Infeco Aguda e Crnica por LCMV

(vrus da coriomeningite linfocitria)

Modelo experimental de infeco por LCMV amplamente

utilizado para estudar resposta imune relacionada a vrios tipos
infeces virais.

Infeco aguda (eliminao do vrus) ou crnica (persistncia viral)

Infeco Aguda (clone Armstrong)

Resposta antiviral robusta de clulas T CD8

Eliminada entre 8-10 dias ps-infeco

Infeco crnica (clone 13)

Comprometimento imunolgico e exausto de clulas T

Pode durar por meses

Infeces virais e Exausto de clulas T

Infeces virais crnicas ocasionam progressiva diminuio das funes de

clulas T CD4+ e CD8+

Perda do potencial proliferativo, da produo de citocinas e da citotoxicidade

(cls. T CD8+).

Infeces virais e Exausto de clulas T

Infeces virais crnicas ocasionam progressiva diminuio das funes de

clulas T CD4+ e CD8+

Perda do potencial proliferativo, da produo de citocinas e da citotoxicidade

(cls. T CD8+).

Exausto de clulas T
Persistncia e nveis do antgeno (replicao viral)
Alterao da composio e nveis de citocinas (IFN- / IL10)
Atividade de clulas T reguladoras
Vias de receptores inibitrios (PD-1)

Infeces virais e Exausto de clulas T

Infeces virais crnicas ocasionam progressiva diminuio das funes de

clulas T CD4+ e CD8+

Perda do potencial proliferativo, da produo de citocinas e da citotoxicidade

(cls. T CD8+).

Exausto de clulas T
Persistncia e nveis do antgeno (replicao viral)
Alterao da composio e nveis de citocinas (IFN- / IL10)
Atividade de clulas T reguladoras
Vias de receptores inibitrios (PD-1)

Exausto de clulas T:
Via inibitria PD-1
(programmed cell death 1)
Controla a atividade de clulas T efetoras (CD4 e CD8)

Contexto normal...

Evita resposta imunolgica

exacerbada

Contexto de infeco crnica...

H super-expresso desse receptor,

que ocasiona progressiva disfuno
das clulas T.

Bloqueio de vias inibitrias leva

recuperao das funes de
clulas T exauridas.

Exausto de clulas T:
Papel de clulas T reguladoras (T reg)
Funo: Controlar a atividade de clulas T efetoras (CD4 e CD8)

Contexto normal...

Prevenir a ativao de cls.

T CD4 e CD8 que
reconheam antgenos
prprios
Evitar resposta imunolgica
exacerbada

Contexto de infeco crnica...

Facilitam a progresso da doena

por inibir as funes de clulas T
efetoras.
(no h uma caracterizao
completa do mecanismo)

Objetivo geral

Caracterizar os efeitos de clulas T reguladoras

sobre a exausto de clulas T CD8 LCMVespecficas.

Caracterizao da populao de clulas T reg no contexto

de infeco por LCMV

Diminuio do nmero total de clulas T reg no bao durante a

infeco aguda e crnica.

Aumento da porcentagem de clulas T reg na infeco crnica

Caracterizao da populao de clulas T reg no contexto

de infeco por LCMV

Expresso de CD25 no foi alterada

Expresso alterada de alguns marcadores em clulas Treg maior

ativao na infeco crnica

Modelo para avaliar o papel das T reg em contexto de infeco

crnica por LCMV
Depleo de clulas T reguladoras Foxp3+
Camundongos knock in Foxp3DTR

Promotor de Foxp3

Foxp3

Receptor de
toxina diftrica
(DTR)

Toxina
Diftrica
(DT)
DTR

Depleo de
clulas T reg
Foxp3+
Clulas T reg Foxp3+

Modelo de induo de exausto de clulas T CD8+

Em contexto de infeco crnica por LCMV, a atividade de clulas T CD4

crtica para funo de clulas T CD8 em eliminar o vrus.

Depleo de clulas T CD4

Exausto de clulas T CD8

Persistncia prolongada da
infeco crnica por LCMV

Modelo de infeco viral crnica em contexto de exausto de

clulas T CD8
- Avaliao do papel de clulas T reg -

Foxp3DTR

Induo de
exausto de cls.
T CD8+

Depleo de
clulas T CD4
(anticorpo GK1.5)

Depleo de clulas T
reg

Infeco
LCMV cl-13
(crnica)

Obs.: A depleo de clulas CD4 com anticorpo GK1.5 dura de 2 a 4 semanas

Qual o efeito da depleo de clulas T reg na resposta de

clulas T CD8 exauridas?
- Potencial proliferativo
-

-Aumento da populao total de clulas T

ativadas.
- Aumento da proliferao de cls. T CD8
(totais e LCMV-especficas)

Qual o efeito da depleo de clulas T reg na resposta de

clulas T CD8 exauridas?
- Potencial proliferativo
-

Qual o efeito da depleo de clulas T reg na resposta de

clulas T CD8 exauridas?
- Funo efetora -

- Aumento da
produo de IFN-
por clulas T CD8
LCMV-especficas

Qual o efeito da depleo de clulas T reg na resposta de

clulas T CD8 exauridas?
- Funo efetora Marcao
com 51Cr

Co-cultura com
clulas T CD8
esplnicas LCMVespecficas

(Liberao de

51

Cr)

Incubao de
clulas-alvo com
peptdeos de LCMV

Clulas T CD8 : MC57

(efetora) (alvo)

- Aumento da expresso de
marcadores de ativao

Anlise da
citotoxicidade

Qual o efeito da depleo de clulas T reg na resposta de

clulas T CD8 exauridas?
- Funo efetora Incubao de
clulas-alvo com
peptdeos de LCMV

Marcao
com 51Cr

Co-cultura com
clulas T CD8
esplnicas LCMVespecficas

(Liberao de

51

Cr)

A depleo de clulas T reg na infeco crnica por LCMV leva

recuperao do potencial proliferativo e da funcionalidade de clulas
T CD8+ especficas para o vrus.

Clulas T CD8 : MC57

(efetora) (alvo)

- Aumento da expresso de
marcadores de ativao

Anlise da
citotoxicidade

O bloqueio de outras vias que induzem exausto tem o

mesmo efeito sobre a resposta de clulas T CD8 exauridas?

Papel da via inibitria de

PD-1: bloqueio da via de PD1 com anticorpo
neutralizante anti-PD-L1.

O bloqueio de outras vias que induzem exausto tem o

mesmo efeito sobre a resposta de clulas T CD8 exauridas?

Papel da via inibitria de

PD-1: bloqueio da via de PD1 com anticorpo
neutralizante Clulas
anti-PD-L1.
T reg consistem na principal via de manuteno da

exausto de clulas T CD8+ em contexto de infeco crnica por

LCMV.

A presena do antgeno viral necessria para ativao de

clulas T CD8 vrus-especficas aps a depleo de clulas T reg?
- Infeco Aguda (eliminao do antgeno) -

Depleo de cls.
Treg

- Durao de 8-10 dias

- Produo de cls. T CD8 de memria a longo
prazo

A presena do antgeno viral necessria para ativao de

clulas T CD8 vrus-especficas aps a depleo de clulas T reg?
- Infeco Aguda (eliminao do antgeno) -

Esplencitos totais

Fentipo efetor:
CD44hiCD62LlowCD127low

Clulas T CD8
LCMVespecficas

Fentipo de memria
a longo prazo:
CD44hiCD62LlowCD127hi

A presena do antgeno viral necessria para ativao de

clulas T CD8 vrus-especficas aps a depleo de clulas T reg?
- Infeco Aguda (eliminao do antgeno) -

- Aps
a depleo de clulas T reg, a ativao de clulas T CD8
Esplencitos totais
especficas para o vrus depende da presena do antgeno viral.
Fentipo efetor:
CD44hiCD62LlowCD127low

- Clulas T reg suprimem principalmente a proliferao de clulas T

induzida pelo antgeno.

Clulas T CD8
LCMVespecficas

Fentipo de memria
a longo prazo:
CD44hiCD62LlowCD127hi

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Ativao de clulas dendrticas (via B7/CD28)
Depleo de cls.
Treg

Ativao

TCR

C
lu
la

MHC
CD28
Bloqueio de coestmulo
(tratamento com CTLA-4
Ig)

DC

B7.2/B7.2

(Adaptado de: Herrero-Beaumont et al, Reumatol Clin 2012

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Ativao de clulas dendrticas (via B7/CD28)
Depleo de cls.
Treg

Ativao

TCR

lu
la

MHC
CD28
Bloqueio de coestmulo
(tratamento com CTLA-4
Ig)

DC

B7.2/B7.2 CTLA-4 Ig

- CTLA-4: envolvido na funo

supressiva de clulas T reg

(Adaptado de: Herrero-Beaumont et al, Reumatol Clin 2012

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Ativao de clulas dendrticas (via B7/CD28)
-

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Ativao de clulas dendrticas (via B7/CD28)
Clulas T CD8
esplnicas

Clulas T CD8 esplnicas

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Ativao de clulas dendrticas (via B7/CD28)
Clulas T CD8
esplnicas

Clulas T CD8 esplnicas

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Clulas T CD4 efetoras
Depleo de cls.
Treg

Depleo de
clulas T CD4
(anticorpo GK
1.5)

Apresentao de antgeno
para clulas T CD4

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Clulas T CD4 efetoras
-

Clulas T CD8 do
bao

Clulas T CD8 do
bao

Qual o mecanismo pelo qual clulas T reg mantm o estado de

exausto de clulas T CD8?
- Clulas T CD4 efetoras
-

Clulas T CD8 do
bao

Clulas T CD8 do
bao

Clulas T reg mantm o estado de exausto de clulas T CD8 vrusespecficas atravs da regulao da atividade de clulas dendrticas (via
B7/CD28) e de clulas T CD4 efetoras

Aps a depleo de clulas T reg, a recuperao funcional de clulas T CD8

leva ao controle da carga viral?

H algum mecanismo bloqueando o controle da carga viral...

H algum mecanismo bloqueando o controle da carga viral...

- Aumento da expresso de PD-L1 em DCs e

aumento da expresso de PD-1 em clulas T CD8 recuperadas -

Aumento da expresso de PD-L1 est envolvido no bloqueio

do controle da carga viral?

Depleo de cls.
Treg

Bloqueio da via PD-1

(anticorpos neutralizantes antiPD-L1)

Aumento da expresso de PD-L1 est envolvido no bloqueio

do controle da carga viral?

Aumento da expresso de PD-L1 est envolvido no bloqueio

do controle da carga viral?
Clulas T CD8 esplnicas
Clulas T CD8 esplnicas

Aumento da expresso de PD-L1 est envolvido no bloqueio

do controle da carga viral?
Clulas T CD8 esplnicas

A via PD-1/PD-L1 tem papel essencial no bloqueio do controle da

carga viral aps a recuperao funcional de clulas T CD8,
provocada pela depleo de clulas T reg.

Em contexto de infeco crnica viral, a depleo contnua de clulas T reg

combinada ao bloqueio da via de PD-1 melhora a resposta do organismo
infeco.

Em contexto de infeco crnica viral, a depleo contnua de clulas T reg

combinada ao bloqueio da via de PD-1 melhora a resposta do organismo
infeco.

Mas a depleo contnua de clulas T reg combinada ao bloqueio da via de PD-1

aumentam a perda de peso e a mortalidade.

Otimizao do modelo para aplicao teraputica

Depleo transitria de cls.

Treg

1
2

Bloqueio da via PD-1

(anticorpos neutralizantes antiPD-L1)

Otimizao do modelo para aplicao teraputica

-Aumento da sobrevivncia.

- Recuperao parcial dos nveis de

clulas T reg.

Obs.: O tratamento com toxina diftrica no ocasiona perda de peso ou mortalidade significativas.

Otimizao do modelo para aplicao teraputica

Clulas T CD8 esplnicas

Clulas T CD8 esplnicas

Otimizao do modelo para aplicao teraputica

Clulas T CD8 esplnicas

Clulas T CD8 esplnicas

A imunoterapia que combina a regulao de clulas T reg e regulao da

via de sinalizao de PD-1 pode ser otimizada de forma a maximizar as
respostas de clulas T e minimizar efeitos adversos.

Em resumo...

A depleo de clulas T reg leva recuperao do potencial proliferativo e da

funo efetora de clulas T CD8 exauridas.

As clulas T reg ocasionam a exausto de clulas T CD8, possivelmente atravs

da modulao da atividade efetora de clulas T CD4 e modulao do status de
ativao de clulas dendrticas:
Diretamente, atravs de CTLA-4 (e bloqueio da via B7/CD28)
Indiretamente, atravs da alterao da atividade de clulas T CD4.

A ativao de clulas T CD8 decorrente da depleo de clulas T reg depende

da presena do antgeno cognato.

Em resumo...

Aps a depleo de clulas T reg, o controle da carga viral s ocorre com o

bloqueio da via do receptor inibitrio PD-1.
Clulas T reg modulam a exausto de clulas T CD8, enquanto a via PD1/PDL1 atua prevenindo a destruio das clulas-alvo.

possvel desenvolver e otimizar uma terapia que combina a regulao de

clulas T reg e regulao da via de PD-1 para maximizar as respostas de clulas
T e minimizar efeitos adversos.
Potencial teraputico