IA R

G A
O
L
L U 7.
O C D
I
B LE I D A
O UN
M

QU ES LA BIOLOGIA
MOLECULAR?
Es la disciplina que estudia los procesos que se
desarrollan en los seres vivos desde el punto de vista
molecular.
Estudia la estructura, funcin y composicin de las
molculas biolgicamente importantes.
Esta rea se relaciona con otros campos de la
Biologa y la Qumica, particularmente Ingeniera
gentica y Bioqumica.

OBJETIVO DE LA BIOLOGA
MOLECULAR
La

biologa molecular concierne principalmente al

entendimiento de las interacciones de los diferentes

sistemas de la clula, lo que incluye muchsimas
relaciones, entre ellas las del ADN con el ARN, la sntesis
de protenas, el metabolismo, y el cmo todas esas
interacciones son reguladas para conseguir un correcto
funcionamiento de la clula.

HERRAMIENTAS DE LA BIOLOGA
MOLECULAR

GENETICA
Es una
disciplina que
estudia los
mecanismos por
los cuales los
caracteres se
transmiten de
un organismo a
otro y como se
expresan

Es una
herramient
a de
primera
magnitud

Agricultura
Industria
Permite
modificar
Medicina
especficamen Gentica de
te a los
microorganis
organismos mos

HERRAMIENTAS DE LA BIOLOGA
MOLECULAR

GEN
Entidades
que
codifican
un la
estructura
de un
nico
polipptid
oo
protena

APLICACIN
Es un
elemento
de
informaci
n que
codifica
una
secuencia
de
aminocid
os de la
protena

APLICACION
El GEN es
un
almacn
de
informaci
n, las
protenas
son
entidades
funcionale
s

INSTRUMENTOS
DE APLICACION
ADN, ARN,
PROTEINAS
Macromolcula
s de
informacin
Contienen
informacin
biolgica en las
secuencias

ESTRUCTURA DE
ADN

Guarda
la
informacin
gentica
Adenina, Guanina, Citosina,
Tiamina
Fosfato y Desoxirribosa
Los
cromosomas
de
organismos celulares tienen
ADN
en
dos
cadenas
polinucletidas
Las cadenas de doble hlice
son antiparalelas, 5 a 3 de
arriba hacia abajo, 5 a 3 de
abajo hacia arriba
Numero de miles de bases, o
pares de bases por molcula,
(kilobases)

LINEAL

INVERTIDA

BUCLE

CURVADO

CIRCULA
R

HORQUILLA

EFECTO DE LA TEMPERATURA
EN LA ESTRUCTURA DEL ADN

En direccin positiva o
negativa.
Negativa: se tuerce a lo
largo de su eje en
direccin opuesta a la de
la doble hlice. Esta se
encuentra
en
la
naturaleza.
Procariotas:
GIRASA
(TOPOISOMERASA)

DNA

ADN SUPERENRROLLADO

E. Coli tiene mas de 50

superenrollamientos

RONLLAMIENTO POR ACCION DE TOPOISOMERA

CLASES DE ELEMENTOS GENETICOS

ELEMENTO

DESCRIPCION
PROCARIOTA

Cromosoma

Molcula de ADN bicatenario, muy largo

generalmente circular

Plsmido

Molcula de ADN bicatenario extra cromosmico,

relativamente corto y generalmente circular

Genoma vrico

Molcula de ADN ARN de cadena doble sencilla

Elemento
transponible

Molcula de ADN bicatenario que se encuentra

siempre dentro de otra molcula de ADN
EUCARIOTA

Cromosoma

Molcula de ADN bicatenario lineal,

extremadamente larga

Plsmido

Molcula de ADN bicatenario extra cromosmico,

corto, circular lineal

Mitocondria
cloroplasto

Molcula de ADN, circular de longitud intermedia

Genoma vrico

Molcula de ADN ARN de cadena doble o sencilla

Elemento
transponible

Molcula de ADN bicatenario que se encuentra

siempre dentro de otra de ADN

CROMOSOMA

PLASMIDO

ADN, PROTEINAS

INDEPENDIENTE
S DE
CROMOSOMAS

HISTONA
(LISINA,
ARGININA)

GENES
(ADN)

NO CAUSAN
DAO A LA
CELULA

PROCARIOTAS

MITOCONDRIA
Y CLOROPLASTO

REPLICAN DE
MANERA
INDEPENDIENT
E

SINTETIZAN
RIBOSOMAS,
ARNt,
COMPONENTES
NECESARIOS

ELEMENTOS
TRANSPONIBLE
S

SE MUEVEN DE
UN LUGAR E
OTRO

CROMOSOMA

ERRAMIENTAS DE LA BIOLOGIA MOLECULA

SISTESIS DEL ADN

La replicacin del DNA es el proceso por el cual el
DNA

es

perpetuado.

semiconservativo,

esto

Es

un

quiere

decir

proceso
que

las

molculas finales contienen una hebra nueva, recin

sintetizada, y la complementaria, hebra antigua, que
sirvi como templado (molde).

El DNA es replicado por DNA polimerasas, esta utiliza

una hebra, sobre la cual realizan la sntesis de la
hebra

complementaria

utilizando

los

desoxinucletidos trifosfatos adecuados. La cadena

de DNA naciente siempre crece en sentido 53, es
decir, el nucletido que se agrega une su -fosfato al
grupo 3-OH libre de la cadena en sntesis, este
enlace ocurre entre las pentosas que componen los
nucletidos.

Durante el proceso de replicacin se forman diferentes

estructuras:
1. Ojo De Replicacin.
2. Fragmentos De Okazaki.
3. Hebra Lder.
4. Hebra Discontinua.

Este proceso se lleva adelante por una variedad de

enzimas:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

DNA Polimerasa I.
DNA polimerasa II.
DNA polimerasa III.
Girasa
Primase
Helicasa
Ligasa

1. OJO DE REPLICACION:
Es la estructura que se forma al separase la doble hebra de DNA
durante la replicacin. En ella se pueden distinguir los llamados
tenedores de replicacin, esto pueden ocurrir en una o ambas hebras
y es donde esta ocurriendo la sntesis de DNA.
2. FRAGMENTOS DE OKAZAKI:
Estos son los Fragmentos de RNA-DNA que son resultados de la
sntesis de DNA en la hebra discontinua. Estos son sintetizados en
direccin 53 pero discontinuamente, luego de la remocin de los
primeros (RNA) son unidos por la DNA Ligasa.
3. HEBRA LIDER:
Es la hebra donde la sntesis de DNA esta ocurriendo en forma
continua.
4. HEBRA DISCONTINUA:
Es la hebra donde la sntesis de DNA, en esta podemos encontrar los
fragmentos de OKAZAKI.

ENZIMAS DE LA REPLICACION

1. DNA POLIMERASA I:
Esta enzima cuenta con tres actividades. Tiene actividad polimerasa, de
sntesis en direccin 53. Una actividad 35 exonucleasa, remocin de
nucletidos errneos o conocida como proofreading o revisora. Y
finalmente, una actividad 53 exonucleasa, que a partir de un nick
(rompimiento del enlace entre dos nucletidos vecinos) resintetiza una
porcin de DNA removiendo la ya existente. Esta enzima no lleva a cabo el
proceso de replicacin. Estara involucrada en la sntesis de los primeros.

2. DNA POLIMERASA II:

Con actividad exonucleasa 35 esta involucrada en procesos de
reparacin de DNA.
3. DNA POLIMERASA III:
Esta es la enzima que realiza el proceso replicativo, su funcin es la sntesis
de DNA. Tambin cuenta con actividad revisora, 35 exonucleasa.
4. DNA GIRASA:
La DNA Girasa esta encargada de desempaquetar el DNA, en eucariontes
se encuentra unido a protenas y sufre procesos de enrollamiento que lo
hacen inaccesibles para la DNA Pol III, por esta razn es necesario su
desenrollamiento para que la replicacin se pueda llevar a cabo.

5. PRIMASA:
Enzima en cargada de la sntesis de los primeros (partidores) para
la sntesis del DNA en E. coli. Esta inicia los fragmentos de
Okazaki. En eucariontes este proceso lo llevara acabo la DNA Pol
1.
6. HELICASA:
Esta enzima esta encargada de separar la doble hebra de tal
forma que se puedan formar los primeros y luego se lleve a cabo
la replicacin.
7. LIGASA:
La Ligasa va a unir los fragmentos de Okasaki o aquellas zonas
del DNA donde se hayan producidos nicks

REPARACIN Y MUTAGENESIS
DEL ADN
Las mutaciones suponen la alteracin del genotipo, o constitucin
gentica del individuo, y en ocasiones tambin del fenotipo que son
las caractersticas externas del individuo. Las mutaciones ocurren al
azar, esto se descubri en un experimento en el que se hicieron 10
cultivos a cada cultivo se le aadi el fago T1, clulas de E. coli. Si
las mutaciones no ocurren al azar cabra esperar que el nmero de
colonias resistentes fuera ms o menos igual en cada cultivo, si la
mutacin es al azar se espera gran variabilidad en el nmero de
colonias resistentes en cada tubo. As, se comprob, que la
mutacin era al azar.
Las mutaciones pueden afectar a uno (puntuales), unos pocos
(pseudopuntuales) o a un gran nmero de nucletidos de una
secuencia de ADN (cromosmicas).

TIPOS DE MUTACIONES
PUNTUALES Y PSEUDOPUNTUALES

CROMOSOMICAS

Cambios de Fase

Delecciones

Transiciones

Duplicaciones

Transversiones

Inversiones

Dileccin

Translocaciones

Insercin

MUTACIONES ESPONTNEAS
ERRORES EN REPLICACION DE ADN

Transiciones

Transversiones

Desaminacion

Cambios de Fase

Despurinizacion

EFECTOS DE LOS CAMBIOS

Se expresan cuando el gen pasa a su protena correspondiente. Los
efectos de los cambios pueden ser:
Cambios de sentido: se cambia un aminocido por otro
Sin sentido: la mutacin se produce porque se transforma en un
codn de terminacin.
Desfases: si hay una delecin de la base, la pauta de lectura
cambia y se produce un gran cambio en la protena y es muy
grave.
Mutaciones silenciosas: son mutaciones sin efecto: UUU (Phe)--> UUC (Phe)
El aminocido que cambia es muy parecido y la protena sigue
funcionando.
En eucariotas tienen un efecto muy grave ya que pueden provocar
enfermedades, se dan sobre todo, cuando hay una delecin de
5.000 pb (pares de bases) que afecta a dos genes y producen la
enfermedad como problemas respiratorios de inteligencia.

MUTACIONES INDUCIDAS
Existen puntos de un gen donde la mutacin es ms
frecuente se llaman PUNTOS CALIENTES. Al genotipo
silvestre o salvaje se le utiliza como patrn y en el que se
produce la variacin se le llama mutante.
Una estirpe mutante puede cambiar a otra y luego volver a
la inicial, a esto se le llama regresin. Los mutantes se
inducen con mutgenos que son de varios tipos y cada uno
induce una mutacin distinta, aunque suele ser al azar.

MUTAGENICOS QUIMICOS

ANALOGOS
DE BASE

MODIFICAD
OR DE BASE

PERDIDA DE
EMPAREJAMI
-ENTO
ESPECIFICO

RADIACIONE
S

TEST DE AMES
Es un test para detectar la carcinogenicidad. Utiliza
dos mutaciones de auxotrofa para histidina que
revierten por diferentes mecanismos moleculares.
Llevan una mutacin que inactiva el sistema de
reparacin por escisin, y otra que elimina la
cubierta protectora.

SUPRESIN Y REVERSIN
Se explica mediante un ejemplo. Si tenemos una mutante de E.
coli que no crece en un medio sin histidina, es his-

y es

auxtrofo. El silvestre se llama his+.

Sometemos el mutante a mutgenos y puede pasar a his+, y es
una reversin. En este mutante puede ocurrir una reversin
verdadera o una reversin equivalente.
Se produce una supresin cuando la segunda mutacin se
produce en otro sitio pero s se convierte en his+. Es una
complementacin intergnica.
La supresin intergnica consiste en una mutacin en otro gen
distinto de donde ocurri la primera.
La supresin intragnica consiste en una mutacin supresora en
el

mismo

gen

que

ocurri

la

supresin

inicial.

La

complementacin intragnica se produce sobre todo en protenas

MECANISMOS DE REPLICACION
Replicacin
directa
Dependiente
de
replicacin
Escisin
Sistema GO
Sistema SOS
Reparacin
Postreplicativ
a

RECOMBINACION DEL ADN

Es el proceso por el cual una hebra de material gentico
(usualmente ADN; pero tambin puede ser ARN) es rota y
luego unida a una molcula de material gentico diferente. La
recombinacin

de

eucariotas

comnmente

se

produce

durante la meiosis como entrecruzamiento cromosmico

entre los cromosomas apareados. Este proceso conduce a
que la progenie tenga diferentes combinaciones de genes de
sus padres y puede producir alelos quimricos.

TIPOS DE RECOMBINACION
GENETICA
Recombinacin
homloga
La recombinacin
homloga (tambin
llamada recombinacin
general) sucede durante
la profase I de la meiosis
tiene lugar entre las
largas regiones de ADN
cuyas secuencias son
homlogas, es decir
altamente similares pero

El entrecruzamiento cromosmico se refiere a la recombinacin

entre los cromosomas apareados heredado de uno de los padres,
generalmente ocurre durante la meiosis. Durante la profase I, en la subfase

de

paquitene,

las

cuatro

cromtides

disponibles

estn

estrechamente posicionadas una con respecto a la otra. Mientras en

este formacin, los sitios homlogos en las dos cromtides pueden
coincidir entre s, y pueden intercambiar informacin gentica.
Como la recombinacin puede producirse con baja probabilidad en
cualquier lugar del cromosoma, la frecuencia de recombinacin entre
dos puntos depende de sus distancia. Por lo tanto, para genes
suficientemente distantes en el mismo cromosoma la cantidad de
recombinacin es lo suficientemente alta para destruir la correlacin
entre alelos. el entrecruzamiento ocurre en la meiosis en la fase :
anafase 1

En clulas B
Las clulas B del sistema inmunitario realizan una
recombinacin gentica llamada cambio de clase de
inmunoglobulinas. Es un mecanismo biolgico que cambia un
anticuerpo de una clase a otra, por ejemplo, de un isotipo
llamado IgM a otro llamado IgG.
Conversin gnica
En la conversin gnica, una seccin de material gentico es
copiada de un cromosoma a otro, pero deja el cromosoma
donante sin cambios.

Recombinacin especfica de sitio

Otro tipo de recombinacin es la especfica de sitio que tiene lugar por
rotura y posterior unin de regiones de homologa corta y especfica de
dos ADN diferentes, o dentro de la misma molcula. Ocurre en virus
(por ejemplo, el bacterifago T4) y en plsmidos.
Recombinacin no homloga
La recombinacin puede ocurrir entre secuencias de ADN que no
contienen
secuencias
homlogas.
Esto
es
conocido
como
recombinacin no homloga. Acontece raramente en procariotas y
levaduras, pero es ms frecuente en clulas de mamferos.

DISEO DE MICROORGANISMOS
RECOMBINANTES

LA EXPRESION GENETICA
Es el proceso por medio del cual todos los organismos
procariotas y eucariotas transforman la informacin codificada
en los cidos nucleicos en las protenas necesarias para su
desarrollo y funcionamiento. En todos los organismos, inclusive
los eucariotas, el contenido del ADN de todas sus clulas es
idntico. Esto quiere decir que contienen toda la informacin
necesaria para la sntesis de todas las protenas. Pero no todos
los genes se expresan al mismo tiempo ni en todas las clulas.
Hay slo un grupo de genes que se expresan en todas las clulas
del organismo y codifican protenas que son esenciales para el
funcionamiento general de las clulas y son conocidos como
genes constitutivos.

EL PROCESAMIENTO DEL ARN Y SU

TRADUCCION
La traduccin es el segundo proceso de la sntesis proteica. La
traduccin ocurre tanto en el citoplasma, donde se encuentran los
ribosomas, como tambin en el retculo endoplasmtico rugoso
(RER). Los ribosomas estn formados por una subunidad pequea y
una grande que rodean al ARNm. En la traduccin, el ARN mensajero
se decodifica para producir un polipptido especfico de acuerdo con
las reglas especificadas por el cdigo gentico. Es el proceso que
convierte una secuencia de ARNm en una cadena de aminocidos
para formar una protena. Es necesario que la traduccin venga
precedida de un proceso de transcripcin. El proceso de traduccin
tiene cuatro fases: activacin, iniciacin, elongacin y terminacin
(entre todos describen el crecimiento de la cadena de aminocidos, o
polipptido, que es el producto de la traduccin).

En la activacin, el aminocido (AA) correcto se une al ARN de

transferencia (ARNt) correcto. El AA se une por su grupo carboxilo
con el OH 3' del ARNt mediante un enlace de tipo ster. Cuando el
ARNt est enlazado con un aminocido, se dice que est "cargado".
La iniciacin supone que la subunidad pequea del ribosoma se
enlaza con el extremo 5' del ARNm con la ayuda de factores de
iniciacin (FI), otras protenas que asisten el proceso. La elongacin
ocurre cuando el siguiente aminoacil-ARNt (el ARNt cargado) de la
secuencia se enlaza con el ribosoma adems de con un GTP y un
factor de elongacin. La terminacin del polipptido sucede cuando
la zona A del ribosoma se encuentra con un codn de parada (sin
sentido), que son el UAA, UAG o UGA. Cuando esto sucede, ningn
ARNt puede reconocerlo, pero el factor de liberacin puede
reconocer los codones sin sentido y provoca la liberacin de la
cadena polipeptdica.

INICIACION
La iniciacin de la traduccin en las procariotas supone
ensamblar los componentes del sistema de traduccin, que son:
las dos subunidades ribosomales, el ARNm a traducir, el primer
aminoacil-ARNt (el ARNt cargado con el primer aminocido),
GTP (como fuente de energa) y factores de iniciacin que
ayudan a ensamblar el sistema de iniciacin. La iniciacin
procaritica es el resultado de la asociacin de las subunidades
pequea y grande del ribosoma y el acoplamiento del primer
aminoacil-ARNt (fmet-ARNt) con el codn de iniciacin mediante
el emparejamiento de bases anticodon-codon.

ELONGACION
La elongacin de la cadena polipeptdica consiste en la adicin de
aminocidos al extremo carboxilo de la cadena.
La elongacin comienza cuando el fmet-ARNt entra en el sitio P,
causando un cambio de conformacin que abre el sitio A para que el
nuevo aminoacil-ARNt se acople. El factor de elongacin Tu (EF-Tu), una
pequea GTPasa, facilita este acoplamiento. Ahora el sitio P contiene el
comienzo de la cadena peptdica de la protena a codificar y el sitio A
tiene el siguiente aminocido que debe aadirse a la cadena peptdica.
El polipptido creciente que est conectado al ARNt en el sitio P se
desacopla del ARNt y se forma un enlace peptdico entre el ltimo de
los aminocidos del polipptido y el aminocido que est acoplado al
ARNt en el sitio A.

En la fase final de la elongacin, la traslacin, el ribosoma se

mueve 3 nucletidos hacia el extremo 3' del ARNm. Como los
ARNt estn enlazados al ARNm mediante el emparejamiento de
bases

codn-anticodn,

los

ARNt

se

mueven

respecto

al

ribosoma recibiendo el polipptido naciente del sitio A al sitio P y

moviendo el ARNt descargado al sitio E de salida. Este proceso
est catalizado por el factor de elongacin G (EF-G) gastando un
GTP.
El ribosoma contina trasladando los codones restantes del
ARNm mientras siguen acoplndose ms aminoacil-ARNt al sitio
A, hasta que el ribosoma alcanza un codn de parada en el
ARNm (UAA, UGA o UAG).

TERMINACIN
La terminacin ocurre cuando uno de los tres codones de
terminacin entra en el sitio A. Estos codones no son
reconocidos por ningn ARNt. En cambio, son reconocidos por
unas protenas llamadas factores de liberacin, concretamente
la RF-1 (que reconoce los codones de parada UAA y UAG) o la
RF-2 (que reconoce al UAA y al UGA). Un tercer factor de
liberacin, el RF3, cataliza la liberacin producida por el RF-1 y
el RF-2 al final del proceso de terminacin. Estos factores
disparan la hidrlisis del enlace ster de la peptidil-ARNt y la
liberacin del ribosoma de la protena recin sintetizada.

RECICLAJE
El sistema de post-terminacin formado al final de la
terminacin consiste en el ARNm con el codn de terminacin
en el sitio A, los ARNt y el ribosoma. La fase de reciclaje del
ribosoma es responsable del desmantelamiento del sistema
ribosmico posterior a la terminacin. Una vez que la protena
nueva es liberada durante la terminacin, el factor de reciclaje
del ribosoma y el factor de elongacin G (EF-G) se ponen en
funcionamiento para liberar el ARNm y los ARNt de los
ribosomas y desligar los ribosomas 70s en las subunidades
30s y 50s.

TRADUCCIN EUCARIOTA
Iniciacin dependiente de caperuza.
La iniciacin de la traduccin supone la interaccin de varias
protenas con una marca especial ligada al extremo 5' de las
molculas de ARNm. Los factores protenicos se asocian a la
subunidad ribosmica pequea. La subunidad, acompaada de
algunos de esos factores protenicos, se mueve a lo largo de la
cadena de ARNm hacia su extremo 3' buscando el codn de
'comienzo' (normalmente el AUG), que indica en qu punto se
empieza a codificar la protena. Luego el ribosoma traduce la
secuencia que hay entre los codones de 'comienzo' y 'parada' en una
secuencia de aminocidos, sintetizndose una protena. En los
eucariontes y las Archaeas, el aminocido codificado por el codn de
inicio es la metionina. El ARNt iniciador cargado con metionina forma
parte del sistema ribosmico, y por tanto todas las protenas
empiezan por este aminocido (a menos que lo extirpe una proteasa
en algn paso posterior).

BIBLIOGRAFA
Michael T. Madigan, Biologa de los
Microorganismos,
10
edicin,
Editorial Prentice Hall, Mxico DF