CONTROL DEL DESARROLLO

DE LOS MICROORGANISMOS

Agentes fsicos
Temperatura
Desecacin
Ondas sonoras
Radiaciones
Filtracin

Agentes qumicos
Desinfectantes
Antispticos
Quimioterapeticos
Agentes biolgicos
Antibiticos

Debido a su pequeo tamao y a su estilo

de vida individual, las clulas procariticas
sufren los cambios ambientales de un modo
mucho ms directo e inmediato que las
clulas de los organismos pluricelulares
Los microorganismos que habitan medios
que los humanos consideramos como
extremos reciben el calificativo de
extremfilos.

Modifican la velocidad de crecimiento,

provocando cambios que pueden llegar a
ocasionar la muerte de microorganismos.
Condicionan
la
distribucin
de
los
microorganismos en sus ecosistemas y
hbitats naturales.
Permiten
a los humanos controlar el
crecimiento microbiano.

No todos los microorganismos toleran del

mismo
modo
un
determinado
factor
ambiental.
As,
unas
determinadas
condiciones pueden ser nocivas para una
especie bacteriana, y en cambio ser neutras o
beneficiosas para otra.

Agentes fsicos

Agentes qumicos

Temperatura

Desinfectantes y antispticos

Desecacin

Quimioterpicos de sntesis

Radiaciones

Antibiticos

Ondas sonoras
Presin hidrosttica
Presin osmtica
pH

La temperatura es uno de los parmetros

ambientales ms importantes que condicionan el
crecimiento
y
la
supervivencia
de
los
microorganismos.

Temperatura mnima: por debajo de ella no

hay crecimiento;
Temperatura mxima: por encima de ella
tampoco existe crecimiento;
Temperatura ptima: permite la mxima
tasa de crecimiento

MICROORGANISMOS PSICRFILOS (-5 y

5C)

MICROORGANISMOS MESFILOS (25-40C

y mximas entre 35 y 47C).

MICROORGANISMOS TERMFILOS
(ptimos a 50-75C y mximos entre 80 y
113C)

Tiempo trmico mortal: es el tiempo

mnimo requerido para que mueran todas
las bacterias de una determinada
suspensin a una determinada
temperatura.
tiempo de reduccin decimal: es el
tiempo requerido para reducir al 10% la
densidad de la suspensin, a una
determinada temperatura (tambin llamado
valor D);

Punto trmico mortal: es la temperatura

mnima que mata a todas las bacterias en
un tiempo determinado (normalmente el
tiempo de referencia empleado es de 10
min).

punto trmico
mortal

Especies

55oC

Escherichia coli

60oC

Mycobacterium tuberculosis

120oC

endosporas de especies muy

resistentes de Bacillus.

Dependiendo de la temperatura y el tiempo a que

sometamos un material a tratamiento trmico,
lograremos inactivacin parcial de la poblacin
microbiana (es decir, queda una fraccin de clulas
viables) o bien esterilizacin (=inactivacin
total).

Esterilizacin es todo tratamiento de un material

con un agente fsico (como el calor) o qumico,
que acarrea la eliminacin de toda forma de vida
en l. Una vez estril, el material sigue estril
indefinidamente con tal de que est encerrado en
un compartimento sellado y libre del contacto con
microorganismos del ambiente exterior.
La inactivacin parcial o la esterilizacin se
pueden lograr por calor hmedo o por calor seco.

Microorganismo

condiciones

La mayora de clulas vegetativas, de

bacterias, levaduras y hongos

80oC , 5-10 min

Bacilo tuberculoso

58oC , 30 min

Bacilo tuberculoso

59oC , 20 min

Bacilo tuberculoso

65oC , 2 min

Staphylococcus aureus, Enterococcus

faecalis

60oC , 60 min

La mayora de esporas de bacterias

patgenas

100oC , pocos min

esporas del patgeno Clostridium botulinum

100oC , 5,5 horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos

100oC , muchas
horas

esporas de Clostridium y Bacillus saprofitos

120oC , 15
minutos

Autoclave: Es un aparato que permite calentar

muestras por calor hmedo a temperaturas
superiores a las de ebullicin del agua. Los
parmetros
de
esterilizacin
suelen
ser:
temperatura 121C y 10-15 min.

Tindalizacin: Es un mtodo de esterilizacin

fraccionada para materiales que se inactivan o
estropean a ms de 100C. Consiste en someter el
material a varios ciclos (normalmente 3 4) de dos
fases sucesivas cada uno:

a) En la primera fase el material se calienta a una

temperatura entre 50 y 100C, durante 1 2
horas.
b) En la segunda fase el material se incuba en una
estufa, a 30-37C durante 24 horas.

La esterilizacin por calor seco necesita

recurrir a mayores temperaturas que la
efectuada por el calor hmedo, Aplicaciones
del calor seco:

El horno de Pasteur, mediante calentamiento

a 160-170C durante 2-3 horas permite
esterilizar materiales inertes de laboratorio
resistentes al calor: material de vidrio y
metlico, aceites.
Flameado a la llama (hasta el rojo) de asas
metlicas de siembra, con las que se inoculan
las bacterias.
Incineracin de materiales de desecho.

Las bajas temperaturas (por debajo de la

temperatura mnima) no son tiles para la
esterilizacin, ya que, aunque existen
algunas
bacterias
que
mueren
por
congelacin (p. ej., especies patgenas de
Neisseria), el efecto de este tratamiento
sobre otras muchas es, sobre todo,
bacteriosttico.
Cuando una bacteria se enfra rpidamente a
-35C se producen cristales de hielo que
provocan daos cuando la muestra se
descongela.
La descongelacin lenta es ms letal que la
rpida, ya que aumenta el volumen de
cristales de hielo.

Durante las fases de tipo a) mueren todas las

clulas vegetativas de la muestra, pero
permanecen viables las esporas. Durante las
fases de tipo b) se produce la germinacin de
las esporas activadas.

Esterilizacin por filtracin: Consiste de hacer

pasar una solucin a travs de una membrana
o filtro de un tipo de material (normalmente
nitrato de celulosa) que presenta poros de un
tamao inferior al de cualquier clula
bacteriana (dimetro de poro =0,22 m).

En la prctica cotidiana del laboratorio de

microbiologa, en la esterilizacin de
medios de cultivo y soluciones.
En la esterilizacin de material quirrgico.
En la esterilizacin o inactivacin parcial,
en las industrias alimentarias (conservas,
leche y derivados).

En la industria lctea se emplean como mtodos de

esterilizacin
la
llamada
uperizacin.
La
uperizacin consiste en un tratamiento de calor
hmedo donde se emplean temperaturas muy altas
durante unos pocos segundos (p. ej.: 135-150C
durante 1-2 seg).

La pasteurizacin (en honor a Pasteur, que la

introdujo en los aos 1860) consiste en tratar la leche
a 63oC durante 30 min, tras los cuales se enfra y
envasa rpidamente.

La pasteurizacin instantnea se logra calentando

a 72C durante slo 15 segundos, tras de lo cual la
muestra se enfra rpidamente. Esta tcnica es la ms
usada actualmente, ya que: mata ms rpidamente;
mata mejor organismos ms resistentes altera menos
el sabor; acta en flujos continuos (y permite procesar
grandes volmenes de leche).

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin

100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas

vegetativas, pero no esporas

Ebullicin
intermitente

100o

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin

100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas

vegetativas, pero no esporas

Ebullicin
intermitente

100o

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tindalizacin

100

Efectivo contra esporas

Autoclave (vapor a
presin))

121o/15 minutos
a presin 1,5
Atmosf

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin

100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas

vegetativas, pero no esporas

Ebullicin
intermitente

100o

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tindalizacin

100

Efectivo contra esporas

Autoclave (vapor a
presin))

121o/15 minutos
a presin 1,5
Atmosf

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Pasteurizacin

63 /30 minutos

Mata la mayora de las clulas vegetativas

incluyendo patgenos como Streptococcus,
Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis

72o/15 segundos

Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es

preferible por la calidad lctea.

Pasteurizacin
rpida

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin

100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas

vegetativas, pero no esporas

Ebullicin
intermitente

100o

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tindalizacin

100

Efectivo contra esporas

Autoclave (vapor a
presin))

121o/15 minutos
a presin 1,5
Atmosf

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Pasteurizacin

63 /30 minutos

Mata la mayora de las clulas vegetativas

incluyendo patgenos como Streptococcus,
Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis

72o/15 segundos

Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es

preferible por la calidad lctea.

Calor seco

160o/2 hrs

Para materiales que deben permanecer secos y los

cuales no se destruyen a TC entre 121o y 170o .
Vidrios y metales. No plsticos y goma.

Calor seco

170o/1 h

Igual que el anterior. Al aumentar 20C el tiempo de

esterilizacion se acorta en 50%.

Pasteurizacin
rpida

Tratamiento

Temperatura

Efectividad

Ebullicin

100o

30 minutes de ebullicin mata patgenos y formas

vegetativas, pero no esporas

Ebullicin
intermitente

100o

3 intervalos 30-minutos efectivo contra esporas

Tindalizacin

100

Efectivo contra esporas

Autoclave (vapor a
presin))

121o/15 minutos
a presin 1,5
Atmosf

Elimina toda forma de vida incluyendo esporas.

Pasteurizacin

63 /30 minutos

Mata la mayora de las clulas vegetativas

incluyendo patgenos como Streptococcus,
Staphylococcus y Mycobacterium tuberculosis

72o/15 segundos

Similar al anterior. En leche, a nivel industrial, es

preferible por la calidad lctea.

Calor seco

160o/2 hrs

Para materiales que deben permanecer secos y los

cuales no se destruyen a TC entre 121o y 170o .
Vidrios y metales. No plsticos y goma.

Calor seco

170o/1 h

Igual que el anterior. Al aumentar 20C el tiempo de

esterilizacion se acorta en 50%.

Incineracin

>500

Vaporiza material orgnico en superficies noinflamables (destruccin de varios materiales y

sustancias)

Pasteurizacin
rpida

AGENTES ESTERILIZANTES QUMICOS

1. Oxido de etileno
2. Glutaraldehdo
3. Formaldehdo

DESINFECTANTES y ANTISPTICOS
Lister (1867)

A. INORGNICOS
1. Metales
2. cidos y lcalis
3. Comp inorgnicos oxidantes
4. Halgenos (Cloro, Yodo)
B. ORGNICOS
1. Alcoholes
2. Fenol y derivados
C. PRESERVANTES

Segn su accin
Coagulacin de las proteinas:
Fenol, Formalina, Alcoholes, en general

Desnaturalizacin proteica:
cidos orgnicos no disociables, Cloro, Yodo, cidos y alcalis fuertes

Lesin pared celular o membrana citoplasmtica:

1) Detergentes: catinicos, aninicos, no inicos. Compuestos de Amonio
cuaternario
2)Compuesto fenlicos: fenol, cresoles, difenilos halogenados,
alquilsteres del para-hidroxibenzoico, aceites esenciales de plantas
3)Alcoholes:etanol, isopropanol

Inhibicin de enzimas:
1) Metales pesados:mercuriales, compuestos de plata, compuestos de cobre
2) Agentes oxidantes: halgenos, cloro, yodo, agua oxigenada,
permanganato potsico, cido peractico,
3) Colorantes: derivados de la anilina, derivados de la acridina (flavinas)
4) Agentes alquilantes: formaldehido, glutaraldehido, xido de etileno, propionil-lactona

Qumico

Accin

Usos

Etanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lpidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lipidos

Antiseptico usado en piel

Qumico

Accin

Usos

Etanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lpidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lipidos

Antiseptico usado en piel

Formaldehido (8%)

Reacciona con grupos NH2, SH

y COOH

Desinfectante, mata endosporas

Tintura de Iodina (2% I2

en 70% alcohol)

Inactiva proteinas

Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas

Forma c.hipocloroso (HClO),

fuerte agente oxidante

Desinfectante general

Qumico

Accin

Usos

Etanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lpidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lipidos

Antiseptico usado en piel

Formaldehido (8%)

Reacciona con grupos NH2, SH

y COOH

Desinfectante, mata endosporas

Tintura de Iodina (2% I2

en 70% alcohol)

Inactiva proteinas

Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas

Forma c.hipocloroso (HClO),

fuerte agente oxidante

Desinfectante general

Nitrato de Plata (AgNO3)

Precipitata proteinas

Antiseptico general

Cloruro de mercurio

Inactiva proteinas por reaccin

con grupos sulfitos

Desinfectante y a veces
antisptico usado en piel

Qumico

Accin

Usos

Etanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lpidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lipidos

Antiseptico usado en piel

Formaldehido (8%)

Reacciona con grupos NH2, SH

y COOH

Desinfectante, mata endosporas

Tintura de Iodina (2% I2

en 70% alcohol)

Inactiva proteinas

Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas

Forma c.hipocloroso (HClO),

fuerte agente oxidante

Desinfectante general

Nitrato de Plata (AgNO3)

Precipitata proteinas

Antiseptico general

Cloruro de mercurio

Inactiva proteinas por reaccin

con grupos sulfitos

Desinfectante y a veces
antisptico usado en piel

Detergentes (comp. de
amonio cuaternario)

Destruye membrana celular

Antiseptico piel y desinfectante

Qumico

Accin

Usos

Etanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lpidos

Antiseptico usado en piel

Isopropanol (50-70%)

Denaturaliza proteinas y
solubiliza lipidos

Antiseptico usado en piel

Formaldehido (8%)

Reacciona con grupos NH2, SH

y COOH

Desinfectante, mata endosporas

Tintura de Iodina (2% I2

en 70% alcohol)

Inactiva proteinas

Antiseptico usado en piel

Clorina (Cl2) gas

Forma c.hipocloroso (HClO),

fuerte agente oxidante

Desinfectante general

Nitrato de Plata (AgNO3)

Precipitata proteinas

Antiseptico general

Cloruro de mercurio

Inactiva proteinas por reaccin

con grupos sulfitos

Desinfectante y a veces
antisptico usado en piel

Detergentes (comp. de
amonio cuaternario)

Destruye membrana celular

Antiseptico piel y desinfectante

Componentes Fenolicos
(c.carboloico, lisol,
hexilresorcinol,
hexaclorofeno)

Denaturaliza proteinas y rompe

membrana celular

Antiseptico a baja concentracin

Desinfectante a alta concentracin

Oxido Etileno gas

Agente alquilante

Desinfectante de plsticos y goma

Existen ciertas sustancias qumicas que

influyen
negativamente
sobre
las
bacterias, pudiendo ejercer dos tipos de
efectos diferentes:
bacteriostticos:
cuando
impiden
el
crecimiento bacteriano;
bactericidas: cuando destruyen (matan)
las bacterias.

Agentes esterilizantes son aquellos que

producen la inactivacin total de todas las
formas de vida microbiana.

Agentes
desinfectantes
(o
germicidas) son agentes (sobre todo
qumicos) antimicrobianos capaces de
matar los microorganismos patgenos
(infecciosos) de un material. Pueden
presentar efectos txicos sobre tejidos
vivos, por lo que se suelen emplear slo
sobre materiales inertes.

Agentes antispticos son sustancias

qumicas antimicrobianas que se oponen a
la putrefaccin de materiales vivos. Se trata
de desinfectantes con baja actividad txica
hacia los tejidos vivos donde se aplican.

Quimioterpicos
son
compuestos
qumicos con actividad microbicida, con una
toxicidad suficientemente baja como para
permitir su administracin a un organismo
superior, en cuyos fluidos corporales y
tejidos permanece estable un cierto tiempo
a concentraciones tales que los hace
eficaces como antimicrobianos dentro del
organismo.

Todos los das usamos agentes qumicos

para controlar el crecimiento microbiano:
detergentes y jabones para el cuerpo y la
ropa, cloracin de las aguas potables,
antispticos para la piel y el tratamiento de
heridas,
desinfectantes
para
tratar
superficies en la industria y en los
laboratorios, quimioterpicos y antibiticos
para tratar enfermedades bacterianas.

FACTORES QUE AFECTAN LA POTENCIA DE UN

DESINFECTANTE

Concentracin del agente y tiempo de

actuacin .
pH
Temperatura
Naturaleza
del microorganismo y
otros
factores
asociados
a
la
poblacin microbiana
Presencia de materiales organicos

Tanto en los laboratorios como en industrias

alimentarias es necesario a menudo tratar
superficies inertes (mesas, suelos, paredes,
maquinaria) con desinfectantes, a ser
posible con efecto microbicida.
Los materiales termosensibles que no se
pueden esterilizar por calor se pueden
esterilizar en fro mediante ciertos agentes:
- En los hospitales, para esterilizar
termmetros, catteres, instrumentos, se
suele recurrir a un tipo de autoclave que
usa el gas xido de etileno o formaldehido
gaseoso (ambos son agentes alquilantes).

Pequeos objetos se pueden esterilizar en

perxido de hidrgeno (agente oxidante).

El yodo es un magnfico antisptico de la piel

(el mejor que se conoce).

El cloro se presenta como cloro gaseoso

(Cl2), hipocloritos y cloraminas. El efecto
desinfectante se debe a la liberacin de cloro
libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el
agua para dar cido hipocloroso (ClOH), que
a pH cido o neutro es un oxidante fuerte.

Los quimioterpicos son sustancias con

actividad antimicrobiana (microbicida o
microbiosttica)
con
toxicidad
suficientemente baja como para poder ser
administrados a un organismo por la va
adecuada, hasta alcanzar y mantener
concentraciones eficaces en los tejidos.

Que tenga toxicidad selectiva, es decir,

actuar segn el principio de bala mgica
que daa al microorganismo respetando al
hospedador.
Que sea microbicida, es decir, que mate o
inactive
irreversiblemente
el
microorganismo, provocando la prdida total
de viabilidad.
Los
microorganismos
susceptibles
no
deberan desarrollar resistencias al
quimioterpico.

Que el quimioterpico sea efectivo contra

un
amplio
espectro
de
microorganismos.

Que no sea alergnico, y que no tenga

efectos secundarios.

Que permanezca de forma activa en

plasma, tejidos, etc. durante el tiempo
necesario. A ser posible, que sea soluble
en agua y que alcance pronto la
concentracin teraputica en los tejidos

ANTIMICROBIANOS

Son agentes quimioteraputicos que se

utilizan para el tratamiento de las
enfermedades infecciosas producidas por
bacterias y hongos.

Interfieren con el desarrollo de los

microorganismos, pero se diferencian de
desinfectantes y antispticos porque
actan dentro del husped sin producir
efectos nocivos sobre ste.

ANTIMICROBIANOS

Antibiticos
Antibiticos semi sintticos
Antimicrobianos
Anti fngicos

ANTIBIOTICOS
Sustancias qumicas producidas por
organismos vivos (bacterias, hongos
o vegetales)
Tienen el poder de inhibir el
desarrollo o destruir
microorganismos
Penicilina

ANTIBIOTICOS
SEMISINTETICOS

Sintetizados artificialmente una vez

conocida su frmula estructural
Cloramfenicol
Meticilina
Oxacilina
Cloxacilina
Ampicilina

ANTIMICROBIANOS
Productos completamente sintticos
Sulfonamidas
Amoxicilina
Cefalosporinas de 2da y 3ra
generacin (Cefalotina, Cefradina,
Cefazolina, Cefoxitina)

ANTIFUNGICOS

Drogas que presentan actividad

biolgica contra hongos

CLASES DE ANTIBITICOS

Beta lactmicos: Penicilinas,

Cefalosporinas, etc.
Glicopptidos: Vancomicina /Gram(+)
Aminoglicsidos: Gentamicina /Gram (-)
aerbicos
Macrlidos: Azitromicina /Gram(+) y (-)
Tetraciclinas: Gram(+) y (-)
Quinolonas: Ciprofloxacino /Gram(+) y (-)
Sulfonamidas y Trimetoprim: Septrn
Simples: Cloramfenicol

MECANISMOS DE ACCION
DE LOS ANTIBIOTICOS

Inhibicin de la sntesis de la pared

celular
Alteracin de la permeabilidad de la
membrana celular
Inhibicin de sntesis de protenas
Inhibicin de sntesis de cidos
nuclicos

ACTIVIDAD
DE LOS ANTIBIOTICOS

Bactericidas o Fungicidas: son

capaces de producir la muerte de los
microorganismos en forma rpida

Bacteriostticos o Fungistticos:
solamente impiden el crecimiento de
los microorganismos

RESPUESTA
DE LOS MICROORGANISMOS

Susceptibles: presentan receptores

especficos para el antibitico,
pudiendo ste ejercer su accin.
Resistentes: pueden crecer y
multiplicarse en presencia del
antibitico

Definiciones

Espectro antimicrobiano:
Capacidad que tiene un antibitico
de actuar sobre determinada cepa
bacteriana
Amplio espectro: actan sobre
bacterias Gram (+) y Gram (-)
Reducido espectro: actan sobre
Gram(+)

Definiciones

Resistencia:
Capacidad
que
poseen
ciertas
bacterias de crecer y multiplicarse
en presencia de un antibitico
Susceptibilidad:
Incapacidad
de
crecer
y
multiplicarse
en
presencia
del
antibitico

Antibiograma:

Estudio in vitro de la sensibilidad o

susceptibilidad del microorganismo
causante de la enfermedad, frente a
diversos antibiticos

Antibiograma
Utilizacin:
Bacterias de rpido crecimiento
Bacterias fastidiosas patgenas
(algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas

bacterias a hacerse resistentes a los
antibiticos, indica que el uso inadecuado de
los antimicrobianos puede conducir a graves
consecuencias
Importante: elegir el antibitico adecuado

Los antibiticos son sustancias producidas

por seres vivos (antibiticos naturales) o
modificadas artificialmente a partir de ellas
(antibiticos
semisintticos),
que
a
pequeas concentraciones tienen efectos
antimicrobianos
(bactericidas
o
bacteristaticos), tras ser administrados por
va adecuada a un organismo receptor.

Se conocen unos 5.000 antibiticos distintos, y cada ao se descubre unos 300

nuevos, pero en clnica solo se usa un 1% de los descubiertos.

La mayora de los antibiticos son molculas relativamente pequeas pero

complejas, con regiones hidrofbicas que facilitan el transporte al interior
celular. Muchos poseen varios anillos, algunos de los cuales mejoran la
interaccin de la molcula con su diana macromolecular.

Para estudiarlos es ms til agrupar a los

antibiticos no por clases segn su naturaleza
qumica, sino en funcin de las dianas sobre las
que actan y con las que interfieren:

Antibiticos que interfieren con la biosntesis de la

pared celular.
Antibiticos que actan sobre la membrana celular.
Antibiticos que inhiben la sntesis de protenas.
Antibiticos que actan sobre la sntesis de cidos
nucleicos.

Inhibidores de la sntesis
de cidos nuclecos

Antibiograma:

Estudio in vitro de la sensibilidad o

susceptibilidad del microorganismo
causante de la enfermedad, frente a
diversos antibiticos

Antibiograma
Utilizacin:
Bacterias de rpido crecimiento
Bacterias fastidiosas patgenas
(algunas)

La tendencia cada vez mayor de muchas

bacterias a hacerse resistentes a los antibiticos,
indica
que
el
uso
inadecuado
de
los
antimicrobianos puede conducir a graves
consecuencias
Importante: elegir el antibitico adecuado para
tratar una determinada bacteria, con la ayuda

Mtodos para realizar

Antibiogramas

Dilucin en serie del antibitico

Difusin en agar del antibitico

METODO DE DILUCION EN SERIE

Mtodo cuantitativo que se realiza en

medios lquidos
El antibitico se distribuye diluyndolo en
una serie de tubos con caldo, sembrndose
la bacteria cuya sensibilidad se quiera
estudiar
Se incuban los tubos a 37C por 24 horas y
se busca el ltimo tubo en que hay ausencia
de desarrollo
La concentracin del antibitico de ese
tubo indica la Concentracin Mnima
Inhibitoria (CMI) del antibitico

Concentracin mnima inhibitoria (CMI):

mnima concentracin capaz de producir
inhibicin
de
la
bacteria
(efecto
bacteriosttico).

Concentracin mnima bactericida (CMB):

concentracin mnima para producir muerte
bacteriana.

Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI)

se utiliza una cantidad estandarizada de inculo: 5x105 ufc/ml

100

50

25

12.5

6.25 3.12

1.6

0.8

0.4

Concentracin Mnima Bactericida (CMB)

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.6

0.8

0.4

CMI

METODO DE DIFUSION EN
AGAR (METODO DEL DISCO)

Mtodo cualitativo: mide la capacidad de un

antibitico de difundir a travs de un agar,
para inhibir el crecimiento de las bacterias.
Usa discos de papel impregnados con
cantidades conocidas de antibiticos
Existe una correlacin directa entre los
dimetros de inhibicin y las CMI obtenidas
por la prueba de dilucin en tubo.
Mtodo rpido, sencillo y muy reproducible.
Utiliza una modificacin de la tcnica de
Kirby Bauer estandarizada por el NCCLS
( National Committe for Clinical Laboratory
Standars )

Preparacin del inoculo

(mtodo directo de suspensin de
colonias)

Con un asa estril recoger 4 a 5 colonias

desde un cultivo completamente puro y
aislado de la cepa a investigar
Transferir las colonias a 5 ml de Caldo
Nutritivo y realizar una emulsin
Comparar la turbidez de la emulsin con el
estndar de turbidez Mc Farland 0.5
Si la emulsin queda ms turbia que el
estndar, se debe diluir con el mismo caldo
utilizado
Si la emulsin tiene menor turbidez, se
debe agregar mayor cantidad de colonias

Estndar Mc Farland 0,5

Estndar de turbidez que equivale a

una
concentracin
de
108
bacterias/ml

Inoculacin de las placas

Introducir una trula de algodn estril

en el caldo
Elevar la trula sobre la superficie del
caldo y presionarla contra las paredes
interiores del tubo para eliminar el
exceso de inoculo
Frotar la superficie del agar con la
trula en forma densa, en 3 direcciones (
horizontal, vertical y diagonal ) y
cubriendo toda la superficie de la placa
Dejar secar la placa por 5 10 minutos

Colocacin de los sensidiscos

Elegir los antibiticos a utilizar de acuerdo a

la identificacin de la cepa
Colocar los discos de sensibilidad con pinza
esterilizada a la llama y previamente enfriada
Presionar suavemente los discos para
asegurar su implantacin a la superficie del
agar
Colocar
los
discos
suficientemente
separados. No ms de 6 a 8 por placa
Una vez colocado un disco, nunca se debe
mover, ya que el antibitico comienza a
difundir casi instantneamente
Incubar la placa a 37C por 18 24 horas

Dispensador de
sensidiscos

Medicin de los halos

Las zonas de inhibicin se miden

con una regla y se expresan en
milmetros.
El dimetro de los halos se
compara
con
una
tabla
estandarizada que fija los lmites
entre
sensibilidad,
sensibilidad
intermedia y resistencia.