AO DE LA INTEGRACION NACIONAL

Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD

BIOQUMICA II
UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGIA
MEDICA
ESPECIALIDAD DE LABORATORIO CLINICO Y ANAT.
PATOLOGICA

LIC. TRIGOSO AVALOS WILSON E.

CTMP 6226

ADENOSINA DEAMINASA
(ADA)
ESPERMATOGRAMA
Consideraciones Generales.
Fundamentos y caractersticas.
Interpretacin de la Bioqumica.

ADA
(ADENOSINA DEAMINASA)
Enzima esencial para el desarrollo
del Sistema Inmune.

ADENOSIN DEAMINASA (ADA)

Es una enzima del grupo de las Hidrolasas
involucrada en el catabolismo de las bases purnicas.
Cataliza la desaminacin irreversible de
adenosina y 2-deoxiadenosina
(nuclesidos endgenos)
encontrado en cantidades pequeas a travs del cuerpo

A Inosina y Deoxinosina respectivamente

liberando amonio (NH3) en el proceso.

ADENOSIN DEAMINASA (ADA)

La Funcin Fisiolgica Principal
Proliferacin y Diferenciacin Linfoctica
Marcador de inmunidad celular
Su actividad se encuentra aumentada
Enfermedades: Respuesta Inmune esta mediada por clulas

Se encuentra en Linfocitos T activados.

Presente en Lquidos Biolgicos de procesos inflamatorios
(mediados por inmunidad celular)

Micosis TBC
Alta sensibilidad y especificidad en TBC pleural, pericrdica,
menngea, articular y peritoneal.

ADENOSIN DEAMINASA (ADA)

La ADA tiene dos isoenzimas
ADA 1
Ampliamente distribuido (pH ptimo: 7 7.5)
Acta por igual sobre los sustratos
Regulando la Inmunidad Celular

ADA 2
Menos ubicuo, coexiste con la ADA 1
nicamente en Monocitos y Macrfagos
(pH ptimo: 6.5 y tiene afinidad dbil por la 2-deoxiadenosina)
Cuando Monocitos y Macrfagos son infectados por MO
(niveles de ADA 2 y 2-deoxiadenosina se incrementan)

ADENOSIN DEAMINASA (ADA)

La actividad de la ADA en los diferentes Fluidos
Una mezcla de ADA 1 y ADA 2
Estimar la cantidad precisa de cada isoenzima
es complicada y poco prctica.
ADA 2: esta relacionada a procesos de actividad
Linfocitos T y en especial en Tuberculosis
menngea y pleural.

Enfermedades que cursan

con disminucin de ADA

Inmunodeficiencia congnita combinada severa

Leucemia Linfoide Crnica B

Enfermedades que cursan

con aumento de ADA

Tuberculosis
Otras enfermedades infecciosas
Fiebre tifoidea
Brucelosis
Toxoplasmosis
Infeccin VIH
Hepatitis virales
Neoplasias malignas
Conectivopatas
Hepatopatas crnicas
Enfermedades hematolgicas
Trastornos de la eritropoyesis
Leucemias y sndromes proliferativos crnicos
Sarcoidosis
Artropatas inflamatorias

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
Mtodo de Referencia: Bruno Galant y Gitiseppe
Giusti
Punto Final Colorimtrico
ADA

Adenosina + H2O + (PO4)2-

Medio Tamponado

Iones Amoniaco

Inosina + Amoniaco
(560 nm)
Quinoneimina
+ 4 H2O

ADA cataliza la reaccin en un medio tamponado cido

Produce la liberacin de Inosina y amoniaco.
Iones de amonio (acido carblico-medio alcalino)
Producen una coloracin azul intenso (Quinoneimina)

DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD
ADENOSIN DEAMINASA (ADA)
Mtodo de Referencia: Galanti y Giusti modificado
Punto Final Colorimtrico
Adenosina + H2O
Iones Amoniaco

ADA

Medio Tamponado

Inosina + NH3
Indofenol + H2O
(640 nm)

El NH3 reacciona con el Hipoclorito de sodio y fenol a 37C

( con Nitroprusiato de sodio en medio alcalino como catalizador)
para formar indofenol de color azul intenso
que es medido a 640 nm.

Reactivos: Color 1 (Acido carblico); Color 2 (Hipoclorito de sodio);

Estndar (solucin de sulfato de amonio: 50U/L); conservar de 2 8 C
Buffer 6.5 (Fosfato de sodio); Adenosina (C10H13N504/ NaN3);
conservar temperatura ambiente

Blanco

Estndar

Blanco
Muestra

Muestra

Muestra

---

---

---

10 ul

Adenosina

---

---

250 ul

250 ul

Buffer 6.5

250 ul

250 ul

---

---

Estndar

---

10 ul

---

---

Color 1

500 ul

500 ul

500 ul

500 ul

Muestra

---

---

10 ul

---

Color 2

500 ul

500 ul

500 ul

500 ul

Mezclar, tapar los tubos e incubar a 37 C

durante 60 minutos; luego agregar:

CLCULO DE LOS RESULTADOS

ADA (U/L)

(Absorbancia Muestra Absorbancia Blanco muestra)

x Conc. Estndar

(Absorbancia Estndar Absorbancia Blanco Reactivo)

Ejemplo:
Abs. Muestra: 1.208
Abs. Bl. Muestra: 1.056
Abs. Estndar: 0.259
Conc. Estndar: 50 U/L
Abs. Bl. Reactivo: 0.062

(1.208 1.056) x 50 = 38.5 U/L

VALORES DE REFERENCIA
Suero: 11 22 U/L
Lquido Cefalorraqudeo: 0 6 U/L
Lquido Pleural: 0 45 U/L
Lquido Pericrdico: 0 20 U/L
Lquido Asctico: 0 40 U/L
Lquido Articular: 0 40 U/L
Relacin Liquido Pleural / Suero: < 1.3

UTILIDAD CLNICA
Establecer la actividad de la Tuberculosis Pulmonar
(marcador evolutivo de la respuesta al tratamiento
convencional de TBC pulmonar)
Diagnstico de la Meningitis Tuberculosa y en el
diagnstico Diferencial entre pleuresas tuberculosas y neoplasias.

ESPERMATOGRAMA
Espermograma
Seminograma

GENERALIDADES
Estudio de la pareja infrtil
Forma integrada y simultnea (siguiendo un protocolo)
Descartar los problemas ms frecuentes
en el hombre como en la mujer.
ANDROLOGA
Estudia la infertilidad masculina
y los mecanismos que lo producen
INFERTILIDAD
Incapacidad de tener hijos despus de haber mantenido 12
meses de relaciones sexuales
sin uso de mtodos contraceptivos

GENERALIDADES
INFERTILIDAD
MASCULINA PRIMARIA

INFERTILIDAD MASCULINA
SECUNDARIA

Cuando el varn nunca ha

logrado fecundar
a una mujer
(alteracin en la calidad de
liquido seminal)

Cuando el varn ha tenido

un hijo anteriormente, y en la
actualidad muestra alguna
alteracin en la calidad del
lquido seminal

Infertilidad no explicada:
Cuando los parmetros de
evaluacin del lquido
seminal no demuestra
ninguna anormalidad

Infertilidad idioptica:
Cuando se detecta una alteracin
en el espermatozoide y/o en la
calidad del lquido seminal y las
alteraciones no pueden ser
demostradas

ESPERMOGRAMA
Prueba esencial para el anlisis de la Infertilidad masculina
Estudio de las enfermedades genitales masculinas
El anlisis del semen o Espermograma
Evaluacin de los espermatozoides,
Lquido seminal y presencia de otras clulas (leucocitos, bacterias)
APORTA INFORMACIN:

Proceso de Espermatognesis
Funcin de los espermatozoides
Funcin de las glndulas sexuales accesorias

ESPERMOGRAMA
INDICACIONES DEL
ESPERMATOGRAMA
CARACTERSTICAS
GENERALES
DEL SEMEN
Infertilidad
Apariencia
Volumen
Infecciones Genitales
N EspermatozoidesVaricocele
Motilidad Morfologa
Prdidas
fetales recurrentes
Vitalidad
y presencia
de Leucocitos.
Vasectoma
Criptorquidia
Recuento y motilidad:
Determinar
Tratamientos
mdicossi hay suficientes
(quimioterapia,
sulfasalazina,
etc)al ovocito.
Espermatozoides
que puedan
alcanzar
Lesiones
en escroto
Morfologa:
Capacidad
de fertilizacin
Orquitis con paperas
Exposicin ocupacional a txicos
Vasovasostoma (Funcionales)
Pruebas Complementarias
(reversin de la vasectoma)

Correlaciona los resultados con posibles

alteraciones de los rganos genitales

TOMA DE MUESTRA
Recomendaciones de la Organizacin Mundial de la Salud (OMS)
La muestra debe ser coleccionada
despus de 3 a 7 das de abstinencia sexual.
Dos muestras deben ser colectadas para una evaluacin inicial.
Con un intervalo de no menos de siete das ni ms de tres meses.
Si los resultados de esos exmenes son marcadamente diferentes,
se deben examinar muestras adicionales.
Idealmente la muestra debe ser coleccionada en un bao privado
cerca al Laboratorio con la alternativa de hacerlo en el domicilio.
La muestra debe ser colectada previa higiene personal por
procedimiento de masturbacin y eyaculada en un frasco.
Muestras incompletas no deben ser analizadas.
Las muestras deben estar protegidas de temperaturas extremas.
Las muestras deben estar debidamente rotuladas con el nombre del
paciente, fecha y hora de coleccin.

PARMETROS MACROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
Evaluacin de la apariencia
Color (blanco gris claro- amarilloso), hematospermia
La licuefaccin
Coagulacin inmediata (para licuarse 5 40 minutos): PSA.
Determinacin del volumen
Mayor o igual a 2 ml.
La viscosidad o consistencia
Formacin de filamentos no mayor de 2 cm.
pH
Valor normal entre 7.2 7.8

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
ESTANDARIZACION DE LA METODOLOGA
Evaluacin de la motilidad
La vitalidad
Recuento y morfologa de los espermatozoides
Examen citobacteriolgico
Espermatozoides
Dilucin
Factores de conversin
Anticuerpos
antiespermatozoides
(aglutinacin)
por campo de
(semen + diluyente)
Numero de cuadrados contados
400X
25 SIN
10 DILUIR
5
ANALISIS MICROSCOPICO INICAL
Estimar el N de espermatozoides y decidir la dilucin
< 15
1:5 (1 + 4)
20
8
4
10 ul semen (100X): filamento de moco y aglutinacin
15 40
1:10 (1 + 9)
10
4
2
10 ul semen (400X): observar espermatozoides, decidir dilucin
40 200
1:20 (1 + 19)
5
2
1
Temperatura de evaluacin: 20 y 24 C
Parmetros
microscpicos
se deben procesar
> 200
1:50 (1 + 49)
2 por
0.8 duplicado.
0.4

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
MOTILIDAD
FACTORES QUE
AFECTAN LA MOTILIDAD
DE LOS ESPERMATOZOIDES
a:
Varicocele
Espermatozoides Desrdenes
con motilidad
progresiva rpida, a
Endocrinos
una velocidad
>Genitales
25 um /s a 37C
Infecciones
Anticuerpos antiespermatozoides
b:
Bacteriosperma
Espermatozoides conDefectos
motilidad
progresiva lenta, a una
en la cola
Anormalidades
en las entre
secreciones
de laum
prstata
vesculas
velocidad
5 y 25
/s a o37C
seminales
Hbito c:
del cigarrillo
Consumo
excesivo
del licor
Espermatozoides
con
motilidad
no
progresiva
Drogas
d:
Estrs
Espermatozoides inmviles

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
VITALIDAD
til: saber si los espermatozoides inmviles
estn vivos o muertos.
% espermatozoides VIVOS
Coloracin con eosina
(10 15 ul del semen + 50 ul eosina al 0.5%)
Contar 200 espermatozoides
(coloreados y no coloreados) a 400x.
Los vivos impiden la penetracin del colorante ,
Los muertos adquieren la coloracin.
El resultado se expresa en porcentaje

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
RECUENTO
Utilizar la cmara de Neubauer.
Cuadrante Central (Recuento de Glbulos rojos)

Se diluye el semen, 10 ul de dilucin en ambos lados de la cmara y se

procede a contar (200x - 400x)

10 spz. en cuadrante central: contar los 25 cuadrados

10 40 spz: contar 10 cuadrados
> 40 spz: contar slo 5 cuadrados
Los Resultados se promedian
El valor se divide por el Factor de Conversin
Resultado final: millones de espermatozoides /mL de eyaculado

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA
MORFOLOGIA
Examen detallado de 200 espermatozoides
Placa coloreada con PAP o Gram (por duplicado).
Utilizar aumento de 1000x
Segn la OMS: es normal encontrar
30% de los espermatozoides normales en los individuos frtiles
20% de morfologa normal
EVALUACION DE LAS ANORMALIDADES

Defectos de la cabeza
Segmento intermedio
Cola
Presencia de gotas citoplasmticas

PARMETROS MICROSCPICOS
DEL ESPERMOGRAMA

AGLUTINACION
Sugestiva de presencia de anticuerpos antiespermatozoides
Evaluar al momento de determinar la motilidad
Se reporta
semicuantitativamente
escala
de cruces
PRUEBAS
ESPECIALIZADASenDEL
SEMEN
Cultivo del semen
Acido ctrico
ANTICUERPOS ANTIESPERMATOZOIDES
Zinc
Pueden inducir la aglutinacin,
inmovilizacin
Fructosa
cida
o lisis de Fosfatasa
los espermatozoides
hinchazn hipo-osmtica
Son Pruebas
del tipodeIgA
e IgG (rara vez IgM)
Penetracin en ovocito de hmster
Tcnica: Inmunoesferas
reaccin
mixta de
Pruebas de unin aylalazona
pelcida
Pruebas
de reaccin(MAR)
acrosomal
Antiglobulina

BIOQUIMICA SEMINAL
ORIGEN

COMPUESTO

VESICULA SEMINAL

PRSTATA

EPIDDIMO

FRUCTUOSA, ACIDO ASCRBICO

ZINC, FOSFATASA ACIDA Y ACIDO CITRICO

ALFAGLUCOSIDASA - GLICERILFOSFORILCOLINA

ALFAGLUCOSIDASA

Marcador de la Funcin del Epiddimo

FRUCTUOSA CORREGIDA y PROLACTINA

Marcadores de la Vescula Seminal

FOSFATASA ACIDA y ZINC

Marcadores de la Funcin Prosttica

MTODOS USADOS EN
BIOQUIMICA SEMINAL
ALFAGLUCOSIDASA: Mtodo Descrito por Cooper y Col.
Valor referencial: Mayor de 80 mU / eyaculado
ZINC: Mtodo Descrito por Lampugnani y Col.
Valor Referencial: 80 - 250 ug /ml
FOSFATASA ACIDA: Mtodo Colorimtrico
Valor referencial : 400 - 700 U/L
FRUCTUOSA : Mtodo Colorimtrico
Valor Referencial: 1.2 - 4.0 mg /ml
FRUCTUOSA CORREGIDA : Mtodo Dr. Gonzlez
Valor Referencial: 2.5 - 2.8 mg/ml/mill. Espermt /ml

NOMENCLATURA DE ALGUNAS
VARIABLES DEL LQUIDO SEMINAL
TERMINO

DESCRIPCION

NORMOZOOSPERMIA
OLIGOZOOSPERMIA
POLIZOOSPERMIA
ASTENOZOOSPERMIA

Eyaculado normal
< de 20 millones de spz por mL
Ms de 250 millones de spz por mL
< 50% de spz con motilidad progresiva (a y b)
< de 25% de spz con motilidad de categora a
Menos de 30% de spz con morfologa normal
Alteracin de las tres variables
Ausencia de espermatozoides en el eyaculado
Ausencia de eyaculado
Ms de 6 mL de eyaculado
Menos de 2 mL de eyaculado
Ms del 40% de espermatozoides muertos

TERATOZOOSPERMIA
OLIGOASTENOTERATOZOOSPERMIA

AZOOSPERMIA
ASPERMIA
HIPERESPERMIA
HIPOSPERMIA
NECROZOOSPERMIA

VALORES NORMALES
DEL ESPERMOGRAMA (segn la OMS)
PARMETRO
VOLUMEN
pH
TIEMPO DE LICUEFACCIN
CONCENTRACIN DE SPZ
RECUENTO TOTAL DE SPZ
MOTILIDAD
MORFOLOGA
LEUCOCITOS
FRUCTUOSA
FRUCTUOSA CORREGIDA
FOSFATASA ACIDA
ZINC
ALFAGLUCOSIDASA
PROLACTINA SEMINAL
INMUNOPERLAS

VALORES NORMALES
> 2 mL
7.2 a 7.8
< de 30 minutos
20 A 250 X 106 / mL
40 X 106 / mL
> 50% (categora a y b )
> 25 % (categora a)
> 30% de formas normales
< 1 X 106 / mL
1.2 - 4.0 mg / mL
2.5 - 8.0 mg/ml/mill spz/mL
400 - 700 u / L
80 - 250 ng / mL
> 80 mU / eyac.
6 - 23 ng /mL
< 10 % de spz, adheridas a las perlas.