Espectrofotometra
Introduccion
En ocasiones al ver una serie en la t.v.; de las policacas o
de mdicos donde se hacen anlisis a pequeas muestras
para averiguar si hay DNA y si este coincide con el de la
vctima o con el malo, o si cierta sustancia puede
afectar a la salud, etc..,
entonces uno ve que los
investigadores
hacen una serie de estudios con las
muestras, que en ocasiones son muy pequeas, y dan
resultados; en la vida real sucede algo similar; cuando se
tiene en el laboratorio, en una solucin, presencia de color,
o cuando se sabe que hay ciertas cantidades de algn
elemento pero no se sabe cuanto, se genera la inquietud
de saber que elemento es, en que cantidad est y es
entonces que se producen una serie de preguntas, tales
como: COMO LO MIDO? y otras ms, entre ellas pueden
estar: Qu es la luz?, qu es longitud de onda, cmo se
mide?, que relacin hay entre luz y color?; para que sirve
esto?, de qu manera se mide una solucin coloreada?.
En este trabajo se propone de orientar de manera sencilla,
sobre este tema tratando de dar una idea fundamental de
las preguntas anteriores y otras ms que se hacen en torno
al tema que se est presentando; espero este trabajo sea
til tanto a profesores como alumnos para orientarse y
Contenido
Espectroscopa
Caractersticas de la Luz
Colores
Qu es longitud de Onda?
Relacin entre frecuencia, velocidad y longitud de
onda
Absorcin / Absorbitividad
Las leyes de Lambert y Beer
Espectrofotometra
ESPECTROSCOPA
La espectroscopia es el estudio del espectro
de la luz que emiten los cuerpos, sustancias
y elementos.
De este estudio se puede conocer la
composicin, temperatura, densidad,
velocidad de desplazamiento y otros
factores que les son propios y componen a
estos cuerpos, sustancias o elementos
Caractersticas
de la
LUZ
3
1
Foton
En estas
imgenes se
puede apreciar,
debido a la toma
fotogrfica los
elementos
puntuales que
apoyan a esta
teora
COLORES
COLORES
Qu es
longitud de onda?
ONDA
nodo
U.V.
L
u
z
v
i
s
i
b
l
e
X
GAMMA
350 nm
750 nm
Infrarrojo
Microondas
Radio
La luz visible es
slo una pequea
parte del
espectro
electromagntico
con longitudes de
onda que van
aproximadamente
de 350
nanmetros hasta
unos 750
nanmetros
<nanmetro, nm =
milmillonsimas de metro>.
Las longitudes de onda mas largas que las del rojo se les
conoce como infrarrojas y las mas cortas que el violeta,
ultravioletas.
Longitud de Onda
Ultravioleta
Luz visible
Infrarrojo
102 -104
~ 104
104-107
V
i
o
l
e
t
a
A
z
u
l
V
e
r
d
e
A
m
a
r
i
l
o
N
a
r
a
n
j
a
R
o
j
o
U
V
I
R
Frecuencia natural
Cualquier objeto oscilante tiene
una
'frecuencia
natural',
(vibracin
en
ausencia
de
perturbacin).
Quin es
HERTZ?
Un pndulo de 1 m de longitud
presenta una frecuencia de 0,5 Hz,
es decir que el pndulo va y vuelve
una vez cada 2 segundos.
= c /
Donde c = vel. de la luz en m. por seg.
c = (m-1s-1)
=c/l
Frec = Vel /
Como la luz viaja a una
velocidad de
3 x 108 m/s
vel /
El sonido se propaga a una velocidad de 340 m
cada segundo
Algunas equivalencias
1
0.001 mm
10-6 m
nm = m
0.001
10-9 m
0.0001
nm
10-10 m
La energa UV es mayor
que, cualquier color del
espectro visible. Sin
embargo los rayos X son
ms energticos que la
luz UV, como se puede
apreciar por su longitud
de onda.
Absorcin
Absorbitividad*
Proceso de Absorcin
La energa de excitacin a una molcula
proveniente de un fotn durante el proceso de
absorcin se representa as:
A + hn A* A + calor
donde:
A es el absorbente en su estado de energa bajo,
A* es el absorbente en su nuevo estado de
excitacin energtica
hn representan a la constante de Planck y la
frecuencia respectivamente
A* es inestable y rpidamente
revierte a su estado energtico ms
bajo, perdiendo as la energa
trmica correspondiente.
La absorcin de determinadas
longitudes de onda depende de la
estructura de la molcula absorbente
(absortividad, a)
Luz absorbida
I0
I
c = concentracin
(nmero de partculas por
cm3)
b
Longitud del medio absorbente
o ancho de la celda
Absortividad (a)
a es una constante de proporcionalidad
que comprende las caractersticas
qumicas de cada compuesto, o molcula
y su magnitud depende de las unidades
utilizadas para b y c.
bc
I = I0e-ab
I0
I
1 cm.
I0
I0
2 cm.
Ancho de la celda
3 cm.
I = I0e-ac
I0
I0
I0
I = I0e
-abc
Si despejamos:
I/I0 = e
-abc
T = I/I0 = e-abc
Sacando logaritmos:
Loge I/I0 = abc
Convirtiendo a log10:
Log10 I/I0 = 2.303 abc
Log10 I/I0 = abc
T = I / I0
Se expresa como % T
La absorbancia es directamente
proporcional a la longitud del
recorrido b a travs de la solucin y la
concentracin c del color absorbente.
Estas relaciones se dan como:
A = abc
I0
LUZ
A
B
S
O
R
B
I
D
A
Luz transmitida
T = I/I0
Concentracin
Concentracin
Absorbancia
bc
Concen
tracin
T = 10-abc
10
10 + log10 100
Invirtiendo trminos
log %T = log10 100 -abc log
10
log10 %T = 2 abc
Como abc = Absorbancia = A
log10 %T = 2 A.
10 = 2 abc * 1
ESPECTROFOTOMETRA
* Arco iris en
Marte
Espectroscopio
Espectgrafo
1817
Espectmetro
De fluorescencia
De Emisin
ptica
Para metales
Colorimetra y
Espectrofotometra
como
procedimientos
analticos *
Las
tcnicas
colorimtricas
se
fundamentan con la medicin de la
absorcin de radiacin
visible por
sustancias coloreadas.
Sin embargo, cuando una muestra a
determinar no posee coloracin, es
necesario llevar a cabo un tratamiento de
color empleando substancias que que
reaccionen de forma proporcional con el
compuesto de inters
Orbitas de TITAN
La
diferencia
entre
colorimetra
espectrofotometra consiste en el tipo
y
de
instrumental empleado:
Referencia de color
Espectrofotmetro
ESPECTROFOTMETRO
Un
espectrofotmetro
es
un
instrumento que descompone un
haz de luz (haz de radiacin
electromagntico), separndolo en
bandas de longitudes de onda
especficas, formando un espectro
atravesado por numerosas lneas
oscuras y claras, semejante a un
cdigo de barras del objeto, con el
propsito de identificar, calificar y
cuantificar su energa
Distribucin de la luz en el
espectrofotmetro
Met.Cient. I
COLOR
LONGITUD DE ONDA ()
Rojo (R)
Verde (G)
700 nm
546.1 nm
Azul (B)
435.8 nm
Conc.
en Metanol..
celda de 5uL
Curva Patrn
El razonamiento para el
determinacin
de
una
desconocida es:
proceso de
concentracin
CURVA PATRN
0.6
0.5
A
B
S
0
R
0.3
B
A
N
0.2
Interpolacin
I
A
0.1
0
0
Concentracin mg/lt
10
12
A1 / A2 = C1 / C2
Donde:
A1 = Absorbancia del problema.
A2 = Absorbancia de un estndar de concentracin
conocida.
C1 = Concentracin del problema.
C2 = Concentracin del estndar.
Si despejamos C1 = Conc del problema
Conc. (problema) =
A2 (estndar)
Un
aspecto
importante
de
la
evaluacin
espectrofotomtrica, es que muchas molculas orgnicas
no absorben en el intervalo del espectro visible sino en el
rango de longitudes de onda acordes al ultravioleta o al
infrarrojo
Por lo que es comn, actualmente, que la mayora de los
espectrofotmetros, actuales, se encuentren provistos
con lo necesario para leer en de tales intervalos
As, los grupos carbonilo presentes en los aldehdos
(RCHO), cetonas (RCOR), cidos carboxlicos (RCOOH),
l steres (RCOOR) y amidas (RCONHR) dan lugar a
absorciones intensas en la regin del espectro de
infrarrojo situada entre 1780-1640 cm-1.
CUIDADOS
Las muestras no deben tener burbujas,
encontrarse turbias o con precipitados.
El volumen de la muestra en la cubeta, no debe
ser excesivo para evitar que se desborde, en caso
de que sucediera, se debe limpiar con un pao
limpio o papel absorbente suave, para evitar
rayarla.
La cubeta se sujeta por los lados opacos.
La cantidad a adicionar es, mximo, hasta
partes de la cubeta
No se deben derramar lquidos, sobre todo
solventes, cidos o lcalis; dentro del
contenedor de la cubeta, se puede daar parte
del mecanismo
Se debe mantener, el espectrofotmetro, limpio y