UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

DEPARTAMENTO DE QUIMICA

DETERMINACION DE PROTEINAS
(METODO KJELDAHL)

BROMATOLOGIA

III. DETERMINACIN DEL NITRGENO TOTAL - METODO

MACRO KJELDAHL
FUNDAMENTO TEORICO:
El mtodo de Kjeldahl se ha convertido en el mtodo patrn para la determinacin
de Nitrgeno proteico de cereales, carnes y otros materiales biolgicos.
El nitrgeno se presenta en una gran variedad de sustancias orgnicas importantes
incluidas protenas, pptidos, drogas sintticas y fertilizantes. El mtodo se basa en
la oxidacin en caliente de la muestra orgnica con H 2SO4 cc, para transformar el
nitrgeno orgnico en sulfato de amonio, el cual es descompuesto posteriormente
con una base fuerte siendo entonces liberado el NH 3 a travs de una destilacin. El
NH3 ahora es capturado hacindolo reaccionar en una cantidad medida de cido
valorado, para finalmente titular el remanente de este cido que no fue consumido
por el NH3, lo cual se conoce como retrotitulacin. Generalmente se retrovalora
con NaOH estandarizado

MATERIALES Y REACTIVOS:
- cido Sulfrico cc (G.R.)
- Solucin de NaOH al 50 %
- Solucin Standard de HCl 0,1000 N
- Solucin Standard de NaOH 0,1000 N
- Mezcla Cataltica: Mezclan ntimamente 400 g de Na2SO4, 16 g de
CuSO4.5H2O y 3 g de SeO2.
- Indicador de Protenas (Rojo Enmascarado): Disolver 0.016 g de rojo
de
metilo y 0.083 g de verde de bromocresol en 100 mL de alcohol etlico
al 50 %.

PROCEDIMIENTO:
1. Pesar una muestra entre 0.252.5 g segn el contenido de N y colocar en
baln Kjeldahl de 500mL.
2. Aadir 8 g de mezcla cataltica y 25 mL de H2SO4 cc libre de nitrgeno.
Mezclar por agitacin.
3. Realizar la digestin en caliente dentro de campana para gases.
4. Calentar gradualmente hasta que el lquido hierva moderadamente. Asegurar
la reaccin total del material.
5. Una vez aclarado el lquido, se contina calentando durante 1 hora. Dejar
enfriar a temperatura ambiente.
6. Diluir la mezcla con 200 mL de agua y trasvasar a un baln de destilacin de
1 L.
7. Lavar el baln Kjeldahl con pequeos volmenes de agua destilada hacia el
baln de destilacin, hasta completar un volumen de aproximadamente 400
mL. Adicionar trozos pequeos de perlas de vidrio.
8. Adicionar 5 gotas de indicador fenolftalena, y conectar al refrigerante.
9. Depositar 50 mL (V1) de una solucin estndar de HCl 0,1000 N (N 1) y 5
gotas del indicador de protenas en un frasco lavador de gases. Conectar a la

10. Agregar al baln de destilacin,(por la trampa con llave), 75 mL de

NaOH al 50 %. Cerrar todo el circuito. En realidad la cantidad de
NaOH es hasta que cambie el color del indicador de Fenolftalena
11. Tratar de uniformizar con cuidado la mezcla dentro del baln.
12. Destilar hasta obtener un recuperado dentro del frasco lavador de gases
de aproximadamente 120 mL.
13. Abrir la llave de la trampa de entrada del NaOH, (es crucial en el xito
realizar primero este paso). Ahora recin podemos retirar el sistema de
calefaccin.
14. Lavar el interior del condensador con pequeos volmenes de agua destilada
hacia el lavador de gases.
15. Trasvasar todo el contenido del frasco lavador a un matraz Erlenmeyer de 500
mL.
16. Adicionar 3 gotas del indicador de protenas y titular con la solucin estndar
de NaOH 0,1000 N. el volumen gastado se denominara(V 2)
17. Correr un blanco (Vb)
18. Anotar el gasto y realizar los clculos para determinar el % Nitrgeno y luego
aplicar el factor adecuado para transformarlo en % Protena.

Notas
-La muestra, a no ser de que el producto sea lquido, se pesa
en un papel de filtro colocado sobre un vidrio de reloj, se enrolla
papel y contenido y se deja caer directamente al fondo del matraz.
Un papel de filtro similar deber emplearse para el blanco.
- Evitar que el producto no se adhiera al cuello del matraz.
-Productos gruesos requieren ms cido, y en ese caso tambin se
utilizar ms lcali para la destilacin.
- Colocar el matraz de tal forma que se pueda agitar fcilmente.
-Es importante verificar el medio bsico antes de realizar la
destilacin, lo que se comprueba cuando el lquido pasa de azul claro
a oscuro debido al efecto sobre el catalizador de cobre.
-Verificar la velocidad de flujo del agua en el refrigerante para
mantener una condensacin adecuada.

CALCULOS:
Aplicar la relacin si no se usa blanco
% N = (N1 * V1 - N2 * V2 ) * 0,014 * 100
Wm
Dnde:
N1
N2
V1
V2
Entonces:

=
=
=
=

normalidad de la solucin estndar de HCl 0.1000 N

normalidad de la solucin estndar de NaOH 0.1000 N
mL utilizados de la solucin estndar de HCl 0.1000 N
mL gastados de la solucin estndar de NaOH 0.1000 N

% Protenas = % N * 6.25

Nota: Cuando no se conoce el factor para un alimento se usa el factor universal =

6.25
Si se conoce el alimento se busca en tablas el factor correspondiente se
reemplaza por el 6.25

RESULTADOS
Muestra
N1
N2
V1
V2
Vb
Wmuestra
%N
%Pproteinas

Ingredientes
CEREALES
Trigo, duro, medio o suave
Harina, harina integral, trigo completo
Harina, extraccin media o baja
Harina de trigo y derivados
Macarrones, espagueti, pastas de trigo
Salvado
Arroz
Centeno, cebada, avena
Frijol de soya y productos, soya
LEGUMINOSAS, NUECES Y SEMILLAS
Cacahuate
Soya, semillas, harina o productos
NUECES
Almendra
Nuez de Brasil

Factores de
conversin

5,70
5.83
5.70
5,70
5.70
6.31
5.95
5.83
5,71

5.46
5.71

5.18
5.46

PROCEDIMIENTO:
Podemos
distinguir
las
siguientes
secuencias al realizar la determinacin:
1. Digestin.
2. Destilacin.
3. Valoracin.

1. DIGESTION

DE LA MUESTRA.

Pesar una cantidad apropiada de muestra bien homogeneizada

(p.e. 1,3 - 1,6 g. de avena)
2. Transferir a un baln Kjeldahl de 500 mL.
3. Pesar y colocar en el baln Kjeldahl :
7 g de K2SO4 (g.r.)
0,5 g de CuSO4 (g.r.)
0,1 g de Selenio (g.r.)
1.

10

4. Colocar en el baln 25 mL de H2SO4 concentrado.

Mezclar suavemente el contenido del baln.
5. Poner a ebullicin suave hasta que la mezcla sea
lmpida y de un color ligeramente azul.

11

6.

Calentar a ebullicin durante 15 minutos ms hasta

la completa destruccin de la materia orgnica.

7. Dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente.

12

4.2 Destilacin:

1. Transferir completamente el contenido del baln

Kjeldahl hacia el baln de destilacin.
2. Aadir agua destilada al baln hasta aproximadamente
unos 300 mL y luego se adiciona 6 8 gotas de
Indicador Fenoltalena.

13

3. Tapar el baln con un tapn acoplado con

embudo con llave y un deflegmador.

un

4. Instalar el baln en el equipo de destilacin.

14

5. El refrigerante del destilador debe estar conectado a

un sistema de frascos Lavadores de Gases.
6. Estos frascos lavadores contienen en total 50 mL de
solucin de HCl 0,1N valorada, al cual se le adicion
5 7 gotas del Indicador de Protenas.
15

7. Adicionar a travs del embudo con llave 50 75 mL de NaOH

al 50%, despus de adicionado cerrar inmediatamente la llave.
8.Colocar al baln una hornilla elctrica para dar inicio a la
destilacin del lquido alcalino.

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9. Se da por concluido la destilacin cuando en los

frascos lavadores de gases se halla captado
aproximadamente unos 120 mL de destilado.
10.El destilado obtenido en los frascos lavadores de
gases se trasvasa a un matraz de 500 mL.

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4.3 Valoracin:

1. Llenar la bureta con una solucin de NaOH 0,1 N

valorado.
2. Valorar el contenido del matraz, en agitacin
constante, con la solucin de NaOH 0,1 N hasta cambio
de color de rojo a azul transparente.
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V. REACCIONES.
Muestra (N-orgnico ) + H2SO4
+ SO2 + H2O
HSO4(NH4)
2 H 2O

+ 2NaOH

NH3(g)

H 2O

NH4OH

HCl

HCl

NaOH

HSO4(NH4) + CO2

NH3(g)

+ Na2SO4 +

NH4OH

NH4Cl +

H 2O

NaCl

H 2O

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