiva se observa un
precipitado negro en el medio de
cultivo donde creci la bacteria.
Adicionalmente se observa la motilidad
de la bacteria que ha sido sembrada
por puncin en este medio semi-slido.
Se observa el movimiento de las
bacterias que crecen a manera de
sombrilla al rededor del eje de
siembra.

LECTURA PRODUCCION DE

Se observa la capacidad de la INDOL

bacteria para desdoblar el triptfano
por medio de la enzima triptofanasa
que hidroliza y desamina al
triptfano en:
INDOL + Acido pirvico +
Amoniaco.
Al adicionar el reactivo de Kovacs
(p-dimetilaminobenzaldehido) sobre
el medio cuando hay produccin de
Indol se forma un anillo rojo (tubo
de la derecha) Indol (+).
De lo contrario se forma un anillo
amarillo (tubo del centro y la
izquierda) Indol (-).
Ejm: E. coli (+)
klebsiela pneumoniae (-)

Produccin de
sulfhdrico

Muchas bacterias producen sulfuro de

hidrgeno
(sulfhdrico)
a
partir
de
aminocidos
azufrados
(cistena
o
metionina) o tiosulfato.
La fermentacin de sulfhdrico puede ser
detectada incluyendo hierro reducido en el
medio para formar un precipitado negro de
FeS
Se inocula un medio de agar nutritivo
conteniendo tiosulfato de metionina y

Lectura de Produccin de
sulfhdrico

Voges- Proskauer
(Produccin de Acetona)

Uno de los test del IMVIC para enterobacterias

es el Voges Proskauer. Las especies que llevan
a cabo la fermentacin a butanodiol de la
glucosa acumulan acetona en el medio.

Las bacterias se inoculan en caldo glucosapeptona. Las especies que llevan a cabo la
fermentacin butanodilica de la glucosa
forman acetona en el medio.
Se aade alfanaftol y creatina en medio
alcalino . La acetona se convierte en diacetilo
con la aparicin de un color rojo

VogesProskauer
(Produccin de Acetona)

Ureasa

Este enzima hidroliza la urea (H2NCO-NH2) y origina amonio lo que

producir un incremento del pH que
puede detectarse con un indicador.
Las bacterias se inoculan en un
medio con glucosa-peptona y urea al
2%. Como indicador de pH se utiliza
rojo fenol

Ureasa

Reduccin de Nitrato
Algunas bacterias pueden usar nitratos como
aceptor final de e- en la respiracin. el nitrato
puede ser reducido a nitrito .
Las
bacterias
se
inoculan
en
medios
conteniendo
nitrato
potsico.
El
nitrito
procedente de la reduccin de clulas puede
detectarse aadiendo alfa-naftilamina y cido
sulfanlico producindose un color rosa-rojo.
Las enterobacterias
usualmente positivos.

Pseudomonas

son

Reduccin de
Nitrato

BACTERIAS PIGENAS GRAM

NEGATIVAS
Otro grupo menos abundantes en especies pero de gran
importancia clnica son las bacterias pigenas gram
negativas, estos pueden ser cocos o cocobacilos.
Afectan frecuentemente el aparato genital o respiratorio.
Dichas enfermedades comprenden uretritis purulenta
(gonococos), meningitis, neumona, bronquitis, sinusitis,
otitis media, conjuntivitis, epiglotitis, etc.
Neisseria
Haemphilus
Bordetella
Moraxella

Gnero
Neisseria

Son diplococos Gram negativos, inmviles,

Solo dos especies de este gnero son patgenas
exclusivamente de humanos:
Neisseria gonorroheae o gonococo, agente causal de una
enfermedad de transmisin sexual, la gonorrea y
Neisseria meningitidis o meningococo productos
comensales para el hombre y que habitan principalmente el
tracto respiratorio superior.
Espordicamente se pueden comportar como patgenos
oportunistas N. sicca, N.mucosa, etc

Neisseria
gonorroheae

El diagnstico
definitivo de una
infeccin gonoccica
se hace por el
aislamiento en
cultivo de Neisseria
gonorroheae Para
el diagnstico de la
gonococia, el lugar
de toma de la
muestra depender
de la edad, sexo y de
las caractersticas de
la infeccin.

Son: Gram (+)

oxidasa (+)
Debe estar adems en una
atmsfera que contenga de 3 a
5% de CO2.

Se utilizan medios selectivos: Ejm Thayer- Martn

modificado, suplementado con agar chocolate y
que contiene Vancomicina, nistatina, colistina y
trimetropn - sulfametoxasol

La observacin de
colonias
circulares,
mucosas, grises,
brillantes y de
bordes lisos
pueden sugerir la
presencia de
Neisserias
Patgenas.

El
diagnostico
de
la
infeccin meningoccica, se
hace con el aislamiento de
N. meningitidis a partir de
LCR,
sangre,
liquido
sinovial,
pleural
o
pericardio.
El LCR se centrifuga y se
utiliza un sedimento para
efectuar un frotis y se tie
con Gram, se pueden poner
de manifiesto las neiserias
tpicas dentro de leucocitos
polimorfosnucleares o de
ubicacin extracelular

Pseudomona
Son bacilos Gram negativos mviles rectos o ligeramente curvos,
que son aerobios estrictos, la mayora de las cepas son mviles por
medio de uno o ms flagelos polares; utilizan glucosa y otros
hidratos de carbono de manera oxidativa; y suelen ser citocromo
oxidasa positivos
El gnero Pseudomonasse divide en cuatro grupos : Grupo
fluorescente, Grupo Stutzeri, Grupo Alcalgenes , Grupo con
pigmento amarillo.
Grupo fluorescente: Pseudomona aeruginosa, Pseudomona
fluorescens y Pseudomona putida , las cuales se
caracterizan por la produccin de un pigmento
pioverdina
Pseudomona aeruginosa , produce el pigmento hidrosoluble azul
llamado piocianina. Y tiene un aspecto caracterstico cuando crece
en una placa de agar sangre , se pueden observar grandes colonias
grises y presenta beta hemlisis. Las colonias tienen un aspecto de
piel de caimn y con brillo metlico

MUCHAS GRACIAS POR SU

ATENCION