SENTRIFUGASI

SENTRIFUGASI
TUJUAN: MEMISAHKAN SUATU BAHAN BERDASARKAN BERAT MOLEKUL
DENGAN KECEPATAN TERTENTU
SENTRIFUS KLINIK
PALING SEDERHANA DAN MURAH
KECEPATAN MAX 3.000 RPM
TIDAK BERPENDINGIN
UNTUK MEMISAHKAN PARTIKEL BESAR:
o SEL DARAH MERAH
o SEL RAGI
o DLL
VOLUME MAX 10 Ml
SENTRIFUS MIKRO (MIKROFUGE)
TERGOLONG MURAH
KECEPATAN TUNGGAL (12.000 RPM)
TIDAK BERPENDINGIN
UNTUK MEMISAHKAN PARTIKEL BESAR
VOLUME MAX 1.5 mL
WAKTU YANG DIBUTUHKAN LEBIH SEDIKIT

SENTRIFUS KECEPATAN TINGGI (HIGH SPEED CENTRIFUSE)

TERGOLONG MAHAL
KECEPATAN ANTARA 20.000-25.000 RPM
BERPENDINGIN
UNTUK MEMISAHKAN: - SEL MIKROORGANISME
- ORGANEL-ORGANEL BESAR
- ENDAPAN PROTEIN DENGAN (NH4)2SO4
- IMMUNOPRESIPITAT, DLL
ULTRA SENTRIFUSE
MAHAL
KECEPATAN > 500.000 G (75.000 RPM PADA ROTOR 8 cm)
DAPAT MEMISAHKAN ORGANEL-ORGANEL KECIL SEPERTI:
- MIKROSOM
- RIBOSOM
- DNA DENGAN ISOTOP 15N DAN DNA 14N ALAM

DENSITAS GRADIEN
TUJUAN: UNTUK MENGHILANGKAN GETARAN MEKANIK PADA
ULTRASENTRIFUS PREPARATIF
BAHAN YANG DIGUNAKAN UNTUK SENYAWA GRADIEN:
- SUKROSA
- GLISEROL
- CESIUM SULFAT
- FICOLL

- CESIUM CHLORIDE- METRIZAMIDE

CARANYA: LARUTAN TERPEKAT PADA DASAR TABUNG, DAN SEMAKIN

MENURUN DENSITASNYA KE ARAH UJUNG ATAS TABUNG
ADA 2 TIPE TEKNIK YANG BIASA DILAKUKAN:
- SENTRIFUSE ZONE
- SENTRIFUSE ISOPIKNIK
SENTRIFUSE ZONE
- BAHAN HANYA BERGERAK MELALUI GRADIEN YANG STABIL
- DENSITAS GRADIEN YANG MAKSIMUM HARUS < DENSITAS
TERKECIL DARI BAHAN YANG MENGENDAP
- BAIK UNTUK BAHAN YANG UKURANNYA BERBEDA, DENGAN
DENSITAS SAMA

SENTRIFUSE ISOPIKNIK
- PENGENDAPAN TERCAPAI BILA DENSITAS BAHAN SAMA
DENGAN DENSITAS GRADIEN
- BAHAN DENGAN DENSITAS LEBIH KECIL AKAN TERAPUNG
PADA BAHAN YANG DENSITASNYA LEBIH BESAR
- DENSITAS GRADIEN YANG MAKSIMUM HARUS LEBIH BESAR
DARI DENSITAS TERTINGGI DARI BAHAN YANG DIENDAPKAN
- WAKTU YANG DIBUTUHKAN LEBIH DARI BIASANYA
- BAIK UNTUK PARTIKEL YANG UKURANNYA SAMA, DENSITAS
YANG BERBEDA MISAL:
* ORGANEL SUBSELULER
* MOLEKUL- MOLEKUL ASAM NUKLEAT
* MITOKONDRIA, PROPLASTID,
* GLIOKSISOM
- PROTEIN TIDAK BISA DENGAN CARA INI KARENA
DENSITASNYA UMUNYA SAMA

FRAKSINASI GRADIEN
ADA 2 CARA:
1. TABUNG DILUBANGI DASARNYA DENGAN JARUM
ISI TABUNG DIBIARKAN KELUAR MENURUT GAYA
GRAVITASI. FAKSINASI DITAMPUNG DALAM JUMLAH KECIL. BILA
MENGGUNAKAN POMPA PERISTALTIK UNTUK MENGELUARKAN
ISI TABUNG, SELANG/ PIPA HARUS SEPENDEK MUNGKIN AGAR
FRAKSI TIDAK TERCAMPUR
2. TABUNG SENTRIFUS DITUTUP RAPAT
DARI TENGAH TUTUP DISISIPKAN PIPA KE DASAR TABUNG.
MASUKKAN LARUTAN DENGAN DENSITAS LEBIH BESAR DARI
SETIAP GRADIEN YANG ADA DI DASAR TABUNG, SEHINGGA ISI
TABUNG NAIK DAN KELUAR MELALUI PIPA PENDEK YANG
LANGSUNG MASUK KE TABUNG PENAMPUNG

BILA VOLUME KECIL MAKA DAPAT DIPIPET DENGAN PIPET

PASTEUR UNTUK MEMISAHKAN TIAP FRAKSI TAPI HARUS HATIHATI

DIALISIS
PRINSIP: MEMBRAN SEMIPERMEABEL DAPAT DILALUI OLEH
MOLEKUL KECIL DAN DAPAT MENAHAN MOLEKUL BESAR

DAPAT DIGUNAKAN UNTUK MEMISAHKAN BIOMOLEKUL BESAR ATAU

KECIL

MEMBRAN ATAU SELAPUT YANG UMUM DIGUNAKAN ADALAH SELOFAN

(CELLOFHANE)

SEBELUM SELOFAN DIGUNAKAN DIANJURKAN UNTUK DIDIDHKAN

DALAM EDTA ALKALI (10 g/ L Na2CO3 + 1 mmOL EDTA) SELAMA 30 MENIT
UNTUK MENGHILANGKAN ION-ION LOGAM, SENYAWA SULFUR,
BEBERAPA ENZIM, LALU DICUCI DENGAN H2O. SALAH SATU UJUNG
DIIKAT DAN DIISI DENGAN LARUTAN YANG AKAN DIDIALISIS. SELAMA
DIALISIS AIR MASUK KE KANTONG DIALISIS KARENA TEKANAN
OSMOSIS (Pos), SEHINGGA SELALU DIUSAHAKAN AGAR VOLUME
KANTUNG MASIH NORMAL SETELAH TERCAPAI KESEIMBANGAN.

KECEPATAN DIALISIS TERGANTUNG PADA:

SUHU, SEMAKIN TINGII SUHU MAKA SEMAKIN CEPAT PROSES
DIALISIS, TETAPI PROTEIN AKAN RUSAK. BIASANYA
DIALISIS DILAKUKAN PADA KONDISI DINGIN
TEKANAN, UNTUK MENGHINADARI TEKANAN, DAPAT DILAKUKAN
PADA KEADAAN VAKUM. MOLEKUL AIR DAN BEBERAPA
MOLEKUL BM RENDAH DAPAT KELUAR DARI KANTUNG
DIALISIS JIKA TEKANAN DALAM KANTONG LEBIH KECIL
DARI TEKAN DI LUAR KANTUNG
EFEK DONNAN : FENOMENA PERBEDAAN POTENSIAL MUATAN
LISTRIK PADA MEMBRAN
EFEK DONNAN TIDAK DIINGINKAN KARENA DAPAT MERUSAK pH
SEHINGGA PROTEIN DAPAT RUSAK (DENATURASI)