Nutricin

microbiana

Toda la naturaleza es,

como se ha dicho, una
conjugacin activa y
pasiva del verbo comer
-William Ralph Inge

Metabolismo

Conjunto de reacciones catablicas y

anablicas
Catabolismo:

Conjunto de procesos que participan en la

degradacin de compuestos en productos ms
pequeos; las reacciones enzimticas que toman
parte de denominan reacciones catablicas.

Anabolismo:

Reacciones mediante las cuales los m.o. construyen

o sintetizan sustancias qumicas complejas a
partir de molculas simples; las reacciones
enzimticas que toman parte se denominan
reacciones biosintticas y requieren energa. El ATP
formado en las reacciones catablicas es empleado
en el anabolismo.

Nutricin
A las sustancias en el medio ambiente utilizadas por
los organismos para el catabolismo y el anabolismo,
se les llama nutrientes.
Dicho de otro modo, para obtener energa y elaborar
nuevos componentes celulares, los organismos
tienen que disponer de materias primas o nutrientes.

Nutrientes:

Son sustancias que se emplean en la biosntesis y

produccin de energa.
Son necesarios para el crecimiento microbiano

Requerimentos de
nutrientes comunes
Macroelementos.
Microelementos (llamados
tambin oligoelementos).

Macronutrientes o
macroelementos
Son captados por los m.o. en
cantidades relativamente grandes.
Ms del 95% del peso seco de la
clula microbiana esta constituido
por C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg y Fe.

 C, O, H, N, S y P.
Son componentes de carbohidratos, lpidos,
protenas y cidos nuclecos. Son necesarios en
cantidades de g/L de medio de cultivo.

Carbono.
Fuente de energa y/o compuestos para biosntesis

Nitrgeno y azufre*.
Se encuentran en las clulas en forma reducida
como grupos amino y sulfhidrilo; generalmente en
forma reducida, aunque algunos m.o. los asimilan
en forma oxidada. Sulfatos, nitratos, peptonas (N y
S) y cisteina.
Fijacin de N2 (N2
NH3)

 K, Ca, Mg y Fe:

se encuentran en la clula en
forma de cationes, desempeando varias funciones. Se
utilizan en cantidades de mg.

K+: necesario para actividad de enzimas,

entre ellas algunas que participan en la

sntesis de protenas.
Ca2+: contribuye a la termorresistencia de
endosporas.
Mg2+: acta como cofactor de muchas
enzimas, forma complejos con el ATP y
estabiliza los ribosomas y las membranas
celulares.
Fe2+ y Fe3+: Forma parte de los citocromos
y es cofactor de enzimas y de protenas
transportadoras de electrones.

Requerimientos de N,
P
y
S
Se deben incorporar en grandes cantidades. Aunque pueden
adquirirse a partir de los mismos nutrientes que aportan C,
los m.o. suelen emplear tambin fuentes inorgnicas.

N: necesario para sintetizar a.a., purinas,

pirimidinas, algunos CHTOS y lpidos.

P: presente en cidos nucleicos, fosfolpidos,
nucletidos como ATP, varios cofactores,
algunas protenas y otros componentes
celulares.
S: necesario para la sntesis de sustancias
como los a.a. cistena y metionina, algunos
CHTOS, biotina y tiamina.

Micronutrientes o
microelementos u
oligoelementos

Son aquellos que se requieren en cantidades tan

pequeas, que los contaminantes presentes en agua,
en los recipientes para el cultivo y en los componentes
habituales del medio son a menudo suficientes.
Normalmente son parte de enzimas y cofactores;
facilitan la catlisis de reacciones y mantenimiento de
la estructura de protenas.
Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu deben estar disponibles en
cantidades de g.

 Zn2+: se localiza en el centro activo

de algunas enzimas.
Mn2+: facilita a muchas enzimas la
catlisis de la transferencia de los
grupos fosfato.
Mo2+: necesario para fijar nitrgeno.
Co2+: componente de la vitamina B12.
Cu2+: tiene funciones en algunas
enzimas de xido-reduccin.

Factores de crecimiento
Son sustancias precursoras de ciertos
constituyentes orgnicos de la clula que el m.o. es
incapaz de sintetizar; generalmente se requieren en
pequeas concentraciones. Existen tres clases
principales:
1. Aminocidos
sntesis de protenas
2. Purinas y pirimidinas
sntesis de cidos nucleicos
3. Vitaminas
normalmente forman la totalidad o parte
de los cofactores enzimticos; constituyen grupos
prostticos o centros activos de ciertas enzimas.

Requerimentos de C, H
yO
Las necesidades de C, H y O suelen
cubrirse simultneamente.
El carbono es necesario para construir
el esqueleto de todas las molculas
orgnicas; las molculas que sirven
como fuente de C aportan tambin
tomos de H y O, excepto el CO2.

Clasificacin por
requerimientos nutricionales
(Fuente de carbono)
Auttrofos:
Son m.o. que pueden utilizar CO2 como principal y
nica fuente de carbono.

Hetertrofos:
Son organismos que utilizan molculas orgnicas
preformadas y reducidas como fuentes de carbono.
La mayora usan nutrientes orgnicos como fuente
tanto de C como de energa. Este grupo incluye a
todos los animales, hongos, protozoarios y la mayora
de las bacterias.

Requerimientos
nutricionales debidas a
mutaciones.

Las necesidades nutricionales de los m.o. varan segn las especies;

pueden cambiar en una misma especie debido a mutaciones.

Prottrofo:
Es un m.o. que precisa de los mismos nutrientes que la
mayora de los miembros de su especie.

Auxtrofo:
Es un m.o. mutado que carece de la capacidad para
sintetizar un nutriente esencial y por ello, debe
obtenerlo, o a su precursor, del medio.

Requerimientos de
energa de los m.o.
Todos los organismos requieren fuentes
de energa, H y e- para poder crecer.
Existen nicamente dos fuentes de
energa disponibles para los
organismos:
Energa lumnica captada durante la
fotosntesis.
Energa derivada de la oxidacin de
molculas orgnicas e inorgnicas.

Clasificacin energtica de
m.o.
Quimitrofos:

Obtienen la energa a partir de la oxidacin de

compuestos qumicos (orgnicos o inorgnicos).
Quimioauttrofos.
Quimiohetertrofos.

Fottrofos (o fotosintticos):
Emplean la luz como fuente de energa.
Fotoauttrofos.
Fotohetertrofos.

 Littrofos:
(que comen roca) obtienen su energa de
la oxidacin de compuestos inorgnicos
como el azufre elemental (S0), el in
amonio (NH4+), el hierro ferroso (Fe2+) o el
H2 .

Organtrofos:
Obtienen electrones o hidrgeno a partir de
compuestos orgnicos.

Fuentes de carbono, energa e

hidrgeno/electrones
Fuentes de carbono
Auttrofos

CO2 como nica o principal fuente de

carbono.

Hetertrofos

Molculas orgnicas preformadas,

reducidas, a partir de otros
organismos.

Fuentes de energa
Fottrofos

Luz.

Quimitrofos

Oxidacin de compuestos orgnicos o

inorgnicos.

Fuentes de hidrgeno o electrones

Littrofos

Molculas inorgnicas reducidas.

Organtrofos

Molculas orgnicas.

Composicin tpica de
compuestos orgnicos e
inorgnicos de m.o.

Composicin tpica de compuestos

orgnicos e inorgnicos de m.o.
Constituyentes inorgnicos

Sustrato
s

Clulas
X

S1

Productos

S2

P1

Sn

P2
Pn

 Producto:
Compuesto qumico diferente de material
celular que es liberado al medio.

Sustrato:
Compuestos que son consumidos a partir
del medio como resultado de crecimiento
celular o formacin de producto.

Factores que limitan la

formulacin de medios de cultivo:
cultivo
Algunos elementos del sustrato
liberados como productos no asimilados
a material celular.
Velocidades limitantes y estequiometra,
deben considerarse los rendimientos.
Nutrientes especficos que pudieran ser
limitantes, o productos especficos que
pueden ser inhibitorios.

Factores que limitan la

formulacin de medios de
cultivo:
cultivo
Factores ambientales.
Factores de crecimiento.

Crecimiento microbiano: Descripcin

qumica

ACaHbOc + BO2 + DNH3 MCaHbOc Nd+

PCO2 + QH2O C

donde: A, B, D, P y Q son moles.

CaHbOc fuente carbono-energa.
M son moles de una unidad celular, CaHbO

Datos de composicin
celular
Bacterias
C0.53 ; N0.12 ; O0.19 ; H0.07

Levaduras
C0.47 ; N0.075 ; O0.31 ; H0.065

aCHxOy + bO2 + cNH3

C:
H:
O:
N:

CHO N+ dCO2 + eH2O

a=1+d
ax + 3c = + 2e
ay + 2b = + 2d + e
c=

RQ = moles de CO2 / moles de O2 = d

Rendimiento biomasa
sustrato (YX/S)
producida (X
YX/S = XBiomasa
X )
s Sustrato consumido (S
f

Sf)

Medios de
Cultivo

 Aunque todos los m.o. necesitan fuentes de energa,

C, N, P, S y varios minerales, la composicin
precisa de un medio de cultivo adecuado
depender de la especie que se quiere cultivar.
Un medio se utiliza frecuentemente para
seleccionar y cultivar m.o. especficos, o para
facilitar la identificacin de una especie en
particular.
De acuerdo al estado fsico, los medios de cultivo se
clasifican en slidos y lquidos.

Medio sinttico o
definido

Son medios en que se conocen todos

los componentes.
Los medios definidos se emplean
ampliamente en investigacin ya que
con frecuencia se requiere conocer
qu est metabolizando el m.o. en
estudio.

Medio BG-11 para cianobacterias

Medios complejos
Contienen algunos ingredientes cuya
composicin qumica se desconoce.
Son medios suficientemente ricos
para satisfacer las necesidades
nutricionales de diversos
microorganismos.
De gran utilidad cuando se desconoce
los requerimientos nutricionales de un
m.o. en particular.

Los medios complejos contienen

peptonas, extracto de carne y de
levadura.
Peptonas: hidrolizados de protenas obtenidos de

la digestin parcial de carne, casena, harina de soya

y otras protenas. Sirven como fuente de C, N y
energa.

Extracto de carne: contiene a.a., pptidos,

nucletidos, cidos orgnicos, vitaminas y minerales.

Extracto de levadura (de cerveza): fuente de

vitaminas del complejo B, y de compuestos de N y C.

Agar MacConkey

Tipos de medio
Selectivos.
Diferenciales

Medios selectivos
Contienen sustancias especficas que favorecen
el crecimiento de un tipo particular de m.o.
Las sales biliares o colorantes como la fucsina y el
cristal violeta favorecen el crecimiento de Gram(-),
inhibiendo el desarrollo de Gram(+).
Agar Salmonella-Shigella (SS), adicionado con sales biliares
para inhibir coliformes. Se producen colonias incoloras por la
incapacidad de fermentar lactosa.
Agar sulfito de bismuto (BS). Para aislar Salmonella typhi;
colonias negras con tono metlico.
Agar sal manitol (MS), adicionado con 7.5% de sal. Se usa para
aislar estafilococos.

Medios diferenciales
Contienen productos qumicos para dar lugar a una alteracin
visible del medio de cultivo
Diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una
identificacin tentativa de m.o. segn las caractersticas biolgicas.
Ejemplo: agar sangre.
Agar Eosina azul de metileno (EMB). Contiene lactosa, sales y colorantes
(eosina y azul de metileno), para diferenciar entre fermentadores y no
fermentadores de lactosa. Ej. E. coli (fermentador) produce colonias oscuras o
con brillo metlico.
Agar McConkey. Adicionado con sales biliares y cristal violeta. Para seleccin
y recuperacin de Enterobacteriaceae y bacterias Gram(-). Bacterias
fermentadoras de lactosa producen colonias rojas.
Agar entrico de Hektoen. Adicionado con elevada concentracin de sales
biliares como inhibidor. Para aumentar el rendimiento de Salmonella y
Shigella.

Formulacin de medios
de cultivo
Consiste en la formulacin cuantitativa
del medio, tomando en cuenta todos los
elementos o nutrientes requeridos.
Los macronutrientes son los que controlan
la velocidad de crecimiento.
Los medios de cultivo deben prepararse
con una formulacin balanceada
cualitativa y cuantitativa.

DISEO CUALITATIVO DEL MEDIOS DE CULTIVO

:
DEFINICION QUIMICA
La definicin del medio debe vincularse con los tipos
microbianos:
Hetertrofos (simples)
Glucosa
Sulfato de amonio
Fosfato monobsico de K
NaCl
CaCl2

Autottrofo
Amoniaco
Sales de sulfato
Sales de fosfato
NaCl
Cationes (Cu, Mo)

FORMULACION Y BALANCEO DEL

MEDIO
Determinacin de las concentraciones de los
sustratos limitantes
La relacin C/N como criterio de balanceo
C/N
Tipo de Medio
____________________________________________
Protena microbiana
18
Orgaheterotrfico
Respiracin
2-80 Litoautotrfico
(desasimilativo)
___________________________________________

Rendimiento biomasa
sustrato (YX/S)
YX/S = X
s

Biomasa producida (Xf X0)

Sustrato consumido (S0 Sf)

Rendimiento de biomasa producida por

fuente de carbono consumida
M.o. aerobio = 0.5 biomasa
M.o. anaerobio = 0.1 biomasa

Rendimiento = Y =
0.5

m.o.
aerobio

50% Biomasa + 50%

produccin de metabolitos y
mantenimiento celular.

Sustrato
(S0)
m.o.
anaerobio

Rendimiento = Y =
0.1

10% Biomasa + 90%

produccin de metabolitos y
mantenimiento celular.

Composicin celular
Cantidad
Cantidad
Cantidad
Cantidad

de
de
de
de

C = 50%
N = 8%
P = 5%
S = 3%

El hidrgeno y el oxgeno constituyen el

agua

Ejercicio 1
Disear un medio de cultivo para un m.o.
hetertrofo simple anaerobio.
Fuente de C: glucosa
Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl
Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO 4
Fuente de P: fosfato cido de potasio, KH 2PO4
La clula bacteriana tiene 50% C, 8% N, 5% P y 3% S.

Qu cantidad de cada uno de los compuestos se

tiene que aadir a 1 L de agua para producir 20
g/L de biomasa?

Solucin
Glucosa
20 g biomasa
L

0.5 g C
g biomasa

180 g Glucosa
72 g C

0.08 g C
g biomasa

53.5 g NH4Cl
14 g N

= 25 g/L

NH4Cl
20 g biomasa
L

= 6.1 g/L

MgSO4
20 g biomasa
g/L
L

0.03 g C

120.3 g MgSO4

g biomasa

32 g S

0.05 g C

136 g KH2PO4

= 2.25

KH2PO4
20 g biomasa
g/L
L

g biomasa

30.9 g P

= 4.42

Rendimiento
Glucosa
20 g biomasa
25 g/L
L
25 g Glucosa
x

0.5 g C
g biomasa

180 g Glucosa

72 g C

10% biomasa (anaerobio)

100% biomasa
x = 250 g Glucosa

Si el m.o. fuera aerobio, entonces se requieren

50 g Glucosa

Ejercicio 2
Formular y disear un medio de cultivo
para una bacteria mesoflica, hetertrofa
simple y anaerobia estricta, basado en 100
g/L de fuente de carbono.
Cuntos g/L de biomasa se producirn en
1 L de medio diseado?
Hetertrofa simple, anaerobia estricta.
Fuente de C: glucosa
Fuente de N: cloruro de amonio, NH4Cl
Fuente de S: sulfato de magnesio, MgSO4
Fuente de P: fosfato de potasio, K2HPO4