BIOGENETICA E

INGENIERIA GENETICA

FLORES PANGALIMA DIDIER

GUERRERO ALVARES JUAN
GUERRERO VALLEJOS HAROLD
ROJAS LLOCLLA WILLIAM
SILVA RIBERA JUNIOR

BIOTECNOLOGIA
Es el conjunto de tcnicas o procesos que emplean
organismos vivos o sustancias que provengan de
ellos para producir alimentos, medicinas y otros
productos tiles para personas, industria y
medioambiente.

Biotecnologa: Conjunto de tcnicas que utilizan las potencialidades de

los organismos vivos o de compuestos procedentes de ellos (enzimas,
hormonas, antibiticos .), para la obtencin de productos, bienes y
servicios
Biotecnologa tradicional:
procesos de fermentacin
de bacterias y levaduras
desde hace miles de aos

Biotecnologa contempornea
Clonacin, nanotecnologa,
biomateriales, reprogramacin

Biotecnologa moderna: en los ltimos

30 aos, avances en microbiologa,
inmunologa e ingeniera gentica, con
manipulacin selectiva y programada de
material gentico

APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA

APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGA
ROJA - Aplicaciones mdicas
Obtencin de nuevos productos y frmacos por organismos
Produccin de Ac monoclonales
Desarrollo de terapias gnicas y celulares

VERDE Aplicaciones agrcolas y ganaderas

Desarrollo de cereales resistentes a plagas
Desarrollo de animales resistentes a enfermedades
Desarrollo de plantas que expresen pesticidas

AZUL Aplicaciones acuticas y marinas

Uso de plantas y productos marinos para obtener nuevos frmacos
Restauracin y preservacin de especies acuticas
Uso de genes de organismos acuticos para obtener resistencias

BLANCA Aplicaciones a procesos industriales

Produccin de nuevos compuestos
Desarrollo de combustibles nuevos
Uso de bacterias para eliminar vertidos de petrleo

ORGANISMOS TRANSGNICOS
Organismo transgnico: es aqul que ha sufrido la alteracin de su material
hereditario (genoma) por la introduccin artificial (manipulacin gentica) de un
gen exgeno, esto es, proveniente de otro organismo completamente diferente.
Aparentemente no existen barreras para mezclar los genes (DNA) de dos
especies diferentes. Existen bioherramientas moleculares para componer y
descomponer al DNA, intercambiando as fragmentos especficos de ADN de
distintas especies e incluso transferirlos a bacterias.
Se descubri posteriormente que esta prctica se vena haciendo en la
naturaleza de forma espontnea desde hace millones de aos en los
vegetales a travs de la bacteria llamada Agrobacterium tumefaciens.
Las bacterias producen hoy en da, protenas humanas por ingeniera gentica
como el interfern, la insulina y la hormona del crecimiento, de gran importancia
en la medicina.

ORGANISMOS TRANSGNICOS
Microorganismos transgnicos
Produccin de alimentos, Eliminacin de
basuras, Obtencin de materias primas para
la industria, Descontaminar lo que las
industrias han contaminado

Plantas transgnicas "nueva revolucin verde

Resistentes a sequas, a herbicidas o a plagas
de insectos, Maduracin tarda o con
caractersticas para mantener el color y sabor
despus de congelacin
Ejemplos : algodn, la soja, la papa, el tomate
y al maz

Animales de granja
(cerdos, ovejas, borregos)
"biorreactores de protenas teraputicas
humanas en su leche (antitripsina, factor
VIII de coagulacin)

INGENIERA GENTICA

La Ingeniera Gentica
Conjunto de tcnicas, nacidas de la Biologa molecular, que permiten
manipular el genoma de un ser vivo, introduciendo genes en un organismo
que carece de ellos
Se realiza
por
Incluy
e

Enzimas de restriccin
Capaces de cortar el ADN por puntos
concretos

Tcnicas biotecnolgicas
Se obtiene

Recombinacin de ADN
Secuenciacin del ADN
Reaccin en cadena de la polimerasa
Aplicaciones diversas

ADN Recombinante
Segmento de ADN extrao intercalado
en un ADN receptor

Tcnicas de ADN recombinante: la manipulacin gentica

Entre los aos 70 y 80 se desarrollaron herramientas de la biologa

molecular y la ingeniera gentica, lo que se conoce como tcnicas del ADN
recombinante

La tcnica se fundamenta en:

Doble cadena del ADN
Complementareidad de bases
Siempre que se encuentren
secuencias complementarias se
unen
Orden de las bases determina
informacin de protenas
Cdigo
de
transcripcin
universal

Tcnicas de ADN recombinante: la manipulacin gentica

La rotura especfica del ADN mediante endonucleasas de restriccin,
que facilita el aislamiento y la manipulacin de los genes individuales.
La secuenciacin rpida de todos los nucletidos de un fragmento
purificado de ADN, que posibilita determinar los lmites de un gen y la
secuencia de aminocidos que codifica.
La hibridacin de los cidos nuclicos que hace posible localizar
secuencias
determinadas de ADN o ARN, utilizando la capacidad que tienen estas
molculas de unirse a secuencias complementarias de otros cidos
nuclicos.
La clonacin del ADN, mediante la cual se puede conseguir que un
fragmento de ADN se integre en un elemento gnico autorreplicante
(plsmido o virus) que habita en una bacteria, de tal manera que una
molcula simple de ADN puede ser producida generando muchos
miles de millones de copias idnticas.
La ingeniera gentica mediante la cual se pueden alterar
secuencias de ADN

Enzimas: Endonucleasas de restriccin

Endonucleasas de
Restriccin:
Enzimas que pueden cortar el
ADN y lo hacen en secuencias
concretas
Enzimas que las bacterias
usan para destruir ADN que
ingresa a ellas, por ejemplo
ADN de virus bacterifagos

Enzimas: Endonucleasas de restriccin

Se conocen mas de 1200

enzimas de restriccin

Eco RI (E. coli) reconoce

secuencias GAATTC y
corta entre G y A

Construccin de ADN recombinante

1 ADN plsmido
2 ADN extrao
3 Corte del plsmido y ADN
extrao con Eco RI
(endonucleasa de
restriccin)

4 Formacin de
extremos cohesivos
5 Formacin de ADN
recombinantes
6 Accin de ADN
ligasa que sella los
extremos

Construccin de ADN recombinante

Clonacin del ADN

La clonacin de un gen consiste en introducirlo en una clula de modo que se

copie y se mantenga
El gen se inserta en un ADN llamado vector de clonacin (plsmidos), capaz
de entrar y replicarse de forma independiente en una clula husped
Resultado: ADN recombinante. Permite obtener grandes cantidades del gen
insertado en la clula hospedadora adecuada apropiada
Las genotecas de ADN permiten guardar indefinidamente el ADN de un
organismo
Un plsmido recombinante en una bacteria se replica con ella pudiendo
obtenerse y aislarse millones de copias de dicho plsmido

Clonacin del ADN

Proceso de clonacin de un gen en bacterias

1. Obtencin de plsmido
recombinante
2. Transformacin de
bacterias
3. Seleccin de bacterias
transformadas
4. Crecimiento de
bacterias transformadas
5. Aislamiento de los
plsmidos recombinantes

Clonacin del ADN

Prcticas de ejercicios similares en la pgina indicada

Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), es una tcnica
que permite amplificar entre cientos de miles y millones de veces,
en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeas cantidades de
ADN.
Es un mtodo alternativo a la clonacin muy rpido y eficaz
Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite identificar un gen a
partir de un solo cabello, una clula somtica o un espermatozoide.
Ha facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de
identificacin de personas, por ejemplo de hijos de
desaparecidos, mediante el anlisis de muestras del nio y de su
abuela materna
Aplicaciones mdicas de la PCR en nuevas estrategias de
diagnstico: Detectar agentes infecciosos como los virus de las
hepatitis B y C
Regiones del genoma del virus de la
inmunodeficiencia humana (HIV) Diagnosticar la presencia o
ausencia de HIV en recin nacidos de madres seropositivas.
Diagnstico de hemofilias A y B, la distrofia muscular y la fibrosis

Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)

El mtodo se basa, en la realizacin de tres reacciones sucesivas llevadas
a cabo a distintas temperaturas. Estas reacciones se repiten cclicamente
entre veinte y cuarenta veces
Primer paso: La muestra se calienta hasta lograr la separacin de las dos
cadenas que constituyen el ADN, "desnaturalizacin".
Segundo paso: la temperatura se reduce para permitir el "apareamiento" de
cada una de dos cadenas cortas de oligonucletidos (inicidores o primers)
con cada una de las hebras separadas del ADN molde.
Los primers son sintetizados en el laboratorio y diseados de manera tal
que permiten definir los lmites del tramo de ADN que se desea replicar
Tercer paso: la ADN polimerasa produce la extensin de los primers, en el
espacio comprendido entre ambos, sintetizando las secuencias
complementarias de las hebras del ADN molde (la T la condiciona la
polimerasa

Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)

Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)

ADN polimerasa de E.
coli se desactiva a la
alta temperatura de la
desnaturalizacin
del
ADN, por lo cual deba
agregarse
enzima
fresca al comenzar el
tercer paso de cada
ciclo.
Este inconveniente fue
solucionado de manera
ingeniosa cuando se la
reemplaz
por
su
equivalente
de
la
bacteria
"termfila"
Thermus aquaticus

Reaccin en cadena de la polimerasa (Polymerase Chain Reaction)

APLICACIN: amplificar
ADN
Fragmentos de ADN
antiguos (momias, fsiles..)
ADN de la escena de un
crimen
ADN de clulas
embrionarias para
diagnstico prenatal
ADN de genes virales

SECUENCIACIN DEL ADN: Mtodo Sanger

Mtodos y tcnicas para determinar el orden de los nucletidos de un
determinado fragmento de ADN
Utilidad importante en biologa bsica y aplicada (forense)
Precisa gran cantidad del fragmento a determinar (clonacin)
Mtodo Sanger o didesoxi:
Fragmento de ADN (cantidad)
Cebador en el extremo 3 (20 bases)
ADN polimerasa
Desoxiribonucletidos (A,T,C,G)
Didesoxiribonucletidos marcados
radiactivamente (paran la sntesis)
Cuatro tubos diferentes con:
Polimerasa
dATP, dCTP, dTTP y dGTP
Un solo didesoxi marcado (ddATP)
Se forman fragmentos de distinto
tamao terminados en A 17

SECUENCIACIN DEL ADN

Los fragmentos de ADN obtenidos se separan por tamaos con electroforesis
Cada una de las cuatro muestras se insertan en un carril diferente del gel
Terminada la electroforesis se ponen en contacto con una pelcula fotogrfica

SECUENCIACIN DEL ADN: Mtodo Automtico

Marcaje de ddNTP con fluorescentes distintos puediendose leer al
mismo tiempo losADNs de las cuatro mezclas

Comparativa de los dos

mtodos

APLICACIONES DE LA BIOTECNOLOGIA

Produccin de Medicamentos

Diagnostico de enfermedades

Anlisis gentico de individuos

Mejora de cultivos y produccin de

plantas

Produccin de alimentos

Eliminacin de contaminantes

Produccin de energa

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente

Tradicionalmente se han mejorado los cultivos por seleccin de ejemplares
Actualmente se mejoran caractersticas con tcnicas de ADN recombinante:
-Plantas transgnicas-

El plsmido Ti o T-ADN
de Agrobacterium
Contiene genes (onc)
que provocan una mayor
produccin de hormonas
de crecimiento con la
formacin del tumor o
agalla.
Se eliminan de Ti los
genes onc y se sustituyen
por
otros
genes
que
interese clonar, se habr
obtenido un sistema eficaz
para
introducir
ADN
interesante a la planta,
evitando la aparicin de la
enfermedad

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente

Actualmente se consiguen mejorar diferentes caractersticas con
tcnicas de ADN recombinante -Plantas transgnicasResistencia a
herbicidas (mejora
vegetal)
Resistencia al
glifosfato herbicida
no selectivo, con gen
de E. coli resistente,
clonado e
incorporado
Resistencia a plagas,
con toxina de Bacillus
turingiensis
Resistencia a virus,
con protenas de la
cpsida
de
dicho
virus

FASES:
1. Transferencia
de genes

2. Regeneracin de
plantas completas

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente

Mejora del producto (alimentos)
Arroz transgnico arroz dorado- con caroteno (vit A)

Plantas farmaceticas
(biofarmacetica)

Produccin de protenas humanas,

vacunas, anticuerpos, mas econmicas y
contienen mecanismos de modificacin
postraduccional de las protenas, a
diferencia de las bacterias

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente

Medio Ambiente:Utilizacin de organismos genticamente modificados para eliminar
contaminantes

Biorremedacin: bacterias modificadas para degradar hidrocarburos

Bioadsorcin: Bacterias modificadas

que adsorben en su superficie metales
pesados

INGENIERA GENTICA: Agricultura y medio ambiente

Fitorremedacin: Plantas transgnicas que transforman contaminantes
peligrosos en sustancias inocuas

chopos modificados para acumular

metales, actualmente en condiciones
controladas en invernadero

La fitoestabilizacin :plantas que inmovilizan

los metales en el suelo por absorcin o
adsorcin en las races. Los contaminantes
permanecen retenidos bajo la superficie del
suelo
La fitoextraccin : plantas tolerantes capaces de
absorber los metales desde el suelo y acumularlos
en su biomasa area. Posteriormente, esta
biomasa es cosechada, incinerada y tratada como
residuo peligroso

INGENIERA GENTICA y GANADERA

Insercin de genes en vulos o clulas madre embrionarias:
Quimeras
transgnicas slo
sobre algunas clulas
del embrin
Clulas modificadas
Clulas no modificadas

Organismos
transgnicos todas las
clulas modificadas
Transmisin a la descendencia,
rganos y tejidos para trasplantes
1.Secuencia hibrida de gen de
inters y secuencia promotora
de una protena de la leche
2. Introducir el transgn en
vulo fecundado
3.Implantacin en la hembra
que lo expresar junto con la
leche
Ejs.: 1-antitripsina, factor
VIII,

INGENIERA GENTICA y MEDICINA

APLICACIONES

Obtencin de
productos
farmacuticos
Insulina
Interfern
H. De crecimiento
Factor VIII

Medicina forense
Marcadores
genticos
Huella gentica

Terapia gnica
Diagnstico de
enfermedades
Deteccin en
personas o fetos
enfermedades
hereditarias por
tcnicas de ADN
recombinante

Insercin de genes
funcionales para
corregir un defecto
gentico
En clulas germinales
En clulas somticas

Produccin de insulina humana

La forma activa de la insulina consta de dos polipptidos (A y B), que estn
codificados por partes separadas de un mismo gen. Estos se pueden obtener
en cultivos bacterianos separados.
Promotor

Subunidad A del
gen de la insulina

Promotor

Subunidad B del
gen de la insulina

Protena de fusin con subunidad A

del gen de la insulina

Transformacin
en E. coli

Extraccin de
Separacin de
las protenas de los polipptidos
fusin
AyB

Protena de fusin
con subunidad B del
gen de la insulina

Formacin
de insulina
activa

ANIMALES ACUTICOS
TRANSGNICOS
Especies

Ctenopharingodon idella carpa triploide de grama

Cyprinus carpio carpa comn
Carassius auratus pez dorado, goldfish
Pez de Wuchang / Charr del artico / Mummychog / Walleye
Pangio kuhli locha gigante / Esox lucio lucio del norte
Oncorhynchus mykis trucha arcoiris, O. kisuth salmn
Salmo salar salmn del Atlntico
Oreochromis spp tilapia
Artemia spp pulga de agua
Macrobrachium rosenbergii camarn de agua dulce
Penneus indicus camarn blanco
Haliotis kamtschatkana abaln japones
Haliothis rufescens abaln rojo
Mytilus edulis almeja azul
Crassostrea virginica ostra oriental
Crassostrea gigas ostra del Pacfico

Transgenes

Pases

Genes marcadores
Hormona de
crecimiento
Polipeptido
anticongelamiento
Cecropina
Interferon
Fitasa
Factor VII de
coagulacin humana
Genes reporteros
para contaminantes
GnRH antisentido
(liberacin Hormona
Gonadotropina)

USA
Canad
Cuba
Reino Unido
Francia
Noruega
China
Japn
Corea
India
Israel

Hallmark, E. 2003, ISB News Report, april

Ingeniera Gentica NUEVAS PLANTAS

ARROZ con altos niveles de tolerancia a diferentes condiciones ambientales de
estrs.
Se insertaron dos genes fusionados de trehalosa de E. Coli y un promotor tejido
especfico dependiente del estrs. Los genes de trehalosa permiten la produccin
de arroz an si est estresado por frio, sequa o altos niveles de salinidad e
incrementa la produccin en 20%.
El azcar trehalosa ayuda a estabilizar molculas biolgicas: lpidos, enzimas y
otras protenas, en organismos en condiciones de estrs. La composicin qumica
de los granos no cambia (PNAS Online, 27 nov. 2002).

Ingeniera Gentica: NUEVOS ALIMENTOS

Salmn transgnico por
hormona de
crecimiento.
Producido por AF Protein Inc. Cuenta con el
promotor de la protena de anticongelamiento de
otra especie de pez. Crece de 4 a 6 veces ms
rpido que un salmn no transgnico. Tiene un
20% en mejoramiento de la eficiencia de
conversin del alimento.

Ingeniera Gentica: NUEVOS ALIMENTOS

VACAS LECHERAS con incremento de protenas. En
Nueva Zelanda se clonaron vacas con vulos
mejorados genticamente, para mejorar la
produccin del queso y crema, aumentando dos
veces la kappa casena, crucial para hacer la
cuajada y de 20% ms de beta caseina, que mejora
la accin del cuajo

INGENIERA GENTICA EN LEVADURAS Y HONGOS

Son junto con las bacterias los sistemas mas utilizados. El
Saccharomyces cerevisina fue el primer sistema eucariota secuenciado
completamente. Otra levadura es P. pastoris, utilizada para conseguir
proinsulina en cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo continuo. En el
campo de los hongos destaca por su labor mdica el Penicillium.

Produccin animal por ingeniera gentica

Peces Transgnicos:
Las
principales
aplicaciones
en
animales se han realizado en peces,
debido a que la fecundacin es
externa,
lo
cual
permite
la
introduccin del gen en el cigoto
antes de que se unan el ncleo del
espermatozoide y del ovulo.
Mamferos:
Se han obtenido ratones transgnicos
con distintos genes modificados. Sin
embargo, todava su aplicacin para
la mejora de especies es preliminar,
enfocndose el estudios desde un
punto de vista mas bien puramente
cientfico.

INGENIERA GENTICA EN PLANTAS

En la actualidad se desarrollan mas de cuarenta especies de
plantas transgnicas, mediante ingeniera gentica se han
conseguido plantas resistentes a enfermedades producidas por
virus, bacterias o insectos. Estas plantas son capaces de producir
antibiticos, toxinas y otras sustancias que a los microorganismos,
otra tipo de mejoras es la produccin de distintas sustancias en los
alimentos que aumentan su calidad nutricional.

TECNICAS DE INGENIERA GENTICA

Permiten el desarrollo de plantas que den frutos de maduracin
muy lenta. As es posible recoger tomates maduros de la
tomatera y que lleguen al consumidor conservando intactos su
sabor, olor, color y textura.
En las aplicaciones farmacuticas tambin son un gran punto de
inters, la biotecnologa permite desarrollar plantas transgnicas
que producen sustancias de inters farmacolgico, como
anticuerpos, el cual consiste en la utilizacin de un ser vivo o
parte de l para la transformacin de una sustancia en un
producto de inters.

RACIAS