Anda di halaman 1dari 15

ANTIBIOGRAMAS EN DISENTERIA

Aleida Villa Espinosa, Rafael Baselga, Ana Fernndez, Elena Gracia, Iaki Albizu

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

DETERMINACION

DE SENSIBILIDAD

Para determinar la sensibilidad a los antibiticos se utiliza:


Difusin en agar con discos
Se utiliza para determinar la sensibilidad de bacterias aerobias de
crecimiento rpido y, en condiciones estndar, el dimetro del halo de
inhibicin es inversamente proporcional a la Concentracin Mnima
Inhibitoria (MIC). Los resultados son orientativos, es cualitativa y no
es vlida para Brachyspiras.
Prueba de las diluciones (MIC)
Antibiograma en agar Mueller
Hinton incubado a 37 C 18 h.
Los discos contienen diferentes
concentraciones de antibiticos
que difunden al medio
impidiendo el crecimiento
bacteriano.

La MIC es la menor concentracin de antibitico en la que no hay


crecimiento. La forma adecuada de expresar la MIC es refirindose al
50% (MIC50) y al 90% (MIC90) de las cepas ensayadas (mnimo 50
cepas) y es la concentracin a partir de la cual el 50% (o el 90%) de
las cepas no crecen. Pone de manifiesto el grado de resistencia de la
poblacin, la sensibilidad de cada especie y de cada cepa.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

CRITERIOS

DE UTILIZACION DE LOS ANTIBIOTICOS

Los antibiticos a los que las bacterias son medianamente sensibles, no se deben utilizar,
a no ser: (1) que normalmente alcancen mayor concentracin en el foco de infeccin, o
(2) que no se disponga de otro agente antimicrobiano, en cuyo caso se deben administrar
las mayores dosis posibles.

Sensible: Cuando el microorganismo infectante se inhibe por las


concentraciones que un antibitico alcanza en los tejidos administrado a las
dosis usuales. Un microorganismo es considerado sensible si la MIC de este
es inferior a la mitad de la concentracin media alcanzada en la sangre, o es
inferior a la cuarta parte de la cifra media de las concentraciones mximas.

Medianamente sensible: Si el microorganismo slo es inhibido por las


concentraciones que el antibitico alcanza en la sangre o en los tejidos
cuando se administra la mayor dosis posible del mismo

Resistente: Si el microorganismo no resulta afectado por las concentraciones


que normalmente se alcanzan en el organismo, y son toleradas por l.

Estos conceptos establecen una relacin entre la concentracin que los distintos
frmacos alcanzan en los tejidos y la MIC, la cual constituye el parmetro de
referencia para determinar la sensibilidad.
www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

RESULTADO CLINICO
Los resultados pueden ser no vlidos para pronosticar el resultado clnico:

Factores dependientes de las bacterias:


Es posible "in vivo" las bacterias sean ms sensibles porque pierdan factores
de virulencia.

Factores dependientes del hospedador:


Es posible que las bacterias sensibles no resulten afectadas debido a su
localizacin intracelular, su fase metablica, presencia de pus, o productos de
necrosis, etc.

Factores dependientes del frmaco:


Se incluyen: la administracin de dosis insuficientes, la utilizacin de una
va de administracin incorrecta, el empleo de un frmaco no apropiado, la
inactivacin del frmaco, tanto in vivo como in vitro y la escasa penetracin
del frmaco en los tejidos, debida a la existencia de barreras fisiolgicas o
de extensas zonas de necrosis.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

ANTIBIOTICOS SELECCIONADOS PARA EL CONTROL DE LOS PROCESOS


DIGESTIVOS EN CEBO*

ANTIMICROBIANO

L.
Intracellularis.

B.
Hyodysenteriae

B.
Pilosicoli

C.
Perfringens

E. coli

Salmonella
sp.

Yersinia

Tilosina

mod.

Lincomicina

mod

Tiamullina

Valnemulina

Clortetraciclina

mod

mod

Espectinomicina

mod

mod

mod

Apramicina

mod

Sulfamidas/Trimetropin

mod

Amoxicilina

mod

mod

Penicilina

Neomicina

B. Bueno, M. Malo, mod. Moderado

*(Burch, D.G.S., http://www.octagon-services.co.uk/articles/ileitis.pdf)


www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

ABSORCION RELATIVA, O CONCENTRACIONES INTESTINALES


DE VARIOS ANTIBITICOS*

ANTIMICROBIANO

ABSORCIN
APROXIMADA

CONCENTRACIN
EN ILEON (G/ML)

CONCENTRACIN
EN COLON (G/ML)

Lincomicina 110 ppm

Moderada (50%)

48

35

25

101

Lincomicina 220 ppm


Tiamulina 110 ppm

Alta (>90%)

2.8

Tiamulina 220 ppm


Valnemulina 75 ppm

8
Alta (>90%)

Valnemulina 200 ppm

1.7
5.2

Tilosina 100 ppm

Baja (<20%)

50

Clortetraciclina

Baja (<20%)

Espectinomicina

Baja (<20%)

Apramicina

Baja (<20%)

Neomicina

Baja (<20%)

*(Burch, D.G.S., http://www.octagon-services.co.uk/articles/ileitis.pdf)

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

ESQUEMA DE TRABAJO CON BRACHYSPIRAS


Esquema de trabajo para determinar la sensibilidad de
Brachyspira sp. a los agentes antimicrobianos utilizando la
prueba de las diluciones y lectura en Citometra de Flujo.

En las placas de ensayo de 96 pocillos de un ml de capacidad se ponen los


medios de crecimiento (1 ml; BHI con 10% de Suero Fetal Bovino) donde se
multiplicarn las Brachyspiras.

En otras microplacas de 96 pocillos se preparan las 8 diferentes concentraciones


decrecientes (1/2) de cada antibitico (Lincomicina, Tiamulina, Tilosina,
Valnemulina).

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

Los antibiticos concentrados se aaden a


las microplacas donde se prepararan las
diluciones de los antibiticos.

Las diluciones dobles de los antibiticos se realizan pasando


consecutivamente 150l con una pipeta multicanal a otro pocillo con 150l
del medio de crecimiento sin antibitico. La placa con las diferentes
concentraciones de antibitico queda lista. En cada placa se dejan pozos
control con medio sin antibitico para los controles de pureza y la
evaluacin del crecimiento de la poblacin a 0 y 48 h.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

Las diluciones de antibitico preparadas se


traspasan a las placas de ensayo.

En cada pocillo de
las placas de ensayo
tenemos una
concentracin y un
antibitico diferente,
tal y como se van a
ensayar.

www.exopol.com exopol@exopol.com

Las cepas se
preparan a partir
de un cultivo de
48 horas a 42C
en agar
Columbia.
ABRIL 2005

Se deposita 1,5
ml de BHI sin
suero sobre las
placas con los
cultivos antes de
recoger las
bacterias con el
asa sobre las
reas de
hemlisis.

La suspensin bacteriana se mezcla bien y


se distribuye en los microtubos de las placas
de ensayo.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

Las placas de
ensayo se incuban
en anaerobiosis
para permitir el
crecimiento de las
Brachyspiras.

Se confirma la pureza
del inculo a partir de
uno de los microtubos
de control.

Para realizar la lectura objetiva de los pocillos, las bacterias que se han
multiplicado se diluyen en PBS antes de contarlas en el citmetro. Un
citmetro cuenta el nmero de bacterias presentes en un vlumen
determinado al hacerlas pasar por un microcapilar.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

La lectura de los datos se realiza en un citmetro de flujo de un


modo totalmente objetivo, comparando el crecimiento y viabilidad de
las bacterias en cada uno de los pocillos (un pocillo por cepa y
dilucin de antibitico) y su viabilidad con el crecimiento y viabilidad
promedio que se obtiene en los pocillos control.

El citmetro lee cada una de las bacterias


presentes en el medio de crecimiento (cada
punto es una bacteria) y adems de contarlas
para estimar su concentracin, utilizando Ioduro
de Propidio como marcador estima su viabilidad.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

ANTIBIOGRAMA FRENTE A BRACHYSPIRAS


Aislamiento: Brachyspira hyodysenteriae
Antibiograma: Se utiliz un mtodo cuantitativo de microdilucin en caldo BHI
enriquecido con el 10% de Suero Fetal Bovino y se analizo por Citometra de Flujo
despus de 48 horas de incubacin a 42C frente a un panel de 4 antibiticos y 8
diluciones de cada uno de ellos.
Punto de corte: El punto de corte estimado corresponde al 50% de inhibicin del
crecimiento contra el control de la misma cepa sin antibitico.
CONCENTRACIONES ENSAYADAS EXPRESADAS EN G/ML:

MIC Br. hydodysenteriae

Lincomicina

64

32

16

0,5

90%

Tiamulina

0,5

0,3

0,1

70%

256

128

64

32

16

60%

0,5

0,3

0,1

40%

Tilosina
Valnemulina

80%
ATB
ATB
ATB
ATB

50%
30%

A
B
C
D

20%
10%
0%
1

Concentracin de antibiticos

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

RESULTADOS
SENSIBILIDAD IN VITRO:

ANTIBITICO
ATB A

Sensible

ATB B

Sensible

ATB C

Sensible

ATB D

Sensible

Todos los antibiticos son capaces


de inhibir el crecimiento de las
bacterias en alguna de las
concentraciones ensayadas

Sensibilidad Clnica: Valor obtenido en la menor concentracin por debajo del punto
de corte (50% de inhibicin) multiplicado por 3. Este valor se compara con las
concentraciones que se alcanzan en intestino.
SENSIBILIDAD CLNICA:
A

Valor
punto
de corte
16

<0.031

2,16

32

N.D.

<0.031

1,68

Concentracin
en intestino
34,51

CONCLUSIONES: La cepa estudiada no presenta ninguna resistencia frente a ATB B y


el ATB D, mientras que tanto frente a la ATB A como frente a ATB C podemos sospechar
que estamos muy cerca del lmite de sensibilidad clnica.
www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005

Si no queda satisfecho le devolvemos su dinero

Exopol inicia su campaa 2005 "Si no queda satisfecho le devolvemos su dinero", en la


que la empresa devolver a los clientes nuevos del ao 2005 todo el dinero gastado en
autovacunas frente a Disentera Porcina, siempre que los profesionales manifiesten
no estar conformes con su eficacia. No es necesario justificar nada, la nica condicin
que existe es un lmite en el nmero total de dosis a reembolsar.
Exopol quiere demostrar de esta manera el xito alcanzado con estos productos y la
confianza en su buen funcionamiento. Como todo el trabajo de la empresa, la campaa
es exclusiva para veterinarios.

www.exopol.com exopol@exopol.com

ABRIL 2005