Conjugao
Conjugao Materiais e
mtodos
1 ensaio: Pseudomonas putida como doadora
hospedeiro permissivo de plasmdeos IncP-1
Conjugao - Resultados
pKS208 no se auto-transferiu
No possui gene traC completo
Conjugao - Resultados
Plasmdeos IncP-1 e IncP-1
P. putida
P. putida
E. coli
P, putida
E. coli
C. pinatobunensis
C. pinatobunensis
S. japonicum , A. tumfaciens
IncP-1 X
IncP-1 pB136KM
E. coli
A. tumefaciens
IncP-1baixas frequncias
IncP-1 pB136KM: altas frequncias
E coli
S. japonicum
IncP-1X
IncP-ib PB136KM
Introduo
Conjugao - Concluso
IncP-1 e IncP-1tm gamas de hospedeiros
sobrepostas, mas diferentes;
A gama de hospedeiro aparente de IncP-1
limitada
Fraca transferncia doador
hospedeiro
Fraco estabelecimento no receptor
Transformao Materiais e
mtodos
Eletroporao
A clula exposta a um campo eltrico
de alta intensidade, que desestabiliza
a membrana;
Formam-se poros na membrana,
permitindo a entrada do DNA exgeno
de interesse;
Quando o campo eltrico desligado,
a membrana se reestrutura, e o DNA
fica mantido no interior da clula.
Eletroporao
Procedimento no-qumico
No altera a estrutura biolgica ou
funo da clula;
Performance rpida e simples;
Grande eficincia;
Pode ser aplicada a diferentes tipos
celulares, desde que se ajuste os
parmetros eltricos;
Transformao Materiais e
mtodos
DNA doador: P. putida KT2440
Clulas transformadas
Preparao de clulas eletrocompetentes
Misturar com DNA plasmidial de interesse
Submeter mistura ao choque
Transformao Materiais e
mtodos
Plaqueamento pstransformao:
gar sem antibitico:
contagem das clulas
viveis
gar com antibitico:
contagem dos
tranformantes
Transformao - Resultados
Transformao - Concluso
Discusso Geral
No foi observada autotransferncia de IncP-1
pKS208 nos experimentos de conjugao
Delees no quadro de leitura em traC
pKS208 X IncP-1
Sequncias dos produtos gnicos
Contedo G+C dos operons tra e trb
Discusso Geral