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Diagnstico Laboratorial

Anemias Hereditrias
Prof. Paulo Roberto de Melo Reis

Contedo do eritrcito

250 a 350 milhes de molculas de


hemoglobina

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Gentica da hemoglobina
Cadeia beta

146 aa

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Cadeia alfa

141 aa

Hemoglobinas fisiolgicas
A combinao de duas
cadeias alfa ( ) com duas
beta ( ) formam as
hemoglobinas. Portanto, a
hemoglobina tem
estrutura tretamrica.

2 2
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Tipos de Hb aps 6 meses de


vida
Tipos de Hb
A
A2
FETAL

Composio

Concentrao

22

96 98%

22

2 4%

22

0 1%

Dados: Paulo Csar Naoum Hemoglobinopatias e Talassemias


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Conduta teraputica na anemia microctica hipocrmica


ANEMIA
TRATAMENTO
Avaliao entre 30 e 60 dias

Responsiva

Cura

No responsiva

Ferro Normal
e ferritina

Refratria ao tratamento

Anemia hereditria
Talassemia ( alfa, beta)
Hemoglobinopatia

Anemia adquirida
Sideroblstica

Anemias Hereditrias
um grupo heterogneo de distrbios hereditrios
que ocorre por alteraes gnicas dos
cromossomos
e que apresentam como
conseqncia
alteraes
de
membrana,
deficincia de produo enzimtica e de
preenchimento hemoglobnico do eritrcito,
tanto qualitativa quanto quantitativamente .

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Anemias Hereditrias

A histria familiar e descendncia tomam


carter decisivo na elucidao das
anemias hereditrias, em especial as
hemoglobinopatias e talassemias.

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Anemias Hereditrias
Defeitos de
membrana

Defeitos
metablicos

Defeitos na
hemoglobina

Esferocitose

Piruvato quinase

Sntese deficiente:

Ovalocitose

Pirimidina 5nucleotidase

Talassemia ;

Estomatocitose

G-6-FD
Glutitiona redutase

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Variantes anormais:

HbS,
HbC

Prevalncia de anemias
hereditrias no Brasil
Talassemia alfa mnima
Talassemias alfa menor
Deficincia de G6FD
Hb AS
Talassemia Beta menor
- Descente de Italiano
Hb AC
Esferocitose
Eliptocitose
Talassemia Beta maior

20 - 25%
3 6%
3% em brancos
15% em negros
2% em brancos
10% em negros
1%
6%
0,5 %
3% em negros
1:500
1:500
2,5:100.000

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PRINCIPAIS TIPOS DE TALASSEMIAS

TALASSEMIA ALFA
TALASSEMIAS BETA
TALASSEMIAS INTERATIVAS
FENTIPOS TALASSMICOS

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ORIGEM DAS TALASSEMIAS

Talassemia alfa sia e frica


Talassemia beta Mediterrneo

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Talassemia beta
Definio
As talassemias beta ocorrem por falha do gene que
sintetiza a globina beta, situados no cromossoma 11.
A diminuio da globina beta prejudica sua associao
com a globina alfa

NORMAL

TAL. BETA
MENOR

TAL. +
MAIOR

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TAL. 0
MAIOR

CLASSIFICAO CLNICA DAS


TALASSEMIAS BETA
MAIOR

INTERMDIA

MENOR

HEMOGLOBINA (g/dl)

<7

7 - 10

10 - 13

RETICULCITO

2 - 15

2 - 10

2-5

ERITROBLASTO

+++

+ +/ +

ERITRCITOS

+++

++

--+

MNIMA
> 13
0,5 - 2
--+/-

ALTERADOS
+/-

---

---

ICTERCIA

++

ESPLENOMEGALIA

+++

++

-/+

-- -

ALTERAES

+ + +/ + +

++

---

---

ESQUELTICAS
NECESSIDADE DE

+++

+/-

TRANSFUSES

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---

---

Talassemia Beta

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Talassemia beta

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Pontilhado basfilo

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Talassemia beta

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Talassemia Beta

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TALASSEMIA ALFA
CONSEQNCIAS da LESO GENTICA
NO CROMOSSOMO 16

O DESEQUILBRIO /.

Sobra cadeia que tetramerizam-se


FORMANDO Hb H ( 4)

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RESUMO DAS ALTERAES


LABORATORIAIS

()

Hb Fetal

0 - 1%

Hb A2

2,0 - 4%

Hb A

96 - 98%

Conseqncias da reduo de
sntese de cadeias alfa

ALFA TALASSEMIA

Traos de Hb H na eletroforese
Precipitados de Hb H nos eritrcitos
Discreta microcitose

Anemia ()
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RESUMO DAS ALTERAES LABORATORIAIS

DOENA DE Hb H

( )

Hb H (10 - 20%) na eletroforese

Precipitados de Hb H nos eritrcitos


Anemia microctica - hipocrmica (+, ++)
HCM
Hb A2
Esplenomegalia

Sndrome hidrpica (Hidropsia Fetal)


Hb Barts 80 - 100%
Hb H 10%

Anemia eritroblstica (++++)

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Talassemia alfa Relaes laboratoriais


Mnima

Menor

Doena da
Hb H

Hidropisia
fetal

VCM

74-85

72-80

60-72

80-100

Hb

11-15

10-13

8-10

<7

Traos2%

2 -5

5-20

0-20

% Hb
H

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Talassemia alfa
Resumo:
Hemoglobina H:
Tetrmero de
cadeias beta
Hb H = 4

Hemoglobina de
Barts:
Tetrmero de
cadeias gama
Hb Barts = 4

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Talassemia alfa
Hidropisia fetal

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Hemoglobinas variantes
um grupo de anormalidades hereditrias
em que a produo de hemoglobina
normal suprimida e substituda, parcial
ou totalmente, pela formao de uma ou
mais
das
muitas
variantes
hemoglobnicas.

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Hemoglobina S
causada por uma mutao no gene beta da
globina.
H substituio de um base nitrogenada do
cdon GAC para GTC, resultando na
substituio do cido glutmico (Glu) pela
valina (Val) na posio 6 da globina beta.

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HISTRICO DA DOENA FALCIFORME

1835 - CRUZ JOBIM (BR)


1846 - LEBBY (USA)
1896 - HODENPY (USA)
1908 JESSE ACIOLY(BR)

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PACIENTES
NEGROS
COM ANEMIA GRAVE
ICTERCIA
DORES AGUDAS

Hemoglobina C
causada por uma mutao no gene beta da
globina.
H substituio do cido glutmico (Glu)
pela lisina (Lis) na posio 6 da globina
beta.

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CLULAS EM ALVO NA Hb C/TAL BETA

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Hemoglobina D
D Los Angeles o c. glutmico (Glu)
substitudo pela glutamina (Gln) na posio 121
da globina beta.
D Bushman A Glicina (Gli) substituda pela
arginina (Arg) na posio 16 da globina beta.

OUTRAS
Apresenta a mesma mobilidade eletrofortica da Hb S
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Hemoglobina E
causada por uma mutao no gene beta da
globina.
H substituio do lisina (Lis) substituda pelo
cido glutmico (Glu) na posio 26 da globina beta.
Tem mobilidade eletrofortica ligeiramente a
frente da Hb C causando confuso.
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HEMOGLOBINAS VARIANTES
CERCA
DE
400
TIPOS
DIFERENTES
SEM
CONSEQUNCIAS PATOLGICAS. Ex. Hb N, Hb J, Hb G,
Hb Porto Alegre

APENAS Hb S E Hb C CAUSAM PATOLOGIA


Hb S (SS, SC, SD, S/Tal) FALCIZAO DO ERITRCITO
Hb C (SC, CC, S/Tal) CRISTALIZAO DA Hb

Mtodos para diagnosticar hemoglobinopatias e


talasemias
Mtodos auxiliares:
1. Resistncia globular a salina 0,36%
2. Dosagem de Hb Fetal
3. Pesquisa de Hb Fetal
4. Teste de Falcizao
5. Pesquisa de Talassemia Alfa (Hb H)
6. Pesquisa de Corpos de Heinz
Mtodos bsicos:
1. Eletroforese Alcalina
2. Eletroforese cida
3. Dosagem de A2
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Talassemias
LABORATRIO ESPECFICO

presena de Hb H: Tal. alfa


aumento de Hb A2: tal. beta menor
diminuio ou ausncia de Hb A: ta l. beta maior
elevao > 20% de Hb fetal: tal. beta maior
reticulocitose: anemias hemolticas
aumento
hemolticas

de

bilirrubina

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indireta:

anemias

Triagem
Teste

de resistncia globular a salina 0,36%

Interpretao: Deficincia de hemoglobinizao


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Dosagem de Hemoglobina Fetal


Mtodo de:
1) Singer concentraes
2) Betke - concetraes

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Colorao intra-eritrocitria de
Hemoglobina Fetal
Princpio:
A hemoglobina Fetal
acido-resistente e no
sofre eluio. Cora-se
pela eritrosina. As
outras hemoglobinas
so eluidas e no se
coram pela eritrosina

Mtodo de Kleihauer e Betke (modificado por Shepard e cols., 1962)


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Teste de falcizao das hemcias


Metabissulfito de sdio a 2%
Princpio:
O metabisulfito de
sdio reduz a tenso
de
oxignio
e
fazendo com que
hemoglobina S tome a
forma caracterstica
de foice, ou de meialua.
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Pesquisa intra-eritrocitria
Hemoglobina H
100 ul sangue
200 ul ACB
Incubar 2 horas

Pesquisa intra-eritrocitria Azul brilhante de cresil


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Talassemia alfa Hemoglobina H

Pesquisa intra-eritrocitria Azul brilhante de cresil


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Corpos de Heinz Hemoglobinas instveis

Pesquisa intra-eritrocitria Azul brilhante de cresil


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Pesquisa intra-eritrocitria
Hemoglobina H Corpos de Heinz
Hemoglobinas instveis
100 ul sangue
200 ul ACB
Incubar 2 horas

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Reticulcitos

100 ul sangue
100 ul ACB
Incubar 30 minutos

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Reticulcitos

Azul brilhante de cresil


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Comparao

Hb H

Corpos de Heinz

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Reticulcitos

Eletroforese
Eletro = Eletricidade
Forese = Separao

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Eletroforese
a migrao de partculas quando
colocadas em campo eltrico.

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Eletroforese
A migrao indica o sinal da carga
da partcula.
Este sinal ser oposto ao do plo
para onde ir migrar.

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Eletroforese de hemoglobina
ACETATO DE CELULOSE:
Preparao do hemolisado
Tampo TRIS - pH=8,6
Padro ( hemolisado controle)

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Eletroforese de hemoglobina
ACETATO DE CELULOSE:
Preparao do hemolisado teste e padro:
50 ul de sangue
100 ul de saponina a 1%

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Eletroforese de hemoglobina
ACETATO DE CELULOSE:
Importante
A hemoglobina H instvel e os solventes
usados para remoo do estroma das
hemcias ( ter, clorofrmio, toluol, etc)
desnaturam a Hb H

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Eletroforese de Hemoglobina.
Hemoglobina H
HbH

+
A

AC

A2

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Eletroforese de hemoglobina

Eletroforese em acetato de celulose TEB pH=8,6


Hemolisado com saponina a 1%.
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Talassemia alfa Detalhe


Hb H

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Eletroforese de Hemoglobina.
Padro normal

+
Ap

AC

A2

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ELETROFORESE DE HEMOGLOBINAS

Perfil eletrofortico comparativo


AP

AC

A2/C

S/D

AA
AS
SS
AC
CC
AF
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PERFIL

Eletroforese de hemoglobina

Eletroforese em acetado de
celulose - Tampo TEB
pH=8,6.
Hemolisado com soluo
de saponina a 1%.
SC
AA
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AC

AS

SC

ELETROFORESE DE Hb BARTS E Hb H

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ELETROFORESE DE Hb EM RN E ADULTO

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ELETROFORESE DE Hb EMBRIONRIAS

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HEMOGLOBINAS NORMAIS APS SEIS MESES DE


VIDA

Hb A

96 a 98%

Hb A2

2 a 4%

Hb Fetal

0 a 1%

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VARIANTES RARAS NO
PATOLGICAS
Hb PORTO ALEGRE

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VARIANTES RARAS NO
PATOLGICAS
Hb N BALTIMORE

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VARIANTES RARAS NO
PATOLGICAS
Hb G FILADELFIA E Hb F TEXAS

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MUTAES NAS REGIES EXTERNAS


ELETROFORESE DE HEMOGLOBINAS EM ACETATO DE
CELULOSE

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MUTAES NAS REGIES EXTERNAS


FAMLIA COM Hb C/TAL BETA

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Eletroforese de hemoglobina

Eletroforese em gar cido fosfato pH=6,2


Hemolisado com saponina a 1%.
Indicao: Diferenciar HBS da HBD-HBC da HBE
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Padro laboratorial
Hemoglobina S
Homozigtica
HbS 89 a 99%
HbA Ausente
HbA2 1,5 a 3%
HbF 1 a 2 %

Heterozigtica
20 a 40%
60 a 80%
1,5 a 3%
1a2%

Hemoglobina C
HbC 100 %
HbA Ausente
HbF < 7%

20 a 40 %
60 a 80%
Ausente

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Ordem de migrao de
algumas hemoglobinas

HbA2
HbD e HbS
HbL e HbP
HbG
HbQ
HbF
HbA
HbM e HbK
HbJ
HbN
Hb de Bart, HbI e HbH.

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Outras hemoglobinas

HbG Norfolk
Hb de Bart
Hb Lepore
Hb Porto Alegre
Hb Gun Hill
Hb Freiburg
HbM Boston
HbM Saskatoon
HbM Iwate
HbM Hyde Park
HbF Texas
HbF Roma
Etc

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Hemoglobinopatias
HbD Homozigoto HbD/HbD - Semelhante a HbS,
porm, pela ausncia do fenmeno drepantico.
O estigma HbA/HbD assintomtico.
Ocorre: ndia e pequena % de negros nos EUA

HbE Homozigoto HbE/HbE.


O estigma HbA/HbE assintomtico.
Ocorre: Sudeste Asitico.
HbS/HbC = 50% de cada.
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Eletroforese
antes da transfuso
Ap AC

A2 /C

A
Hb SS
Hb CC
Hb SC

Eletroforese
aps a transfuso
Ap AC

A2 /C

A
Hb SS
Hb CC
Hb SC