PLSMIDOS:

ESTRUCTURA Y FUNCIN

MAURICIO PULIDO JIMNEZ

CENTRO DE ESTUDIOS EN
BIOLOGA MOLECULAR

GIMNASIO CAMPESTRE

HISTORIA DEL DESCUBRIMIENTO DE LOS PLSMIDOS

A comienzos de los aos 50s ya se conoca

la conjugacin en Escherichia coli K12.

Joshua Lederberg (1925 - 2008)

Premio Nobel Fisiologa y Medicina - 1958

ADN Central
Plsmido

Conjugacin en bacterias

 En Escherichia coli hay dos tipos sexuales determinados genticamente. Los genes se transfieren
fsicamente del donante ("macho") al receptor ("hembra").
Factor F (fertilidad) es el plsmido responsable de la masculinidad, se transfiere mucho ms a
menudo que cualquier otro rasgo gentico y lo hace independientemente de los dems genes del
donante.

Conjugacin entre bacterias E.coli

Lederberg observ que el factor F presentaba cierta semejanza con elementos genticos
extracromosmicos de los organelos de eucariotas superiores. En aquel entonces no se conoca
bien la organizacin del genoma bacteriano.

Basndose en evidencias experimentales, William Hayes dedujo que la mayora de los

genes de E. coli residan en una sola estructura que se comportaba en trminos genticos
como un crculo.

William Hayes (1918-1994)

En 1952 Lederberg acu el trmino plsmido para referirse a todos los sistemas
genticos externos al DNA central de las bacterias.

Plsmidos observados al microscopio electrnico.

Representacin esquemtica (mapa) de un plsmido

PLSMIDOS Y SU PAPEL EN LA RESISTENCIA A LOS ANTIBITICOS

Japn (1959): Brote de disentera (Shigella dysenteriae). Pacientes no

respondan a antibiticos. La bacteria portaba genes de resistencia a
varios antibiticos. Genes se transferan a otras bacterias intestinales de
forma parecida al factor F.

Estos factores, llamados R (resistencia), compartan varias propiedades

con el factor F (promovan su propia transferencia intercelular por
conjugacin); algunos de ellos coincidan con el factor F en la secuencia
de DNA.

En las bacterias, los elementos genticos independientes del DNA central

(plsmidos) son componentes importantes de su microcosmos; poseen un
notable inters clnico y cientfico.

QU ES UN PLSMIDO?
Molcula de DNA de doble cadena.
Presente en bacterias y algunas levaduras.
Elemento gentico independiente del DNA central.

Replicacin y transcripcin dependen de las

protenas del hospedero.
Constituye entre 1 y 3 % del genoma celular.

Forma circular o lineal.

Tamaos entre 1 y 200 Kpb.
Replicacin y transferencia
independiente del DNA central.
Nmero de copias variable.

 Genes

plasmdicos

controlan

resistencia

produccin

de

antibiticos,

degradacin de compuestos complejos, produccin de toxinas y enzimas de

restriccin / modificacin.

En algunos casos particulares son responsables de enfermedades en vegetales y

animales.

Slo los plsmidos portan informacin para la conjugacin entre las bacterias.

La prdida del plsmido es permanente puesto que la clula no puede regenerar

un nuevo plsmido, slo puede adquirirlo de otra clula portadora.

ESTRUCTURA DE LOS PLSMIDOS UTILIZADOS EN INVESTIGACIN

1. Origen de replicacin (ORI).
2. Sitio de clonaje mltiple (polylinker).
3. Marcador de seleccin (resistencia a antibiticos) o gen reportero.

El uso de los marcadores de seleccin (resistencia a antibiticos) ha sido reemplazado por

el de genes reporteros, los cuales codifican protenas que causan un cambio fcilmente
detectable en el organismo. Uno de los ms conocido es gfp (protena fluorescente verde).

Los plsmidos pueden adoptar tres tipos de conformacin espacial:

1.superenrollada, que le permite una mayor movilidad electrofortica debido a que
la molcula est muy compacta y esto hace que su superficie disminuya.
2.enrollada, que migra ms lentamente debido a que ocupa mayor superficie.
3.relajada, en el que la molcula muestra un grado de enrollamiento mnimo y por
tanto ocupa una superficie muy grande respecto a los otros casos.

NIVELES DE ENROLLAMIENTO DE UN PLSMIDO

PLSMIDOS COMO VECTORES DE CLONACIN

Los plsmidos permiten almacenar de manera estable y

producir muchsimas copias de un fragmento de DNA. Se
les conoce como vectores de clonacin.

Clonacin es la obtencin de muchas copias idnticas de un

fragmento de DNA determinado.

La clonacin se produce cuando el plsmido se replica de

Plsmido con fragmento de DNA insertado
para produccin de numerosas copias.

manera autnoma muchas veces dentro de la clula.