13.

Accin de los agentes

fsicos sobre los
microorganismos
Parte B: liofilizacin,
desecacin, radiaciones,
presin hidrosttica, presin
osmtica y pH

Liofilizacin

Es la desecacin al vaco de una

muestra previamente congelada
(sublimacin)
Mantiene la viabilidad de los
cultivos durante decenas de aos
(en ampollas de vidrio
hermticamente cerradas y
mantenidas a temp ambiente)

Desecacin al aire

Mata a las clulas vegetativas, pero no

a las endosporas
Causas de muerte:

Aumento de [sales intracelulares]

Daos por oxidacin

Diversa sensibilidad, segn especies:

Bacilo tuberculoso: muy resistente (meses)

Vibrin colrico: muy sensible (dos horas)

Efecto de las radiaciones

sobre los microorganismos

Conceptos generales sobre

radiaciones y biomolculas
Radiaciones ionizantes: efectos y
aplicaciones
Radiaciones ultravioleta: efectos y
aplicaciones
Efectos de la luz visible

Radiaciones
electromagnticas y
Si la energa del fotn es E>10 eV radiaciones
biomolculas
ionizantes

Originan cadenas de ionizaciones, en las que se forman

pares de iones (uno con carga + y otro con carga -)
Esto lleva a cambios qumicos en el sistema

Si la energa es E<10 eV radiaciones no

ionizantes. El electrn se excita, y al volver al
estado basal puede dar fenmenos de:

Fluorescencia
Fotosensibilizacin
Reacciones fotoqumicas
Emisin de calor

Efectos de las radiaciones

ionizantes (I)

Radiaciones ionizantes:

Rayos X
Rayos gamma

Las bacterias son ms resistentes que

organismos superiores (valores D10):

Endosporas: 2000-3000 Gy
Deionococcus radiodurans: 2200 Gy
Bacterias normales: 200-600 Gy
Homo sapiens: su dosis letal es solo 10 Gy

Efectos de las radiaciones

ionizantes (II)

Efecto letal directo (a altas dosis):

Efecto mutagnico:

Roturas y entrecruzamientos en el
cromosoma que no se pueden reparar
Daos menores que se reparan por
mecanismos propensos a error

Efecto letal indirecto: por radiolisis del

agua, que genera radicales OH letales

Si adems, hay oxgeno formacin de

perxidos y epxidos que son letales

Aplicaciones de las
radiaciones ionizantes

Para la esterilizacin de:

Material farmacutico (antibiticos,

hormonas, etc)
Material mdico-quirrgico (guantes
cirujano, suturas, jeringas, agujas,
bistures, catteres, prtesis, etc)
Algunos alimentos envasados (en
algunos pases). Reconocida su
seguridad por la OMS y otras agencias
sanitarias

Efectos de las radiaciones

ultravioleta

El espectro de accin de los rayos

UV coincide con el espectro de
absorcin por el ADN: 260 nm
No tienen actividad ionizante, pero
originan fotoproductos en el ADN:

Dmeros de pirimidina (ej.: T-T)

Fotoproducto de la endospora
Hidratos de pirimidina

Mecanismos de reparacin
de los fotoproductos del
Mecanismos pre-replicativos
ADN

Reparacin fotoenzimtica
(fotorreactivacin)
Reparacin por escisin y resntesis

Mecanismos pos-replicativos

Reparacin por recombinacin

Reparacin inducible propensa a error
(SOS)

Aplicaciones prcticas de
la luz UV

Producida por lmparas de vapor de

mercurio (emiten a 254 nm)
La luz UV no penetra en slidos,
poco en lquidos y se apantalla por
vidrio
Aplicaciones:

Lmparas de desinfeccin de aire en

hospitales y laboratorios
En investigacin: mutagnesis

Efectos de la luz visible

Efecto negativo indirecto: sensibilizacin

fotodinmica
Las riboflavinas, citocromos, etc se excitan
con luz solar directa, y originan:

Fotooxidaciones en protenas y ADN

Se genera oxgeno singlete (O21) radical muy
reactivo, oxidante, destructivo

Moraleja: no dejes los cultivos expuestos a la

luz solar (se cultivan en oscuridad, salvo las
bacterias fotosintticas, que se protegen por
carotenoides y otros pigmentos)

Efecto de la presin
hidrosttica

Las bacterias de hbitats continentales no

soportan grandes presiones
Bacterias marinas:

Barotolerantes: crecen a presin atmosfrica,

pero aguantan hasta 500 atm
Barfilas

Moderadas: ptimo a 400 atm, pero aguantan hasta

(viven entre 5000 y 7000 metros)
Extremas: ptimos a > 600 atm, y no crecen a presin
atmosfrica (viven en fosas marinas a 10.000 m)

Efecto de la presin
osmtica

En medios hipotnicos, la pared

celular se opone a la entrada de
agua
En medios hipertnicos, las
bacterias tienen mecanismos para
aumentar la osmolaridad interior:

solutos compatibles

Solutos compatibles

Bombeo de iones K+ al interior

Sntesis de solutos orgnicos compatibles:

En bacterias: glu, gln, trehalosa

En levaduras: polioles (sorbitol, ribitol)

A grandes osmolaridades externas, la

bacteria puede bombear un osmoprotector:

Prolina
Betana (glicn-betana)
Colina
Ectona

Microorganismos osmfilos

Sacarfilos (sobre todo levaduras)

Solutos compatibles: polioles

Halotolerantes
Halfilos

Moderados (ej: bacterias marinas): 3,5% de

NaCl
Hiperhalfilos (arqueas Halobacterium):
requieren saturacin de NaCl

Soluto compatible: K+: acumulan hasta 7 M de K +

Requieren gran [Na+] para mantener envueltas

Efecto del pH

Neutrfilos (pH entre 5.5-8)

Acidfilos:

Thiobacillus: crecen a pH 2
Arqueas Sulfolobus, Thermoplasma,
Ferroplasma: crecen a pH 2
La arquea Picrophilus: ptimo a pH 0.7 (!)

Alcalfilos obligados: pH>10

Viven en lagos alcalinos o suelos carbonatados

Algunos son tambin halfilos