INTRODUO A BIOLOGIA

MOLECULAR
DNA

Claudia G. Bica

NOS SERES HUMANOS

NCLEO

CLULA

ORGANISMO

CROMOSSOMOS
(DNA+PROTENAS)

DNA

- Informao

das protenas e
RNAs que sero sintetizadas
pelas clulas do organismo ao
longo da sua vida.
-Capacidade de se auto-duplicar
para originar outras clulas.

Envelhecimento...

AMBIENTE
CORPO

Molculas
Organelas

Molculas
Organelas

CLULAS

CLULAS

CLULAS

TECIDOS

TECIDOS

TECIDOS

RGOS

RGOS

RGOS

Acmulo de
modificaes
e disfunes

Embriologia

Amadurecimento
e Fase reprodutiva

Envelhecimento

Desenvolvimento

Morte

DNA

TECIDOS

RGOS
E SISTEMAS

CORPO

AMBIENTE

MULTICELULARES

UNICELULARES

NVEIS DE ORGANIZAO

A CLULA

Controla:
1) homeostasia
2) reproduo
3) morfologia
4) funo celular

HISTRICO

1865 - GREGOR MENDEL

Estudou cruzamento entre
diferentes tipos de ervilhas
demonstrando que certas
caractersticas fsicas dessas
plantas eram transmitidas de
gerao para gerao atravs
de fatores.

HISTRICO

1902 SUTTON e BOVERI

Padro de herana dos fatores
acompanhava a segregao dos
cromossomos de clulas em diviso
1909 JOHANNSEN
Nomeou as unidades mendelianas
da hereditariedade (fatores) de
GENES

HISTRICO
1915 THOMAS MORGAN
Concluiu que os genes estavam organizados de
maneira linear nos cromossomos
Props, pela 1 vez, uma correlao entre um gene
(gentipo) e uma caracterstica fsica (fentipo)
1941 BEADLE e TATUM
Demonstraram que os genes agiam atravs da
regulao de diferentes eventos qumicos
HIPTESE: UM GENE

UMA ENZIMA

HISTRICO

1953 JAMES WATSON e FRANCIS CRICK

Descrio da estrutura fsica do DNA baseandose nos estudos de difrao de raio X de
Rosalind Franklin e Maurice Wilkins e em
estudos qumicos da molcula
Modelo da dupla fita proposto foi fundamental
para a compreenso do mecanismo de
transmisso e execuo da informao gentica

1953: Watson and Crick

Estrutura do DNA

HISTRICO

1955 JOE HIN TJIO

Definiu como 46 o nmero exato
de cromossomos humanos

ARTHUR KORNBERG
Isolou a enzima DNA polimerase da bactria E.coli

HISTRICO
1957 CRICK e GAMOV
Dogma Central da Biologia
Molecular
DNA

RNA

PROTENA

Dogma
Central
da
Biologia
Molecula
r

HISTRICO

1961 BRENNER, JACOB e MESELSON

mRNA a molcula que leva informao do DNA

no ncleo para a maquinaria de produo de
protenas no citoplasma

HISTRICO
1966 NIRENBERG,
KHORANA e OCHOA
Seqncias sucessivas de
trs nucleotdeos do DNA
(codon)
determinam
a
seqncia de aminocidos
de uma protena

O CDIGO GENTICO
DESVENDADO!!!

Com o desenvolvimento da tecnologia do DNA

recombinante (1972) e do seqenciamento do
DNA (1975-77) tornou-se possvel isolar e
determinar a seqncia de genes dos mais
diferentes organismos.
Desta forma, com a disponibilidade de novos
recursos, vrios mecanismos biolgicos,
como a replicao do DNA e a diviso celular,
comearam a ser intensamente estudados.

A CLULA

DNA
1. Regulao transcricional
HnRNA

2. Regulao no
processamento do
RNA primrio
3. Regulao no
transporte do
mRNA para o
citoplasma

RETCULO
ENDOPLASMTICO
RUGOSO

4. Regulao da
sntese proteca
5. Regulao
ps-sntese

Protena
sintetizada

- DIFERENCIAO
- CRESCIMENTO
- FUNO CELULAR
- RESPOSTA AO
AMBIENTE

Ncleo

DNA

Cromossoma

Gene
Promotor

Exon

Intron

DNA

CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO
(DNA)

Contm toda a informao gentica de um organismo

Esta informao est arranjada em unidades

hoje conhecidas como genes

ESTRUTURA DOS
CIDOS NUCLEICOS
As molculas de DNA e RNA so compostas por
quatro diferentes nucleotdeos:
Adenina, Guanina e Citosina comum para
DNA e RNA
Timina encontrada somente no DNA
Uracila encontrada somente no RNA

ESTRUTURA DOS
CIDOS NUCLEICOS
Todos os nucleotdeos apresentam uma
estrutura em comum:
radical fosfato

pentose

ESTRUTURA DOS
CIDOS NUCLEICOS
As bases nitrogenadas podem ser divididas em
dois grupos de acordo com sua estrutura:

ESTRUTURA DOS
CIDOS NUCLEICOS
O grupo hidroxil ligado ao
carbono 3 da pentose de um
nucleotdeo forma uma ligao
fosfodister com o fosfato do
outro nucleotdeo

5 C-A-G 3

DNA
Duas fitas de polinucleotdeos associadas formando uma
estrutura de dupla hlice onde as pentoses e os radicais
fosfato compe a fita e as bases projetam-se para o interior
da mesma

As fitas mantm-se unidas atravs da formao de pontes

de hidrognio entre as bases o que contribui para a
estabilidade da dupla hlice

. Adenina (A) pareia com Timina (T) atravs de 2 pontes

de hidrognio
. Guanina (G) pareia com Citosina (C) atravs de 3
pontes de hidrognio

DNA

ESTRUTURA DO DNA
- um polmero no ramificado
- Formado por monmeros chamados de nucleotdeos
- Cada nucleotdeo contm os seguintes elementos:

1) Estrutura primria
NUCLEOTDEO

1 Base orgnica nitrogenada

(Por que contm nitrognio na sua formao)
1 Acar chamado
DESOXIRRIBOSE
Possui 5 Carbonos na
sua molcula

5C
1C

4C
3C

2C

1 grupo fosfato (PO4-)

As Bases Nitrogenadas podem ser de dois tipos:

PRICAS
H
C
N

PIRIMDICAS
H
C

N
C

CH

HC

CH

CH
HC

C
N

N
H

ESTRUTURA QUMICA DA MOLCULA DO DNA

5
Desoxirribose

Carbono
5

CH2 O

Base
Nitrogenada

H H

Carbono
3

H
O H

Ligao
Fosfodieste
Grupo fosfato +
Grupo hidroxila
(OH) do Carbono 3

O-

O
CH2 O

Desoxirribose

Base
Nitrogenada

H H
H

H
O
O

P
O

H
O-

Como a ligao
entre uma desoxirribose
e outra desoxirribose
s pode ser feita
quando um grupo
fosfato liga-se no
Carbono 5do
primeiro acar e
no Carbono 3do
segundo acar dizemos
que a molcula
de DNA cresce em
direo 5 3
3

Antiparalelismo
As fitas do DNA
esto dispostas
em direes
opostas

Complementariedade
Cada base de uma fita pareada com a base complementar da outra
fita

Complementariedade

Fita velha

Durante a
replicao do DNA
as duas fitas
velhas ou mes
servem de molde
para cada fita nova
ou filha
complementar, que
est sendo
sintetizada.
Fita
nova

A Dupla Hlice
Fatores que estabilizam a dupla
hlice:
interaes hidrofbicas Entre as bases
foras de van der Walls nitrogenadas
pontes de hidrognio
Entre os grupos
fosfato do DNA e
interaes inicas
os ctions (Mg2+)
presentes na
soluo fisiolgica

A Dupla Hlice
A dupla hlice apresenta
dois tipos de sulcos aos
quais se ligam as protenas
da cromatina
Sulco menor

Sulco maior

Protenas:nveis
estrutural

de

complexidade

O Empacotamento do DNA:
a estrutura terciria do DNA
DNA em procariontes: DNA circular nas formas nosuper-helicoidal (esquerda) e super-helicoidal (direita)

A Dupla Hlice

O B-DNA o predominante em condies

A Dupla Hlice

A forma predominante de toro da espiral do

DNA para a direita ou sentido horrio

Propriedades Qumicas e Fsicas do

DNA

REPLICAO DO DNA
Conservativa ou Semiconservativa?
Unidirecional ou Bidirecional?

REPLICAO
SEMICONSERVATIVA
Evidncia baseada em um experimento clssico de
Meselson-Stahl em 1958
Clulas de E. coli foram inicialmente colocadas em um
meio para crescimento contendo sais de amnia preparados
com 15N (nitrognio pesado heavy) at todo o DNA
celular conter o istopo.
As clulas foram, ento, transferidas para um meio
contendo 14N (nitrognio leve light).
As amostras foram analisadas com gradiente de densidade
que separa as duplas H-H, L-L e H-L em bandas distintas.

PNAS
44:671, 1958

A
replicao
conservativa
The Meselson-Stahl experiment

semi-

ORIGEM DA REPLICAO
Experimento com SV40 (Simian Virus)
DNA viral de clulas infectadas com SV40 foi
cortado com a enzima de restrio EcoRI, que
reconhece um stio nico.
A partir de um ponto vai se formando uma bolha
chamada bolha de replicao comprovando a
existncia de um ponto de origem da replicao
Caractersticas da origem de replicao:
. estrutura repetitiva
. seqncias ricas em AT

ORIGEM DA REPLICAO

ORIGEM

Stio de restrio
EcoRI

Cromossomo viral
circular

EcoRI
Bolha de
replicao

ORIGEM DA REPLICAO

REPLICAO
BIDIRECIONAL
Um experimento atravs da autoradiografia
de molculas de DNA marcadas de culturas
de clulas mamrias revelou grupos de
replicons (unidades de replicao) com um
ponto de origem de replicao central
OR

OR

Sntese de DNA em Eucariontes: As Bolhas de

Replicao
Nos eucariontes, a replicao
requer mltiplas origens,
devido ao tamanho de seu
genoma. A replicao
bidirecional e, em ambas as
fitas, simultnea.
Este processo gera bolhas
de replicao.

Regies Codificadoras e
No-Codificadoras do DNA
O DNA formado por 2 regies:
Intergnicas

Gnicas

Regio Gnica
a poro que codifica
para um produto final,
que pode ser uma cadeia
polipeptdica ou um RNA

Intergnicas

Gnicas

Regio Intergnica
a poro regulatria,
que sinaliza o incio ou o
final de um gene, que
influencia a transcrio
gnica, ou que o ponto
de incio para a
replicao do DNA

PROCESSO DE REPLICAO

Os mecanismos celulares responsveis pela

replicao do DNA foram descobertos
primeiramente em bactrias.
A replicao em eucariotos ocorre atravs
de protenas anlogas e com processos
semelhantes replicao do DNA de E. coli

PRINCIPAIS ENZIMAS ENVOLVIDAS

(SISTEMA DE REPLICAO DO DNA)
1.
2.
3.
4.
5.
6.

DNA Polimerases
Endonucleases
Helicases
Topoisomerases
Primases
Telomerases

DNA POLIMERASE
So incapazes de quebrar as pontes de
hidrognio que ligam as duas fitas do DNA
S alongam uma fita de DNA/RNA prexistente
Catalisam a adio de um nucleotdeo no
radical hidroxil da extremidade 3 da cadeia
que est se formando. Desta forma, as fitas s
podem crescer no sentido 5 3

DNA Polimerases
principais enzimas envolvidas no processo; responsveis
pela adio de nucleotdeos e reparo
requerem um modelo e um primer (segmento de RNA
sintetizado pela primase) complementares para incio
alongamento
3 tipos principais : I, II, III
I : importante no sistema de reparo
III: principal e mais complexa (mais de 10 subunidades)

Adio de nucleotdeos
1

NUCLEASES
- Degradam o DNA, clivando-o em pedaos
menores
1. EXONUCLEASES: clivam o DNA a
partir do final da molcula
2. ENDONUCLEASES: clivam em qualquer
local da molcula

OUTRAS ENZIMAS ENVOLVIDAS

NO PROCESSO DE REPLICAO
HELICASES constituem uma classe de enzimas que podem
se mover ao longo da fita dupla de DNA utilizando a energia
da hidrlise de ATP para separar as duas fitas da molcula.
SSB (single-strand-binding) ligam-se a cada uma das fitas
impedindo o reanelamento das mesmas.
PRIMASE RNA polimerase que sintetiza pequenas molculas
de RNA utilizadas como iniciadores durante o processo de
replicao do DNA.
TOPOISOMERASES Responsveis por aliviar a toro na
parte da fita que no est sendo replicada.

PROCESSO DE REPLICAO
O movimento da forquilha de replicao revela uma
fita molde no sentido 3 5 e outra no sentido
oposto 5 3
Desta forma, as fitas novas so sintetizadas em
sentidos opostos
FITA LEADING crescimento
segue a direo do movimento
da forquilha de replicao
FITA LAGGING crescimento
no sentido oposto ao movimento
da forquilha de replicao

PROCESSO DE REPLICAO
FITA LEADING sintetizada continuadamente a partir de
um iniciador na fita molde 3
5
FITA LAGGING sintetizada descontinuadamente a partir
de mltiplos iniciadores
Stios descobertos no molde da fita lagging so
copiados em pequenos iniciadores de RNA pela primase.
Cada iniciador alongado pela DNA polimerase resultando
na formao dos FRAGMENTOS DE OKAZAKI.
DNA polimerase remove o primer do RNA do fragmento
adjacente e preenche os gaps entre os fragmentos que,
ento, so unidos pela DNA ligase.

PROCESSO DE REPLICAO

PROCESSO DE REPLICAO
A sntese de DNA feita na direo 5 3 e semidescontnua

TELOMERASE
Os cromossomos de eucariotos so lineares e
apresentam
seqncias
repetitivas
em
suas
extremidades denominadas telmeros
A sntese da fita leading continua at o trmino da
fita molde de DNA, no entanto, no telmero a
extremidade feita pela primase na fita lagging no
digerida.
Como o iniciador instvel, ele se degrada com o
tempo diminuindo, assim, o tamanho do cromossomo.
Telomerase age evitando a perda do fim do
cromossomo.

TELOMERASE

ESTGIOS DA REPLICAO

1. INICIAO
2. ALONGAMENTO
3. TERMINAO

1. INICIAO
ORIGEM DA REPLICAO OriC :
- 245 pb ;
- 3 repeties de 13 pb;
- 4 repeties de 9 pb; (A=T)

2. ALONGAMENTO
Envolve duas operaes distintas, mas
relacionadas:
1. Sntese da fita lder
2. Sntese da fita tardia
Incio comum na forquilha de replicao
envolvendo:
-. helicases
-. topoisomerase
-. DNA binding proteins

SNTESE DA FITA LDER

1. Sntese de um RNA primer pela primase
na origem de replicao
2. Desoxirribunocleotdeos so adicionados
pela DNA polimerase III continuamente a
partir da forquilha de replicao

3. TERMINAO
-Procariotos: DNA circular, quando as
duas forquilhas de replicao se
encontram ela termina.
-Eucariotos: seqncias de
nucleotdeos especficas no final dos
cromossomos, incorporadas a
telmeros.

REGULAO
-nica fase regulada da
replicao, de forma que s
ocorra uma vez por ciclo
celular ;
-afetada pela metilao de
DNA
-DAM metilase na (5) GATC
sobre a fita parental

Ncleo
RNA polimerase

Gene

Transcrio
hnRNA

Processamento
mRNA

Traduo
Citoplasma

protena

http://www.virtual.epm.br/cursos/biomol/replica/html/6.htm

http://www.johnkyrk.com/DNAreplication.html

..\..\claudia\GeneticsTour.exe

Fim???