BIOSINTESIS Y BIOCONVERSION DE

METABOLITOS SECUNDARIOS POR CELULAS

CULTIVADAS IN VITRO

BIOTECNOLOGIA VEGETAL II

Eduardo

BIOSINTESIS Y BIOCONVERSION DE
METABOLITOS SECUNDARIOS POR CELULAS
CULTIVADAS IN VITRO
Produccin de sustancia de uso farmacutico,
agrcola o industrial
Promisorio para aumentar el rendimiento de los
principios activos presentes en las plantas y
controlar su produccin
Se hace necesario conocer la va de biosntesis de
los metabolitos, para poder mejorar su
rendimiento
Eduardo

LA FITOQUIMICA Y LOS METABOLIROS

SECUNDARIOS
La
Industria
farmacutica
se
basa
principalmente en la fitoqumica, ciencia
encargada de estudiar los principios activos de
las plantas.
Anteriormente, todos los medicamentos eran
obtenidos a partir de las plantas, actualmente
tambin se obtienen por sntesis qumica
Por medio de la fitoqumica se han aislado
muchos compuestos que aun no han podido
sintetizarse qumicamente.
Eduardo

LA FITOQUIMICA Y LOS METABOLIROS

SECUNDARIOS
La diosgenina fue aislada de Dioscorea
compositae. Es una sapogenina esteroidal,
base para la produccin de hormonas para el
control natal.
As como esta , se encuentran muchos
metabolitos en diferentes plantas, que tienen
un variado y diverso uso para la industria
farmacutica.

Eduardo

LIMITACION DE LA EXTRACCION DE LOS

PRINCIPIOS ACTIVOS EN PLANTAS
Algunos si no la mayora de los metabolitos
son difcil de sintetizar qumicamente.
Cuando se trata de la obtencin de extractos,
hay que esperar que las plantas tengan la edad
adecuada
para
obtener
los
mejores
rendimientos, los cuales son en algunas
ocaciones bastante bajos, requiriendo grandes
cantidades de material vegetal.

Eduardo

CONCEPTOS BASICOS
Metabolitos secundarios. Compuestos que no
tienen una funcin reconocida en el
funcionamiento de los procesos fisiolgicos
fundamentales de los organismos que los
producen.
Los metabolitos secundarios
siguientes funciones:

cumplen

las

Proteccin contra enfermedades

Competencia por el hbitat
Atrayentes, repelentes y simbiontes
Proteccin a estrs

Eduardo

LAS PLANTAS COMO FUENTE DE METABOLITOS

SECUNDARIOS
DE INTERS COMERCIAL

Potencial

- Medicinas
- Herbicidas
- Proteasas

75 % de las nuevas estructuras

descubiertas provienen de las plantas.

- Insecticidas
- Saborizantes
- Colorantes

Slo se tiene buen conocimiento de 5.000 de las

250.000-300.000 especies vegetales que se creen
existentes en el planeta.

- Fragancias
- Antimicrobianos
- Enzimas

qumicas

25 % de los medicamentos de las industrias

farmacuticas son de origen vegetal.
75 % de la poblacin mundial utiliza la medicina
tradicional que consiste principalmente
en
el uso de extractos provenientes de plantas.
Eduardo

PROCESOS INDUSTRIALES
Tipo de compuesto

Producto

Compaa

Farmacuticos

Shikonina

Mitsui Petrochemical Ind.

Berberina

Mitsui Petrochemical Ind.

Sanguinarina

Vigont Researol Lab.

Gingsensidos

Nitto Denko Co.

Taxol

Phyton USA

Pigmentos

Cartamina

Kibun Kyoto University

Fragancias

Geraniol

Kanedo Co.

Citronerol

Kanedo Co.

Saborizantes

Vanillina

Kanedo Co.

Depigmentadores

Arbutina

Mitsui Petrochemical Ind.

Eduardo

PRODUCCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS POR

CULTIVO IN VITRO DE CLULAS Y RGANOS
VEGETALES: POR QU?
Independizarse de factores externos tales como:

Cambios de temperatura, sequas, plagas,

variabilidad de la produccin, factores polticos
sociales, etc.

Evitar la extincin de especies vegetales.

Disponer de condiciones controladas en el proceso
de produccin y extraccin.
Eduardo

PRODUCCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS POR

CULTIVO IN VITRO DE CLULAS Y RGANOS
VEGETALES: POR QU?
Posibilitar el mejoramiento vegetal en tiempos mas
cortos.
Hacer viable la produccin de compuestos
complejos con uno o ms C quirales en forma ms
econmica respecto de la sntesis qumica
Posibilitar la obtencin de nuevos compuestos no
presentes en la planta madre.
Establecer procesos de biotransformacin slo
realizables por enzimas provenientes de plantas.
Eduardo

TECNICAS PARA LA PRODUCCION DE

METABOLITOS SECUNDARIOS
Para que la tcnica de cultivo de clulas
vegetales tenga xito en la produccin de
metabolitos, debe producirse en grandes
cantidades, para ello se debe:
Seleccionar variantes genticas sobre
productoras.
Por
medio
de
micro
espectrofotometra y fluorocitometra, para
determinar la concentracin intracelular del
compuesto
Optimizar el medio de cultivo
Producir biomasa en gran escala
Eduardo

OPTIMIZACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

La acumulacin de metabolitos secundarios en
el medio, limita el crecimiento de las clulas,
por ende el rendimiento de su produccin. Por
tanto, hay que definir la relacin de produccin
de biomasa y la acumulacin de productos
Es necesario tener en cuenta:
Factores nutricionales y pH
Factores fsicos
Reguladores
Eduardo

FACTORES NUTRICIONALES Y PH
Concentraciones elevadas de macro nutrientes,
permiten un crecimiento acelerado de las
clulas.
La sustitucin de nitrgeno inorgnico por
nitrgeno orgnico, incrementa la produccin.
Bajos niveles intracelulares de fosfatos,
pueden
incrementar
la
biosintesis
de
metabolitos secundarios.
pH optimo entre 5 y 6, los cambios de pH
pueden alterar la produccin del metabolito.
Eduardo

FACTORES NUTRICIONALES Y PH
La fuente de carbono, principalmente sacarosa
y glucosa, son importantes para el crecimiento
celular, pero la adicin de estas tambin
influyen en el rendimiento y produccin de
metabolitos secundarios.

Eduardo

FACTORES FISICOS
Luz: La longitud de onda, la intensidad y el
fotoperiodo, pueden estimular o inhibir la
biosntesis
de
algunos
metabolitos
secundarios.
La aireacin ya sea por flujo controlado de
gases
o
por
agitacin
mecnica
es
indispensable para el aumento de biomasa y
afecta la acumulacin de metabolitos.
Temperatura: no existen datos de que afecte la
biosntesis de metabolitos, pero es un factor
que no se debe descuidar. El optimo es
alrededor de 25 C, pero puede variar
dependiendo de la especie y el metabolito

Eduardo

REGULADORES DE CRECIMIENTO
Inducen
la
formacin
de
secundarios in Vitro e in vivo.

metabolitos

La cantidad y calidad de las auxinas presentes

al principio del desarrollo del cultivo tiene un
marcado efecto sobre el metabolismo primario
y secundario..
Las poliaminas regulan el metabolismo celular
y pueden tener efectos importantes en la
produccin de metabolitos secundarios, la
espermidina previene el envejecimiento e
incrementa la cantidad y variedad de
compuestos acumulados en clulas de rosa.
Eduardo

OTROS FACTORES
El carbn activado induce sntesis de ciertos
compuestos, como la benzoquinona.
La infeccin con microorganismos patogenos
induce la produccin de una gran variedad de
metabolitos secundarios.
La adicin de extractos microbianos induce la
produccin
de
alcaloides,
flavonoides,
cumarinas en las clulas cultivadas In Vitro.

Eduardo

SECUENCIA EN LA OPTIMIZACIN DE UN PROCESO PARA LA

PRODUCCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Seleccin de la planta por su contenido de metabolitos secundarios para iniciar
cultivos in vitro

Establecimiento de cultivos in vitro

Estabilizacin y seleccin de cultivos in vitro: velocidad de crecimiento, niveles de

producto, liberacin al medio

Optimizacin de medio de cultivo para produccin por diseo factorial: nutrientes,

precursores, elicitacin, liberacin y remocin in situ

Optimizacin en bioreactores: escalado Sistema de cultivo: batch, continuo, fedbatch, perfusin, en dos etapas. Extraccin y purificacin del producto

Eduardo

ESTRATEGIAS DE SELECCION DE LINEAS

CELULARES DE ALTO RENDIMIENTO
Seleccin de plantas con alto rendimiento
para el metabolito deseado.
Establecimiento de lneas celulares a partir de
la planta seleccionada.
Desarrollo de u medio optimo de crecimiento
(no considera la produccin de metabolitos).
Desarrollo de condiciones para inducir la
sntesis de los productos secundarios.
Seleccin clonal de las lineas celulares de
alto rendimiento.
Desarrollo de un medio optimo para la
produccin del metabolito secundario.
Eduardo

METODOLOGAS UTILIZADAS PARA OPTIMIZAR LA

PRODUCCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

Seleccin de especies vegetales apropiadas

Seleccin de lneas celulares mejoradas
Optimizacin de las condiciones de cultivo
Agregado de precursores
Tipo de cultivo: suspensiones, rganos o clulas
inmovilizadas
Uso de elicitores microbianos y estrs abitico
Permeabilizacin y remocin in situ
Eduardo

METODOLOGAS UTILIZADAS PARA OPTIMIZAR LA

PRODUCCIN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
Screening y seleccin de lneas sobreproductoras
Se facilita cuando el metabolito de inters es un pigmento, ya que puede hacerse
una seleccin visual.
Es importante contar con un mtodo rpido y sencillo para seleccionar lneas ms
productoras (por ejemplo, ELISA).

Optimizacin del medio de cultivo (variables ms

ensayadas)
Fuente de carbono
Limitacin en nitrgeno
Limitacin en fosfato
Hormonas (auxinas, citoquininas, giberelinas)
Relacin C/N

Agregado de precursores
Bajo costo
Baja toxicidad
No muy alejado del producto final en la ruta metablica

Eduardo

MODIFICACION GENETICA PARA OBTENER

LINEAS SOBREPRODUCTORAS.
Hasta el momento ha sido difcil, porque no se
conocen las enzimas involucradas ni las vas
de sntesis de los metabolitos
Existen enzimas que desvan el metabolismo
primario
hacia
las
vas
metablicas
secundarias, lo que las hace importantes para
la manipulacin gnica.
La fusin somtica es ampliamente utilizada
para obtener lneas sobre productoras de
metabolitos secundarios.
Eduardo

MODIFICACION GENETICA PARA OBTENER

LINEAS SOBREPRODUCTORAS.

Los cultivos de tejidos organizados producen

cantidades mucho mayores de metabolitos que
la clulas en suspensin, pero son difcil de
mantener.
Sin embargo, utilizando lneas tumorales
obtenidas con Agrobacterium se obtienen
mejores rendimientos.

Eduardo

PERSPECTIVAS DE LA MODIFICACION
GENETICA
La sobre expresin constitutiva de genes
involucrados en la ruta biosinttica de
metabolitos
secundarios
podr
aumentar
significativamente la cantidad de compuestos
tiles producidos en plantas.
Los avances en esta rea permitirn aumentar
las productividad de metabolitos secundarios
obtenidos en cultivos in vitro con la consiguiente
reduccin de costos de produccin o logrando la
produccin de nuevos compuestos.
Eduardo

CULTIVO A GRAN ESCALA

Para la produccin industrial se requieren
grandes volmenes de mezclas de reaccin y
medios de cultivo para obtener toneladas del
producto.
El cultivo a gran escala presenta las siguientes
dificultades:
Crecimiento lento de la biomasa
Tendencia a la agregacin celular
Acumulacin intracelular de los productos
Poca resistencia a la agitacin mecnica
Eduardo

SOLUCIONES:

Inmovilizacin de clulas
en matrices inertes.
Permeabilizacin
Remocin del producto
Diseo de bioreactores
especiales.

Eduardo

INMOVILIZACIN DE CLULAS EN MATRICES

INERTES
Los sustratos para inmovilizacin
DEAE sephadex
Dextrano
Carboximetil celulosa
Lana metlica
Colgeno
Geles de alginato y celulosa

Eduardo

Ventajas:
Las clulas inmovilizadas tienden a crecer
mas lentamente y a diferenciarse, situacin que
conduce a una acumulacin de metabolitos
secundarios.
La inmovilizacin de las clulas permite
cambiar con facilidad la composicin qumica
del medio de cultivo y colectar los productos
secretados sin tener que manipular a las
clulas.
No se afectan las condiciones metablicas de
las clulas
Presentan una viabilidad superior a las
cultivadas libres en las mismas condiciones.
Eduardo

PERMEABILIZACION DE LAS CELULAS

VEGETALES
La mayora de las clulas vegetales no secretan
sustancias al medio de cultivo, si no que
tienden a almacenarlas en vacuolas, esto
implica la necesidad de extraer y purificar las
sustancias y al mismo tiempo regenerar la
biomasa, lo que implica mayores gastos.
La Permeabilizacin celular se puede inducir
por medio de tratamientos qumicos.
Dimetilsulfoxido (DMSO) de 10 al 30 % por 30
min.

Eduardo

PERMEABILIZACION DE LAS CELULAS

VEGETALES
DMSO
Shock trmico
Cambios de pH
Limitacin de fosfato y oxgeno
Elicitacin
Detergentes y aceites de siliconas
Electropermeabilizacin
Eduardo

REMOCIN DE PRODUCTO IN SITU

Lquido-lquido:
Compuestos inmiscibles en agua, como solventes
orgnicos o lpidos (sistemas de dos fases aguaorgnico).
Ejemplos: migliol, hexadecano, dodecano.
Compuestos miscibles en agua, como sales o
soluciones de polmeros (sistemas de dos fases
acuosas).
Ejemplos: DEAE, PEG.
Eduardo

REMOCIN DE PRODUCTO IN SITU

Slido-lquido:
La segunda fase es un material slido como resinas u
otros absorbentes. Generalmente resinas como XAD,
RP18, etc.
Requerimientos:
Autoclavables
No txicos
Fcil separacin del producto de inters de la
segunda fase
No modificacin del medio de cultivo
Permanencia de las clulas en la fase acuosa
Eduardo

BIOREACTORES
Por las caractersticas estructurales de las
clulas vegetales, no se utilizan los mismos
bioreactores
para
el
cultivo
de
microorganismos,
porque
deben
tener
sistemas de agitacin y aireacin especiales.
Caractersticas a considerar.
Las clulas vegetales son 10 a 100 veces mas
grandes que las clulas microbianas, por la que
tienden a sedimentarse con rapidez
Aumento en la viscosidad del cultivo, por lo
que tienen que estar bien agitados, pero no se
puede hacer por sistemas que generen grandes
turbulencias
Eduardo

Caractersticas a considerar.
Las paredes celulares vegetales presentan
baja resistencia a la agitacin y la ruptura del
tonoplasma
ocasiona
la
liberacin
de
sustancias toxicas que limitan el crecimiento.
Deben realizarse bajo asexia rigurosa, debido
a que las clulas vegetales no pueden competir
con los microorganismos.

Eduardo

PATRN DE FLUJO DE DOS DISEOS DE PROPULSOR

PARA BIOREACTORES
Agitador de paletas planas o Rushton

Agitador de paletas inclinadas

Eduardo

DISEOS ALTERNATIVOS PARA BIORREACTORES

CON AGITACIN MECNICA

Biorreactor de tambor rotatorio

Biorreactor de membranas

Eduardo

BIORREACTORES PARA EL CULTIVO DE RACES

Bioreactor de lecho de goteo
con malla para inmovilizar a las races
Inculo

Bioreactor de lecho de niebla

(nutrient mist reactor)

Salida de aire

Malla de
inmovilizacin

Rotmetro

Bomba
peristltica

Adicin de nutrientes
Filtro de aire

Bomba de aire

Generador de niebla
Aire

Aire

Bomba

Reservorio

Intensidad
On

Condensador
de niebla

Off
Controlador

Cmara
de cultivo

Eduardo

ADAPTACIONES PARA LA EXTRACCIN IN SITU DEL

PRODUCTO

Diagrama de un tanque de agitacin mecnica modificado

para operar con remocin in situ del producto.
1: tanque; 2: malla de acero inoxidable para inmovilizar
races; 3: sensor de oxgeno; 4: malla acero inoxidable; 5:
medidor DO; 6: agitador; 7: lana de vidrio; 8: resina XAD2; 9: filtro de vidrio; 10: generador de aire; 11:
condensador;
12: marco de la malla

Un bioreactor de agitacin por lquido

con loop externo

Eduardo

BIOREACTOR
INDUSTRIAL

Eduardo

INGENIERA METABLICA
Es posible alterar rutas metablicas para permitir
que las plantas, o sus clulas, funcionen como
bioreactores (reactores biolgicos).
Es posible, de esta manera, la produccin de
sustancias de valor farmacolgico, como por
ejemplo, vacunas y biofrmacos.
La manipulacin del metabolismo secundario de
vegetales, por medio de la transformacin gentica,
promete ser una de las contribuciones ms
importantes de la ingeniera gentica aplicada a la
industria.

Eduardo

ESTRATEGIAS PARA MODIFICAR EL METABOLISMO

SECUNDARIO MEDIANTE MANIPULACIN GENTICA
Completar rutas metablicas mediante insercin de genes
heterlogos.
Amplificar rutas normales.
Bloquear rutas alternativas.
Bloquear rutas normales.
Modificar la regulacin de rutas normales.
Modificar los mecanismos de secrecin y exportacin.
Bloquear rutas de degradacin.
Eduardo

EJEMPLOS DE METABOLITOS SECUNDARIOS

PRODUCIDOS POR CULTIVOS IN VITRO DE CLULAS
VEGETALES
METABOLITO SECUNDARIO

CULTIVO PRODUCTOR

Acido rosmarnico

Anchusa officinalis

Ajmalicina

Catharanthus roseus

Berberina

Coptis japonica

Digoxina

Digitlis lanata

Ginsensidos

Panax ginseng

Hiosciamina

Hyoscyamus niger

Nicotina

Nicotiana tabacum

Piretroides

Pyrethrum cinerea

Shikonina

Lithospermum erytrorhizon

Taxol

Taxus cuspidata

Vinblastina

Catharanthus roseus
Eduardo

PROCESO PARA LA PRODUCCIN DE SHIKONINA A PARTIR DE

CLULAS DE Lithospermum erythrorhizon

Eduardo

RETOS
Aspectos bioingenieriles
Diseo de bioreactores especiales para cultivos de tejidos vegetales
Instrumentacin y control de los bioprocesos
Diseo de bioreactores ms econmicos
Mtodos no letales para liberacin de los metabolitos secundarios
Mtodo adecuado para la remocin in situ
Aspectos Biolgicos
Conocimiento de la regulacin de las rutas biosintticas: enzimas y
factores de transcripcin
Conocimiento de la regulacin del transporte y acumulacin de los
metabolitos secundarios
Conocimientos de los mecanismos de degradacin del producto
Eduardo

BIOTRANSFORMACIN
Se usan para realizar reacciones bioqumicas sencillas
en las que no se necesita diferenciacin ni crecimiento
celular
Hidroxilacin estereoespecfica en posicin 12- de la
- metil digoxina, glicsido cardiotnico, por clulas
de Digitalis lanata.

Eduardo

DIFERENCIAS MS IMPORTANTES EN EL CULTIVO

DE CLULAS MICROBIANAS, ANIMALES Y
VEGETALES
CARACTERSTICA

CLULAS
MICROBIANAS

CLULAS
ANIMALES
105-106 m3

CLULAS
VEGETALES

Tamao

1-5 m3

Forma de crecimiento

Clulas individuales Individuales o

adheridas a
superficies

En grupos

Tiempo de generacin

1 hora

20horas

>24 horas

Sensibilidad al
esfuerzo cortante

baja

alta

Alta

Requerimiento de
oxgeno

Hasta 180 mmol l-1h-

0.7-1.0 mmol l-1 h-1 0.5-1.8 mmol l-1h-

Requerimientos
nutritivos

simples

complejos

Simples

Poblacin celular
alcanzada en cultivo
lquido

1010 clulas ml-1

106 clulas .ml-1

106 clulas .ml-1

105-106 m3

Eduardo

MOLECULAR FARMING

Eduardo

Qu es?
El Molecular farming
es la produccin de
protenas de alto
valor agregado en
plantas.

Cmo se hace?
Se usa el mejoramiento
gentico para introducir y
expresar genes que
codifican para protenas

Por qu en plantas?
En las plantas las protenas se pueden
producir a muy bajos costos y en
grandes cantidades. Tambin son
flexibles y pueden producir una gran
variedad de protenas.

Transformacin
1 El disco de la hoja es sumergida en una suspensin
bacteriana. LA bacteria infecta los bordes de la hoja y
en este proceso integra los genes que codifican para
la protena de inters en el genoma vegetal.
2 & 3 Despus de la infeccin los discos se ubican en
medio de seleccin para las clulas que portan el gen
de la protena y regeneran en plntulas. Luego de
aproximadamente seis semanas en medio de
seleccin, un gran nmero de plntulas que portan el
gen de inters son visibles en los bordes.
4 se remueven las plntulas de los bordes de hojas
y se colocan en cajas plsticas transparentes con
medio de enraizamiento.
5 Las plntulas se colocan en macetas y crecen
hasta producir semillas. Estas semillas pueden ser
usadas para la produccin en gran escala de
protenas de inters farmacutico..
Trfico
Proteico
6 Luego de la traduccin, la protena se mover a
travs del retculo endoplsmico y el aparato de Golgi
para su procesamiento, plegado y glicosilacin..
Produccin
en
campo
7 Luego de la cosecha el tejido que acumula la
protena puede ser directamente consumido o la
protena puede ser extrada para un uso posterior.

Eduardo

PROTENAS OBTENIDAS POR MOLECULAR

FARMING

Reactivos de diagnstico
Vacunas animales
Alimentos animales
Enzimas industriales
farmacuticos para el hombre

Eduardo

VENTAJAS DEL MOLECULAR FARMING PARA LA

PRODUCCIN DE PROTENAS DE USO
FARMACUTICO Y ENZIMAS INDUSTRIALES

Riesgos sanitarios
patgenos

reducidos

de

contaminacin

por

Pueden ser escalados a costos relativamente bajos

Son capaces de modificaciones postraslacionales proteicas

Requieren de infraestructuras limitadas (para cultivo,

cosecha, almacenamiento y procesamiento del material
vegetal)

No se requiere, en muchos casos, la purificacin de la

protena (por ej. Procesamiento de alimentos, aditivos
alimenticios, fermentaciones y vacunas orales)
Eduardo

VALOR DE MERCADO DE LOS PRODUCTOS

PROTEICOS DEL MOLECULAR FARMING

La demanda del mercado de protenas para la

industria farmacutica se incrementa
Las protenas expresadas en plantas resultan al
menos 10 veces ms baratas que las expresadas
en otros sistemas (por ej, microorganismos)
El costo de vacunas expresadas en plantas ,
anticuerpos o protenas puede ser 100- 1000 veces
menor

Eduardo

VENTAJAS DE LOS VEGETALES COMO

BIOREACTORES
Las plantas son los productores ms eficientes de
protenas
son bioreactores escalables
presentas ventajas en cuanto a costos
Las clulas vegetales son similares a las humanas
en cuanto a:
Maquinaria para sntesis proteica
Pauta de lectura del cdigo gentico
Ensamble, plegamiento y secrecin de protenas
complejas

Eduardo

ANTICUERPOS
RECOMBINANTES EN
VEGETALES

Eduardo

LOS ANTICUERPOS PRODUCIDOS EN PLANTAS PUEDEN

SER UTILIZADOS EN ESPECIALIDADES MEDICINALES?

Los anticuerpos producidos en plantas son

seguros y efectivos?
Los glicanos vegetales pueden ser inyectados?
Son para administracin oral, inhalatoria o
tpica?
Las regulaciones de FDA y USDA estn
evolucionando?

Eduardo

ETAPAS DEL PROCESO

Clonado y expresin de los genes de inters

Regeneracin y seleccin de las plantas
Recuperacin y purificacin de la protena
Caracterizacin del producto final

Eduardo

INTRODUCCIN DE GENES DE ANTICUERPOS EN

PLANTAS

Transformacin con Agrobacterium.

Microinyeccin de cDNA en ncleo antes de
reimplantarlo en una clula anucleada (Stieger et
al. 1991)
Expresin transiente en hojas (Schouten et al,
1996)
Mtodos biolsticos

Eduardo

COMPARACIN DE ANTICUERPOS DERIVADOS DE

PLANTAS Y CULTIVOS ANIMALES
Secuencia Peptdica: idntica
Afinidad: idntica
Tipos de Anticuerpos: El sistema vegetal es ms
verstil
Pueden producir isotipos incluyendo IgA
secretoras
Procesamiento Post-transduccional: diferente
ncleo de glicano idntico, azcar terminal
diferente
Antigenicidad & clearance: aparentemente
idnticos

Eduardo

ANTICUERPOS EFECTIVOS PRODUCIDOS EN

VEGETALES
Anti-Streptococcus mutans (Guys 13)
Previene caries dental en humanos
Las sIgA 10X de plantas son ms estables que IgG
Nature Medicine 1998
Anti-Herpes simplex virus (HSV8)
Previene la transmisin del herpes vaginal
Probado en ratones con PAbs de arroz y soja
Nature Biotechnology 1998
Eduardo

APLICACIONES DE LA INMUNOMODULACIN

Estudiar la funcin de un antgeno o incluso de un

epitope en las plantas
Modificar caracteres agronmicos
Inmunizar a la planta contra un determinado
agente.

Eduardo

INMUNOMODULACIN DE BLANCOS ENDGENOS

Actividad de fitohormonas
ABA (scFv en ER de tabaco)
Giberellina (A 19/24 scFv en tabaco)
Inactivacin de producto final en la ruta
biosinttica de una hormona (ABA)
Modulacin de la actividad del receptor
hormonal (scFv contra fitocromo)
Inhibicin enzimtica (DFR en Petunia hybrida)

Eduardo

INMUNIZACIN INTRA Y EXTRACELULAR

Tabaco que expresa anticuerpos contra la cubierta

viral proteica de TMV
Nicotiana benthamiana que expresa anticuerpos
contra el virus BNYVV
Tabaco que expresa scFv contra factores de
infectividad de fitoplasmas y espiroplasmas
Tabaco resistente a nematodes (IgM contra
Meloidogyne incognita)

Eduardo

ANTICUERPOS CONTRA NEMATODES

Genes que codifican para enzimas blanco: p.ej
celulasas las cuales han sido clonadas de M. incognita
as como de otros nematodes de este tipo. Estas
enzimas desempean un papel fundamental en la
migracin hacia raz y son un excelente punto de
partida para la seleccin de anticuerpos .Se han
generado tambin anticuerpos que bloquean el inicio
del ciclo celular para evitar la induccin de las clulas
de alimentacin por el nematode.
Se han obtenido y caracterizado por su capacidad para
inhibir sus blancos anticuerpos contra las protenas de
TSWV :N (importante para la replicacin viral), G1/G2
(captacin por thrips) y NSm (distribucin en la planta).
Se han hallado motivos estabilizadores que aseguran
un nivel de expresin significativo de los anticuerpos y
sus fragmentos en el citosol de la clula vegetal.
Eduardo

PERSPECTIVAS

Regulacin metablica.
Plantas con resistencia a virus mediada por plantibodies
Reduccin del uso de pesticidas: resistencia a pestes e
insectos
Modulacin de antgenos (DH4R)
Estudio del rol fisiolgico de hormonas.
Remocin de polutantes de suelos (Ac contra txicos
orgnicos, compuestos potencialmente carcinognicos,
herbicidas)
Remocin de polutantes de aguas ( inmovilizacin el Ac en
soporte slido)
Biofarming: produccin de molculas industriales o
farmacuticas basada en cultivos vegetales. (1% TSP:
expresin costo-efectiva). Anlisis de especie, rgano.
diagnstico

Eduardo

CUL ES EL DESAFO?

Desarrollo de drogas para el tratamiento de ciertas

enfermedades; las protenas son la clase en ms
franco desarrollo para la prevencin y tratamiento de
enfermedades.
Desarrollo de resistencia contra patgenos
(microorganismos y patgenos ms complejos
como nematodes)
Anlisis y manipulacin de rutas biosintticas.
Seguridad y Eficiencia
tica

Eduardo