Anda di halaman 1dari 219

Manual de prctica de Microbiologa

en formato Digital

Maestra Altagracia Jimnez Daz

Manual de prctica de
Microbiologa
en formato Digital

22/11/15

ndice:
Algunos equipos utilizados en microbiologa
Morfologa y disposicin de las clulas bacterianas
Distribucin de microorganismos en el ambiente
Medios de cultivo
Mtodos de siembra
Las coloraciones
Accin de las bacterias sobre los hidratos de carbono
Accin de las bacterias sobre las protenas
Hemlisis
Pigmentos
Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.
Estudio bacteriolgico del agua y otros lquidos de consumo

Manual de prctica de Microbiologa


Digital
Objetivo:
Apropiar al
estudiante que se
inicia en el campo
de la
microbiologa del
conocimiento, en
tcnicas
bacteriolgicas.

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

22/11/15

Equipos del Laboratorio de


Microbiologa

22/11/15

Asas y agujas bacteriolgicas


Placas de Petri.
Porta objetos.
Incubadora.
Autoclave.
Microscopio
Mechero
Nevera
Tubo de ensayo

Frasco de la Vela

22/11/15

Se utiliza para Crear la


atmsfera para
microorganismos
microaerofilicos.
Se obtiene un
ambiente de baja
tensin de oxigeno y
de 10 12 % de Co2
La vela no debe colocarse sobre
los medios de cultivo sino al
lado, dentro de el frasco.

Placa de Petri.

22/11/15

Las placas de Petri


son: recipientes de
vidrio, plstico u otros
materiales
constituidos por dos
piezas; una tapa y
una base, la base
descansa sobre la
tapa y se utilizan para
colocar los medios de
cultivo slidos y se
logra el desarrollo de
cultivos en amplia
superficie y facilitar el
conteo de las colonias.
7

Jarra de Gas Pak

22/11/15

Se utiliza para
Crear la atmsfera
para
microorganismos
anaerobios.

Porta Objetos

22/11/15

Se utiliza para
preparar los frotis

Asas y agujas

22/11/15

Se utilizan para
pescar transportar
y sembrar el
material
bacteriolgico
Se esterilizan en el
mechero al rojo
vivo antes y
despus de las
siembras
bacteriolgicas.
10

Tubos de ensayo

22/11/15

El tapn de los
tubos se sostiene
con el dedo
meique.

11

Microscopio

22/11/15

12

Autoclave

22/11/15

Autoclave: utiliza vapor de


agua a 121 C durante 15'o
20'. Esta temperatura se
logra si se obtiene una
presin de una atmsfera
relativa (dos atmsferas
absolutas o sea 15 libras de
presin por pulgadas al
cuadrado), ya que el
aumento de la presin
provoca aumentos
proporcionales en el punto
de ebullicin del agua.
Es el mecanismo de
destruccin microbiana ms
efectivo, y bien utilizado
asegura esterilizacin.
(Destruye la forma de vida
vegetativa y esporulada)

13

AUTOCLAVE

Se utiliza para
esterilizar y
funciona a 121c
15 libras de
presion por
pulgadas
cuadradas en un
tiempo de 15 a 20
minutos.

Incubadora

Se utiliza para
proporcionar la
temperatura
optima a las
bacterias.

Contador de colonias.

Se utiliza para el
conteo de
colonias.

Mechero de bunsen

Utensilio metlico que


permite calentar
sustancias. Presentan
una base, un tubo, una
chimenea, un collarn y
un vstago. Con ayuda
del collarn se regula la
entrada de aire. Para
lograr calentamiento
adecuados hay que
regular la flama del
mechero a modo tal que
sta se observe bien
oxigenada (flama azul).

Nevera

Se utiliza para
conservar a una
temperatura
adecuada los
medios de cultivos
y cepas
bacterianas.

Nevera: laboratorio de microbiologa

Microscopia
Morfologa de las bacterias

22/11/15

MORFOLOGIA Y DISPOSICIN DE LAS


CELULAS BACTERIANAS
Se da una gran variedad de tamaos y
forma entre las bacterias.
La mayora de ellas oscilan entre 0,2 y
2,0 m de dimetro y presentan una de
las tres morfologas bsicas siguientes:
La esfrica o de coco (que significa
baya), la de bastoncillo o bacilo y la
espiral.

20

Cocos

22/11/15

Los cocos suelen ser esfricos, pero pueden ser


ovalados, alargados o con un lado aplanado.
Cuando los cocos se dividen para reproducirse
pueden permanecer unidos uno a otro. Los cocos
que permanecen en parejas tras dividirse se
llaman Diplococos.

Aquellos que se dividen en dos planos y


forman grupos de cuatro se conocen
como Ttradas .
21

Cocos

Los que se dividen por tres planos regulares y


quedan divididos en grupos cbicos de ocho se
llaman Sarcinas

Aquellos que se dividen siguiendo planos al azar


y forman clulas en paquetes irregulares son
los: Estafilococos

y si se presentan en cadenas se denominan


Estreptococos.

22/11/15

22

Disposicin de los cocos

22/11/15

23

Bacilos

22/11/15

Disposicin de los bacilos:


Los Diplobacilos aparecen en parejas tras la
divisin
Los Estreptobacilos se presentan en cadenas.
Existen an otros que son ovalados y se parecen
tanto a los cocos que se llaman Cocobacilos
Bacilos en letras chinas
Bacilos en palizada
Sin embargo, la mayora de los bacilos se
presentan de forma aislada.

24

Disposicin de los bacilos

22/11/15

25

Bacterias espirales

22/11/15

Las bacterias espirales pueden tener una


o ms vueltas; nunca aparecen rectas.
Los bacilos curvados en forma de coma se
denominan vibrios .
Otros, llamados Espirilos, poseen una
morfologa helicoidal caracterstica, que
recuerda un sacacorchos, con un cuerpo
celular bastante rgido .
Hay an otro grupo de bacterias espirales
llamadas Espiroquetas.

26

Bacterias en Espiral

22/11/15

27

Hongos levaduriforme
Levaduras

22/11/15

28

Hongo filamentoso

22/11/15

29

Hongo filamentoso

Colonia

22/11/15

Colonia agrupacin de microorganismos de


una misma especie.
Caractersticas macroscpica de las
colonias:
Olor: del cultivo puede ser agradable o
desagradable; fetal o frutal, amoniacal,
nauseabundo
Tamao: Grande mediano, pequeo,
pequesima.
Aspecto: Opaco, brilloso, transparente,
rugoso, algodonoso, aterciopelado.
31

Estudio Macroscpico de las colonias

22/11/15

Color: Amarillo, rojizo, blanco, cremas


Forma: Redonda, alargada, irregular
Bordes. Dentados festoneado filiforme, liso
Altura: Plana, elevada, cncava, convexa
Tipo de cultivo: Puro, mixto y contaminado
Puro: Esta formado por un solo tipo de
microorganismo (Para estudiar las propiedades de
un organismo dado es necesario manejarlo en un
cultivo puro)
Mixto: Es la presencia de dos o mas especies de
microorganismo en el cultivo

32

Cultivo contaminado

22/11/15

Contaminado: es cuando aparece un


germen extrao fuera de la lnea de
siembra.
Cantidad de crecimiento del cultivo:
Abundante, abundantisimo, escaso, y
muy escaso

33

Esquema de colonias con su:


forma,margen y elevacin

22/11/15

34

Colonias

22/11/15

35

Las colonias pueden ser:


duras, viscosas, mucosas, secas, muy
secas, cremosas, etc.
En general, al mayor parte de las
Consistencia de la Colonia:
bacterias
forman
colonias dedebes
consistencia
para
determinar
la consistencia
usar una
ms
o menos
cremosa,
aunque existen
asa
estril,
y tocarla
cuidadosamente.
muchas excepciones

22/11/15

36

Cultivo mixto

22/11/15

37

Medios de cultivo

22/11/15

Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de


nutrientes que en concentraciones adecuadas y con
condiciones fsicas ptimas permiten un buen
crecimiento de los microorganismos. Contienen una
base mineral; fuente de carbono, nitrgeno y azufre
Formula bsica de los medios de cultivos: agua
cloruro de sodio, peptona. Extractos de carne o de
levadura.
El agar no se utiliza como nutriente solo para
darle solidez a los medios de cultivos
Para el crecimiento de las bacterias hay que
proporcionarles: los medios de cultivos apropiados la
temperatura optima y la atmsfera requerida

38

Clasificacin

22/11/15

Medios de cultivos vivos o animado y medios de


cultivos muertos o inanimado
De acuerdo a su consistencia o estado fsico.
Liquido: ejemplo caldo simple
Semi-solid: Agar semi slido
Slido: Agar base
El Liquido, Semi-solid, Slido depende de la
cantidad del agar que contengan los medios
El agar no participa como nutriente (solo le
proporciona solides a los medios de cultivos.
De acuerdo a su uso o finalidad: simple,
enriquecidos, selectivos, diferenciales y
especiales.

39

Medios de cultivos

22/11/15

Medio enriquecido: medio al que se le


aaden nutrientes extra y se utiliza para
microorganismos que tienen exigencias
nutricionales.
Agar sangre, Agar chocolate, agar
cerebro-corazn, etc.

40

Medios de cultivos

22/11/15

Medio selectivo: medio que slo


permite el crecimiento de un grupo
de microorganismos e inhibe el de
otros. Permite seleccionar y aislar
microorganismos a partir de
poblaciones mixtas

41

Medio diferencial

Medio diferencial: medio que permite revelar


caractersticas
fisiolgicas
de
los
microorganismos.

Mac conkey: Cuando el microorganismo utiliza el


azcar
lactosa se observan colonias rosadas.
cuando las bacterias no utiliza la lactosa se
observan colonias claras o transparentes.
EAM: en este medio la E coli se observa con brillo
verde metlico.

22/11/15

42

Medios de cultivos

22/11/15

Medio sinttico: son los medios que


contienen una composicin qumica definida
cuali y cuantitativamente.
Se utilizan para el estudio de
requerimientos nutricionales y para obtener
resultados reproducibles.
Medio simple: son los medios que
presentan la mnima cantidad de nutrientes
capaz de permitir el desarrollo de los
microorganismos no exigentes, contienen la
formula bsica de los medios de cultivo.

43

Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante:

Caldo Lactosado Bilis Verde


Brillante: se utiliza en el tubo de
Durham.
Si las bacterias fermentan la
lactosa aparece gas en el tubo
invertido (gas +)
Esta reaccin es producida por el
grupo coliforme. O colibacilos.
Si no es fermentada la lactosa
presenta
(gas -).
Este medio de cultivo es selectivo
para bacterias gram. negativas.
El verde brillante y la bilis inhiben
el crecimiento de bacterias Gram.
positivas.

22/11/15

44

Agar sangre: contiene sangre de carnero


desfibrinada al 5 %
Es un medio enriquecido.

22/11/15

45

Medio de Mac Conkey:

22/11/15

Contiene el azcar
lactosa y un indicador
que es el rojo neutro,
este medio es selectivo
para microorganismos
Gram. negativos.
Si la lactosa es
fermentada las
colonias se observaran
de color rosado
Si no las colonias se
observaran
transparentes.

46

Eosina Azul de metileno

22/11/15

Es un medio
selectivo y
diferencial
Es selectivo para
bacterias Gram.
Negativas
La E. coli crece
con brillo verde
metlico

47

Manitol salado:

22/11/15

Es un medio utilizado
para los Estafilococos.
El indicador de PH es
rojo fenol.
Si el microorganismo
fermenta el manitol se
tornar el medio
amarillo.
Si no lo fermenta, se
tornar color rojo
cereza.
Es fermentado por el
S. aureus.

48

Mtodos de Siembra
Sembrar una bacteria es el acto de
colocarla en un medio de cultivo
apropiado para promover su
crecimiento y desarrollo
Para desarrollar una bacteria invitro
hay que proporcionarle :
1-Nutrientes con los medios de cultivos
que requieran.
2-La atmsfera apropiada
3- La temperatura optima, entre otros.
El resultado de la siembra es el cultivo
22/11/15

49

Mtodos de Siembra
Medio: Lquidos o
caldos
Instrumento: Asa
Mtodo: Dilucin
Finalidad: poner la
bacteria en
suspensin

22/11/15

50

Mtodos de Siembra
Medio: Semislido
Instrumento: Aguja
Mtodo: Puncin o
Picadura
Finalidad: observar
la Movilidad.

22/11/15

Si crece en la lnea de
siembra es inmvil.
Si crece fuera de la lnea
de siembra es mvil

51

Mtodos de Siembra
Medio: Slido en tubo
Inclinado.
Instrumento: Asa o
aguja
Mtodo: Estra en
superficie

22/11/15

52

Mtodos de Siembra
Medio de cultivo:
TSI
Mtodo: Puncin y
estras en superficie.
Instrumento: Aguja
Finalidad:
Observar los reacciones
(cambios) que ocurren en
la superficie y la
Profundidad.

22/11/15

53

Interpretacin: Lectura de TSI

Amarillo (A): cido


(ferment el azcar)
*Rojo (K): alcalino (no
ferment el azcar)
*Negro: presencia de H2S
(H2S+)
*Burbujas o vacos, con
levantamiento del medio:
presencia de H2 + CO2
H2 + CO2+
Precipitado negro = H2S

22/11/15

54

Mtodos de Siembra
Medio: Slido en
placa
de Petri
Mtodo: Estras por
Agotamiento.
Instrumento: Asa
Finalidad: Aislar
colonias
22/11/15

55

Mtodos de Siembra
Medio: Slido en placa
de Petri
Mtodo:
Embadurnamiento
Instrumento: Hisopo
Finalidad: Obtener
colonias confluentes.

22/11/15

56

Pasos previos a toda coloracin

22/11/15

Hacer un frotis dejar secar y fijar.


Frotis: Dispersar el material
bacteriolgico en un porta objetos
Secar: Dejar expuesto al aire
Fijar: pasar tres veces por el calor del
la llama del mechero ( para evitar que
se desprenda durante los lavados).
Tambin se puede utilizar licor de
Hoffman.
57

Frotis:
Dispersar el material bacteriolgico en un porta
objetos

22/11/15

58

Preparacin de un frotis

22/11/15

Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y


seco, se coloca una gota del material
bacteriolgico que se va a teir (si es
lquido) y se extiende o dispersa sobre el
porta objetos.
Si es de un medio de cultivo slido, se
coloca una gota de diluyente y el material
bacteriolgico se homogeniza y se dispersa
en el porta objeto.
Si es directo de la muestra se hace rodar el
hisopo con que se tom la muestra en el
porta objeto.
59

Preparacin de un frotis

El material se frota
directamente sobre el
portaobjetos, donde
puede visualizarse con
facilidad ( de los
cultivos en los medios
lquidos)

El material colocado
en el portaobjetos se
deja secar al aire.
Y se fija al calor del
mechero.

22/11/15

60

Las coloraciones

22/11/15

Los colorantes son sustancias capaces de ceder o


transmitir su color a otras.
Los colorantes pueden ser segn su estructura
qumica :
1-cidos, bsicos y neutros
Colorantes cidos son los que la propiedad colorante
radica en el ion con carga negativa, por lo que se
llaman aninicos
En los bsicos ,por el contrario , el Ion coloreado es el
positivo , siendo llamado cationico.
Los colorantes neutros son una sales complejas de un
colorante cido y un bsico

61

Los colorantes

22/11/15

De acuerdo con la estructura molecular, existen


en cada colorante dos grupos qumicamente
activos: el grupo auxocromico, que le da a la
molcula su habilidad para reaccionar con el
sustrato correspondiente, y el grupo cromforo

( ion coloreado) que es el lugar donde se verifica


la absorcin o no de las distintas longitudes de
ondas luminosa en la produccin del color.

El proceso de coloracin de las bacterias es un


intercambio inico entre estas y el colorante

62

22/11/15

Las clulas bacteriana se pueden observar con el


microscopio ptico.
La principal dificultad es la falta de contraste
entre la clula y el medio que la rodea, y el medio
ms simple de aumentar el contraste, es la
utilizacin de colorantes.
Estos pueden emplearse para distinguir entre
tipos diferentes de clulas o para revelar la
presencia de determinados constituyentes
celulares, tales como flagelos esporas, cpsulas,
paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.

63

22/11/15

Las clulas generalmente son tratadas


para coagular el protoplasma antes de
teirlas, proceso llamado fijacin.
Para bacterias, la fijacin por el calor es lo
ms corriente, aunque tambin puede
fijarse con sustancias qumicas como
formaldehdo, cidos y alcoholes.
Despus de la fijacin, si se aade el
colorante, no se producen ulteriores
cambios estructurales en el protoplasma.

64

22/11/15

La fijacin se realiza habitualmente en


clulas que han sido fijadas sobre un
portaobjetos, tratando despus ste con el
agente fijador, y siguiendo inmediatamente
el proceso de tincin.
La fijacin produce habitualmente el
encogimiento de las clulas; la tincin, por el
contrario, hace que las clulas aparezcan
mas grande que como son realmente, de
manera que las medidas de las clulas que
han sido fijadas o teidas no pueden
realizarse con mucha precisin.
65

Los colorantes

22/11/15

La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos


que tienen alguna afinidad especfica por los materiales
celulares.
Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
molculas cargadas positivamente (cationes) y se
combinan con intensidad con los constituyentes
celulares cargados negativamente, tales como los
cidos nucleicos y los polisacridos cidos.
Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de
metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros
colorantes son molculas cargadas negativamente
(aniones) y se combinan con los constituyentes
celulares cargados positivamente, tales como muchas
protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina
cida y el rojo Congo

66

Los colorantes

22/11/15

Algunos colorantes teirn mejor slo


despus de que la clula haya sido
tratada con otra sustancia qumica, que
no es un colorante por s mismo.
Esta sustancia se denomina mordiente;
un mordiente habitual es el cido tnico,
el lugol.
El mordiente se combina con un
constituyente celular y lo altera de tal
modo que ahora s podr reaccionar con
el colorante.
67

La tincin negativa

22/11/15

Es el reverso del procedimiento de tincin usual: la


cpsula se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el
medio que las rodea.

Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La


sustancia utilizada para la tincin negativa es un material
opaco que no tiene afinidad por los constituyentes
celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como
la tinta china (que es una suspensin de partculas de
carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro
insoluble en agua).

La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar


el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero
su mxima utilidad est en revelar la presencia de
cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.

68

Coloracin de Gram
Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un mdico
dans con estudios en bacteriologa y farmacologa.

22/11/15

La coloracin de Gram. tiene inters


taxonmico ya que divide las
bacterias en dos grandes grupos,
bacterias Gram positivas que se
tien de morado y bacterias
gram negativas que se tien de
rojo
La coloracin de Gram es positiva
compuesta y diferencial.

69

La tcnica revela diferencias constitutivas de la pared


celular entre bacterias Gram positivas y Gram
negativas.
La pared celular de las bacterias Gram positivas
posee una gruesa capa de peptidoglicano, la cul
impide que escape el complejo cristal violeta-lugol.
Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las
Gram negativas
es
delgada y se encuentra unida a
Coloracin
de
Gram
una membrana externa lipdica, susceptible a la
decoloracin con el alcohol-acetona, el que acta
como un solvente orgnico.
Los lpidos se disgregan con el alcohol acetona y el
decolorante penetra a la clula bacteriana
decolorndola.

22/11/15

70

Pared celular de las bacterias Gram


positivas:

22/11/15

El peptidoglicano se dispone
en varias capas lo que le
otorga grosor a la pared.
Atraviesan el
peptidoglicano polisacridos
cidos, denominados cidos
teicoicos.
Los cidos teicoicos son de
dos clases: poliglicerol
fosfato y poliribitol fosfato.
Las funciones primarias de
estos polmeros son la
estabilizacin del
peptidoglicano y la captura
de Mg++.

71

Pared celular en bacterias Gram negativas

22/11/15

Su pared celular es ms delgada, pero ms


compleja que la de los Gram positivas.
El peptidoglicano se dispone en una sola capa,
pero por fuera de ella se encuentra una segunda
membrana denominada membrana externa.
La membrana externa es una membrana
asimtrica, porque si bien la monocapa interna
est formada por fosfolpidos, la monocapa
exterior est formada por un tipo especial de
lpido, denominado lipopolisacrido (LPS).

72

Pared celular en bacterias Gram negativas

22/11/15

El LPS es una molcula que contiene tres


regiones diferentes: el lpido A, el core y el
antgeno O.
El LPS constituye una endotoxina, que se libera
cuando la bacteria se divide o muere.
Es un potente estimulador de los macrfagos, lo
que causa la activa liberacin de citoquinas,
responsables de las manifestaciones clnicas de
las infecciones por bacterias Gram negativas y
que varan desde una fiebre hasta el shock
sptico.
En esta membrana externa se encuentran las
porinas.

73

22/11/15

Entre la membrana externa y la membrana


celular se crea un compartimiento virtual,
llamado espacio periplsmico.
El espacio periplsmico es una matriz que
incluye al peptidoglicano, enzimas, protenas
captadoras de nutrientes y sustancias de
secrecin.
La membrana externa contiene numerosas
protenas, siendo las porinas las ms
abundantes.
Se denominan as, porque forman poros que
comunican el exterior con el espacio
periplsmico.
74

Pared celular en bacterias Gram negativas

22/11/15

75

Pared celular en bacterias Gram negativas

22/11/15

La membrana externa de las


bacterias Gram negativas
poseen porinas que son canales
cargados de agua y que
permiten la entrada y salida de
sustancias de la clula al
exterior y del interior de la
clula.

76

Coloracin de Gram.

22/11/15

Protocolo
Hacer un frotis
Dejar secar al aire
Fijar la muestra con calor a la
llama de una lmpara de alcohol
o con el licor de Hoffman.

77

Coloracin de Gram.

22/11/15

Cristal violeta
El lugol entra en las clulas y forma un complejo
insoluble con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona sirve para realizar
la decoloracin. Las bacterias Gram. positivas no
se decoloran, mientras que los Gram. negativas
s lo hacen.
Para poner de manifiesto las bacterias Gram.
negativas se utiliza una coloracin de contraste
de color rojo; safranina.
Despus de la coloracin de contraste las clulas
Gram. negativas se observan de color rojo,
mientras que las Gram. positivas se observan de
color Morado.
78

Interpretacin
Gram negativas

22/11/15

Gram positivas

79

Tincin Bacteriolgica de Gram.

22/11/15

El equipo para realizar la


tincin de Gram. consta
de:
Colorantes y
reactivos :
Cristal Violeta, Yodo-Lugol y
Safranina.
Solvente: AlcoholCetona.
Bandeja de tincin.
Asa bacteriolgica o
hisopo.
Frasco lavador.
Muestra bacteriana
slida (agar), lquida (caldo)
o espcimen clnico.

80

Coloracin de Gram. Paso 1.

22/11/15

Paso 1.- Cubrir la


preparacin con
Cristal Violeta por
60 seg.
y lavar
suavemente con
agua.

81

Coloracin de Gram.

22/11/15

Paso 2.- Cubrir la


preparacin con
Yodo-Lugol por 60
seg y lavar
suavemente con
agua.

Altagracia Jimenez Diaz MA

82

Coloracin de Gram.

22/11/15

Paso 3.- Cubrir la


preparacin con
Alcohol-Cetona
durante algunos
segundos (5-10)
y lavar
suavemente con
agua.

Altagracia Jimenez Diaz MA

83

Coloracin de Gram.

22/11/15

Paso 4.- Cubrir la


preparacin con
Safranina por 60
seg y lavar
suavemente con
agua.
Secar y Observar
con lente de 100x
(inmersin).

Altagracia Jimenez Diaz MA

84

Coloracin de Gram.
preparndonos para la observacin al microscopio

22/11/15

85

Resultados de la coloracin de Gram.


Bacterias teidas de morado: Gram positivas
Teidas de rojo: Gram negativas
Podemos observarle la forma, la disposicin y la
propiedad tintorial.

22/11/15

86

Coloracin de Ziehl Neelsen

La coloracin de Ziehl Neelsen al igual que la de


Gram es positiva, compuesta y diferencial.
Reactivos: fucsina bsica fenicada - solucin de
alcohol-cido (3% de HCl en etanol de 95) - azul
de metileno
Esta tincin permite diferenciar a los
microorganismos que son cido alcohol
resistentes, de color rojo,
rojo de los que no lo son,
de color azul.
azul Se utiliza en la identificacin de
mycobacterias.

22/11/15

87

Ziehl Neelsen
La coloracin cido-resistente es otra coloracin
muy usada para el examen microscpico de las
mycobacterias, y las nocardias.
Debido al crecimiento lento de la mayora de las
mycobacterias, los extendidos para identificar
bacilos alcohol-cido resistente juegan un papel
importante en el diagnstico temprano de la
infeccin por mycobacterias.
El mtodo clsico de coloracin cido-resistente
es el descubierto por Ziehl y Neelsen en el ao
1882 y ampliamente usado hasta la fecha para
el diagnstico de Mycobacterium
Tuberculosis y Mycobacterium leprae.

22/11/15

88

22/11/15

Es una coloracin especfica para colorear


bacterias cuyas paredes celulares contienen
largas cadenas de cidos grasos.
Por su alto contenido de acido micolico (cera
no saponificable) tienen la capacidad de unir
el colorante fucsina a su pared de manera
que hacen a la clula resistente a la
decoloracin con alcohol cido.
Son bacilos cido-alcohol resistente (BAAR),
las mycobacterias, y las nocardias.

89

Coloracin de Ziehl Neelsen

REALIZACIN

Preparar un frotis bacteriano.


Se deja secar al aire y se fija al calor.
Cubrir la preparacin con carbofucsina.
Calentar la preparacin con una lmpara de alcohol durante 5
min. No debe hervir.
Si se evapora, se aade ms carbofucsina para que no se seque
en ningn momento.
Lavar con agua el resto de colorante.
Decolorar con la mezcla alcohol-cido por tres minutos
Lavar con agua .
Teir con azul de metileno 1 min.
Lavar con agua el resto de colorante.
Secar la preparacin.
Examinar al microscopio.

22/11/15

90

Resultados de la coloracin de
Ziehl Neelsen

BAAR

22/11/15

91

Resultados de la coloracin de
Ziehl Neelsen

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

92

Coloracin de Cpsula

22/11/15

La tinta china o la nigrosina dan un fondo


oscuro sobre el cual la cpsula de
terminados microorganismos como el
Cryptococcus neoformans se observar
como un halo claro alrededor del
microorganismo.

93

Coloracin de Cpsula

22/11/15

Mtodo con tinta china (Mtodo de Gin)


Tcnica
Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo.
Tomar una pequea cantidad del material bacteriolgico
del cultivo y mezclar con las gotas de dextrosa.
Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y
aadir una gota de la mezclar anterior y con el extremo
de un portaobjetos , hacer un frotis delgado y secar al
aire, fijar con alcohol metlico por un minuto.
Teir por 2 minutos con Cristal violeta.
Lavar con abundante agua, secar y observar al
microscopio.

94

Coloracin de Cpsula
Resultado

22/11/15

95

LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS


(Respiracin Fermentacin)

22/11/15

El termino respiracin se refiere a todas las


reacciones que ocurren dentro de las clulas
de liberacin de energa (oxidaciones)

Es posible hacer una distincin entre las


oxidaciones que utilizan oxigeno molecular y
aquella que no lo hacen como sigue:

Respiracin es la oxidacin que utiliza


oxigeno molecular como aceptor primario de
hidrogeno AEROBIA y la oxidacin que
tiene lugar en ausencia de oxigeno
molecular ANAEROBIA.

96

LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS

22/11/15

La respiracin y la fermentacin son los dos


mecanismos de que dispone la clula viva para
proveerse de energa; ambos llevan a cabo la
oxidacin del sustrato.

La condicin de aerobio o anaerobio puede ser


estricta. Es decir ser una necesidad especifica,
en tal caso recibe el nombre de anaerobio
obligatorioas o aerobios obligatorios,
posiblemente este ultimo grupo posee enzimas
esenciales, las cuales funcionan nicamente en
el estado reducido y son particularmente
sensibles a la inactivacin del oxigeno.

97

LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS

Otras son facultativas y son capaces de


vivir aerbica o anaerobicamente.

Microaerofilicos : han sido llamados


aquellos organismos que requieren
oxigeno libre en menor concentracin
que la existente en la atmsfera.
Medio de cultivo para el estudio de la
respiracin bacteriana es el Caldo de
Thioglicolato

22/11/15

98

Tipos de respiracin bacteriana

22/11/15

Aerobia: crece en la superficie del tubo


Anaerobia: crece en la profundidad del
tubo de caldo de thioglicolato de sodio
Microaerofilica:crece debajo de la zona
oxigenada del tubo de caldo de
thioglicolato de sodio
Facultativa: crece en todo el tubo de
caldo de thioglicolato de sodio

99

La respiracin bacteriana
Medio de cultivo Caldo de thioglicolato de sodio
y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros

22/11/15

100

ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE


CARBONO

Durante el proceso del metabolismo algunas


bacterias son capaces de reducir a los
carbohidratos a compuestos menos complejos
que pueden penetrar en el interior de las clulas.
Para que se den estas reacciones es preciso que
los microorganismos sean capaces de elaborar
enzimas.

22/11/15

101

ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS


HIDRATOS DE CARBONO

22/11/15

La mayora de las bacterias


hetertrofas metabolizan la glucosa,
pero la degradacin sigue distintas
direcciones, segn la constitucin
enzimtica de las diversas especies
de bacterias.

102

ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE


LOS HIDRATOS DE CARBONO

22/11/15

Para realizar esta prctica se


requiere de medios de cultivo que
contengan azucares

Altagracia Jimenez Diaz MA

103

TSI

contiene tres azcares que son:


glucosa, lactosa y sacarosa
contiene tambin sulfato amnico
ferroso, que reacciona con el
acido sulfhdrico, con el cual se
determina la formacin de H S
(sulfuro de hidrogeno)un
precipitado de color negro.
2

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

104

22/11/15

Interpretacin:

Se verifican varias reacciones,


Ninguna reaccin, alcalino superficie/alcalino fondo
(K/K). El medio se queda inerte, no cambia de color por
tanto es un No Fermentador y se descarta
Enterobacteriaceae.
Alcalino superficie/Acido fondo (K/A), significa solo
fermentacin de la glucosa, por tanto, es un No
fermentador de lactosa (o sacarosa ).
Acido superficie/Acido fondo (A/A), significa que se trata
de un fermentador de lactosa (o sacarosa en TSI).
Alcalino superficie/Acido fondo con precipitado negro, se
reporta como H2S positivo.
Adems de las caractersticas anteriores se pueden
observar burbujas o rompimiento del medio debido a la
produccin de gas en el medio.

105

Interpretacin:

TSI

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

106

MAC-CONKEY:

22/11/15

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial


Es un medio de cultivo selectivo para bacterias
Gram. negativas
Este medio contiene el azcar lactosa y un
indicador de PH( rojo neutro), entre otros
componentes.
Si la bacteria fermenta el azcar
las colonias se tornan rosadas.
Si no la fermenta las colonias se observan
transparentes.

107

Mac Conkey se observan Colonias Rosadas.


Resultado: Lactosa Positivo

22/11/15

108

Mac Conkey: Colonias Claras o Transparentes


Resultado: Lactosa Negativo

22/11/15

109

Interpretacin:

22/11/15

Se verifican dos reacciones


Colonias rosadas la bacteria
fermento la lactosa
Colonias transparentes la bacteria
no fermento la lactosa

110

CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE


(CLBVB):

22/11/15

Es un medio de cultivo selectivo para


Gram. negativos. En tubos de
Durham cuando hay gas en el tubito
invertido nos indica que hay presencia
de gas por tanto ha ocurrido la
fermentacin de la lactosa
Esta reaccin es producida por los
coliformes .

111

CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE (CLBVB):

22/11/15

Interpretacin:
Si se observa un desplazamiento en
el tubito invertido se reporta:
gas +
Si el tubito invertido permanece
lleno del liquido se reporta: gas -

112

CALDO LACTOSADO BILIS VERDE


BRILLANTE.

GAS POSITIVO

GAS NEGATIVO

Prueba de la Coagulasa

22/11/15

cepa de Staphylococcus
La coagulasa acta como una enzima
termoestable que permite diferenciar el
Staphylococcus aureus del resto de los
Estafilococos coagulasa negativos.
Se producen dos tipos de coagulasa, la
unida a la pared celular y la liberada por la
clula como coagulasa libre y es la
detectada por la tcnica en tubo.
La coagulasa acta sobre la protrombina
para producir trombina que acta sobre el
fibringeno para formar el coagulo.

114

Interpretacin:

22/11/15

Si se forma un coagulo la prueba


es: positiva
Si no se forma el coagulo la prueba
es: negativa.
Staphylococcus aureus forma un
coagulo, es coagulasa +
Staphylococcus que no forman
coagulo son: coagulasa
115

Interpretacin:

22/11/15

Coagulasa +

Coagulasa -

116

Prueba de oxidasa

Se basa en que determinadas bacterias poseen las


enzimas citocromo oxidasa o indofenol oxidasa, que
catalizan el transporte de electrones.

En esta prueba, un tinte incoloro, como el


dihidrocloruro de p-fenilendiamina sirve como un
aceptor artificial de electrones para la enzima oxidasa.
El tinte es oxidado y forma el compuesto coloreado,
azul de indofenol.

22/11/15

Fundamento:
La Prueba de la Oxidasa hace una diferenciacin inicial
de las bacterias Gram. negativas.

117

Prueba de oxidasa

22/11/15

118

La prueba de la Catalasa

22/11/15

Esta prueba permite diferenciar los microorganismos


aerobias y facultativas Catalasa POSITIVA de las
anaerbicas y de las Microaerofilicas las cuales son
Catalasa negativa
La catalasa es una enzima respiratoria, es una
porfirina de hierro cuya funcion es desdoblar
los peroxidos en H2O y O2
Se utiliza en el laboratorio para diferenciar el
Estafilococos de Estreptococos

119

Prueba de la Catalasa+

22/11/15

120

ACCIN DE LAS BACTERIAS SOBRE LAS PROTEINAS


Protelisis
Durante su metabolismo
las bacterias que poseen
enzimas proteolticas son
capaces de desdoblar las
protenas
que
son
molculas
demasiado
grandes
para
poder
penetrar en las clulas
bacterianas razn por la
cual tienen que ser
desarticuladas
en
compuestos
ms
sencillos para que las
clulas puedan utilizarla
como elemento nutritivo.
22/11/15

La protelisis es la
degradacin de las
protenas.
El resultado final de la accin
proteoltica es la
produccin de
aminocidos.

121

INDOL

22/11/15

El Indol es uno de los productos


de degradacin metablica del
aminocido triptofano.
Las bacterias que poseen la
triptofanasa son capaces de
hidrolizar el triptofano con
produccin de indol.
La produccin de indol es una
caracterstica importante para la
identificacin de muchas especies
de microorganismos.
La prueba de indol est basada
en la formacin de un anillo rojo
cuando el indol reacciona con el
grupo aldehdo del pdimetilaminobenzaldehdo.
(reactivo de Kovacs )
Este es el principio activo de los
reactivos de Kovacs y Ehrlich. El
medio de cultivo utilizado debe
ser rico en triptofano.

Anillo
amarillo

Anillo rojo
+

122

UREA

Es una prueba que se realiza


para determinar si la bacteria
posee la enzima ureasa (esta
enzima descompone la urea
en amoniaco).
El medio de cultivo es un
caldo rico en urea el cual
posee un indicador de PH el
cual se torna (fucsia) en
medios alcalinos.
Resultados: el desarrollo de
un color fucsia indica que la
prueba es positiva.
Si no hay el desarrollo de un
color fucsia indica que la
prueba es negativa

22/11/15

123

Gelatina

22/11/15

Es una prueba que se


realiza para determinar si
la bacteria es capaz de
licuar la gelatina por la
presencia de la enzima
Gelatinasa.
El medio de cultivo es
gelatina.
El fundamento de la
prueba es la licuacin
irreversible de la
gelatina
Esta prueba hay que
llevarla a la nevera por
una o dos horas despus
de sacarla de la
incubadora.

Resultados:
NEGATIVA

Al sacar la prueba de
gelatina de la nevera est
gelificada

POSITIVA
Al sacar la prueba de gelatina
de la nevera est
liquida (licuacin irreversible)

124

prueba

Enzima
ACCIN DESustrato
LAS BACTERIAS
SOBREProducto
LAS
PROTEINAS
final

Interpretacin

urea

Caldo de
Urea

ureasa

Amoniaco

Fucsia+
Limoncillo-

indol

Caldo
triptonado o
peptonado

Triptofanasa

Indol

Aadir
Kovacs
Anillo rojo+
Anillo
amarillo-

Gelatina

Gelatina

gelatinasa

Licuacin
Irreversible

Refrigerar
Liquida +
Gelifica -

Lisina

Lisina Iron
Agar (LIA)

Descarboxilasa

Cadaverina

Fondo morado+
Fondo amarillo-

Desaminasa

22/11/15

cido alfa ceto


carbnico

Superficie rojo
con fondo
amarillo+
Sin cambioPrecipitado negro
H2S

125

HEMOLISIS

22/11/15

Es la destruccin de los glbulos rojos. Muchos


organismos producen sustancias que disuelven
los glbulos rojos, estas sustancias se
denominan Hemolisinas.
La Hemlisis se puede observar en medio de
cultivo de agar sangre.
Cuando las bacterias producen hemolisinas
solubles que dan por resultado la aparicin de
una zona clara transparente alrededor del
crecimiento de la colonia, se ha producido una
Hemlisis tipo Beta.

126

HEMOLISIS

22/11/15

Otros microorganismos producen otro tipo


de hemolisinas que originan cambios en la
hemoglobina de los glbulos rojos
(transformacin a meta hemoglobina) la
cual se hace visible por una coloracin
verde alrededor de las colonias. Entonces
se dicen que han producido una
Hemlisis tipo Alfa.
Cuando no se produce ningn cambio se
le denomina Hemlisis tipo Gamma.

127

HEMOLISIS: Alfa, Beta y Gamma


No Hemolitica
Alfa

22/11/15

Beta

128

Pigmentos

22/11/15

LOS PIGMENTOS
Son sustancias coloreadas metabolizadas por
microbios.
Uno de los caracteres ms llamativos de los
cultivos es la pigmentacin o cromo gnesis.
Se denomina endopigmento cuando el pigmento
no se segrega al exterior sino que queda en el
interior de la clula bacteriana
Se denomina exopigmento (Pseudomonas)
cuando el pigmento se segrega adems de las
colonias al medio exterior.

129

Exopigmento

22/11/15

Exopigmento
(Pseudomonas)
cuando el
pigmento se
segrega adems
de las colonias al
medio exterior.
Es de color verde

130

Endopigmento

22/11/15

Se denomina
endopigmento
cuando el pigmento
no se segrega al
exterior si no que
queda en el interior de
la clula bacteriana
Staphylococcus aureus
Endo pigmento de
color amarillo dorado

131

Endopigmento

22/11/15

132

PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS QUIMIOTERAPEUTICOS.

Antibiograma

22/11/15

La determinacin de la
sensibilidad
antimicrobiana a los
aislamientos bacterianos
que tienen significado
clnico es una de las
principales funciones del
laboratorio de
microbiologa.
El objetivo principal de
las pruebas de
sensibilidad es predecir
el xito del tratamiento
con los antimicrobianos
ensayados.

Esto significa que un


resultado sensible
implica una alta
probabilidad de que el
paciente va a responder al
tratamiento con ese
determinado
antimicrobiano. Y un
resultado dado como
resistente es casi seguro
que falle con ese
tratamiento.
La prueba de sensibilidad
mas usada es el mtodo
Estandarizado de DiscoDifusin (Kirby-Bauer)

Altagracia Jimenez Diaz MA

133

Antibiograma

22/11/15

Mtodo de la prueba: Difusin Kirby Bauer


Mtodo de la siembra: Embadurnamiento
Medio de cultivo: MH
Instrumento de siembra : Hisopo
Resultados: Sensible, resistente e intermedio
Sensible: si al rededor del disco de sensibilidad el

microorganismo no crece y se forma un halo claro de


inhibicin.
Resistente: si al rededor del disco de sensibilidad el
microorganismo crece y NO se forma un halo claro de
inhibicin.
Intermedio :si alrededor del disco de sensibilidad se forma un
pequeo halo o si el halo es grande pero aparecen colonias de
bacterias mutantes

Altagracia Jimenez Diaz MA

134

Antibiograma

Resistente

Sensible

22/11/15

135

Antibiograma

22/11/15

SENSIBLE: Si alrededor del disco se forma un


halo de inhibicin que corresponda a los puntos
de corte establecidos (CLSI) para cada
combinacin de microorganismo/antimicrobiano
Esta categora implica que una infeccin dada por
la cepa en estudio puede ser tratada
apropiadamente con dosis de antibitico
recomendada para el tipo de infeccin y la especie
infectante a menos que hubieran
contraindicaciones.

136

Antibiograma

22/11/15

RESISTENTE: No se forma un halo


claro alrededor del disco de
sensibilidad.
La bacteria crece alrededor del
disco.

137

Produccin de lactamasas.

Las enzimas son codificadas por:


Genes

22/11/15

de los cromosomas.
Plsmidos extracromosomales.

Altagracia Jimenez Diaz MA

139

Su produccin puede ser :


Constitutiva

(cuando se hace de
manera constante).

22/11/15

Inducible, es decir, luego de la


exposicin de la bacteria al
antibitico.

140

Las -lactamasas rompen el anillo


lactmico de penicilinas.

22/11/15

141

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

142

Sustancias ms estables frente a la


accin de las -lactamasas.

Las

cefalosporinas de espectro
extendido (ceftazidima, cefotaxima y
ceftriaxona).

Los

antibiticos monobactmicos
como aztreonam.

22/11/15

143

Estadsticas

22/11/15

En 1994, fue reportado que 1.3% a


8.6% de los aislados clnicos de E.
coli y Klebsiella pneumoniae eran
resistentes parcial o totalmente a
ceftazidima y hasta en 50% de los
casos, tal propiedad estaba
relacionada con la sntesis de lactamasas de espectro extendido.

144

RESISTENCIA A ANTIBITICOS
-LACTMICOS.

Compuestos
B- Lactamicos.

Penicilinas.
Cefalosporinas.
Monobactmicos.
Carbapenems.

22/11/15

146

Principales mecanismos de resistencia a los


-lactmicos
Cambios

en las protenas
fijadoras de penicilina.
Alteraciones en las porinas de la
membrana externa.
Produccin de -lactamasa que
inactivan al antimicrobiano.
22/11/15

147

Mutacin

de los genes que codifican


para estos pptido.
Adquisicin de genes extraos que
Modificacin
de las
protenas
fijadoras de
codifican
para
nuevas
protenas
penicilina.de penicilina.
fijadoras

22/11/15

148

Composicin de la envoltura de las bacterias


Gram. positivas (A) y Gram. negativas (B).

22/11/15

149

Impermeabilidad de la pared.

22/11/15

150

Bacterias que modifican las


porinas de su cpsula externa .

22/11/15

E. coli.
Pseudomonas aeruginosa .
Serratia marcescens.

151

IMPORTANCIA CLNICA DE LA
RESISTENCIA BACTERIANA.

MEDIDAS PARA MODIFICAR LA


VELOCIDAD CON QUE SE
DESARROLLA LA RESISTENCIA.

22/11/15

El uso racional de estos


medicamentos.
La educacin de los pacientes.
La seleccin adecuada del
rgimen antibitico.

153

BACTERIAS QUE SON RESISTENTES


POR LA ACTIVIDAD DE -LACTAMASAS
DEL GRUPO 2.

Escherichia coli.
Klebsiella spp.
Proteus spp.

22/11/15

154

El enterococo es un
microorganismo patgeno que
actualmente presenta
insensibilidad intrnseca a varios
antibacterianos comunes y a
ciertos compuestos como
vancomicina y otros antibiticos
glicopptidos de reciente
desarrollo.

22/11/15

155

De acuerdo con los reportes ms


recientes, emitidos por los Centros
para el Control de Enfermedades
de Atlanta, en Estados Unidos la
prevaleca de cepas nosocomiales
de neumococo resistente a
vancomicina es de 10% a 12% y
dicha cifra va en aumento.

22/11/15

156

22/11/15

La resistencia a vancomicina es, en estos


momentos, un motivo de creciente
preocupacin para la comunidad mdica,
ya que tal antibitico era considerado
como la ltima herramienta para
combatir las infecciones causadas por
grmenes multirresistentes, en particular
estafilococo coagulasa negativo y S.
aureus resistente a meticilina.

157

ACCIN DE LOS AGENTES QUMICOS: ANTISPTICOS Y


DESINFECTANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS

22/11/15

Determinar la accin de los


agentes qumicos: antispticos y
desinfectantes sobre los
microorganismos e interpretar los
resultados tiene importancia para el
rea de salud

158

22/11/15

El antisptico o el desinfectante en el
disco difunde a travs del agar.
En la medida que aumenta la distancia al
disco, disminuye logartmicamente la
concentracin del antisptico o el
desinfectante, producindose en el agar
un gradiente de concentracin del
antisptico o el desinfectante alrededor de
cada disco.
Continua----159

22/11/15

Concomitantemente con la difusin


del antisptico o el desinfectante, la
bacteria que fue inoculada en la
superficie y que no es inhibida por el
antisptico o el desinfectante
contina su multiplicacin hasta tener
un crecimiento visible.
En las reas donde el antisptico o el
desinfectante inhibi la bacteria, se
produce una zona de inhibicin del
crecimiento alrededor de cada disco.
160

Antisptico / Desinfectante

22/11/15

161

Resultados

22/11/15

Eficaz : Si el microorganismo no crece


alrededor del disco impregnado de
antisptico o desinfectante
Ligero Eficaz : Si el microorganismo
crece ligeramente alrededor del disco
impregnado de antisptico o desinfectante
No Eficaz : Si el microorganismo crece
alrededor del disco impregnado de
antisptico o desinfectante

162

22/11/15

ESTUDIO BACTERIOLOGICO DEL


AGUA Y OTROS LIQUIDOS DE
CONSUMO

163

Estudio bacteriolgico del agua


y otros lquidos de consumo

22/11/15

Para determinar la presencia de


coliformes y contaminacin fecal se
realizan dos pruebas:
La prueba preliminar _estadstica y
la prueba confirmatoria.

164

Prueba Preliminar
Para hacer la prueba
preliminar se utilizan 5
tubos de caldo lactosado
Bilis Verde Brillante a los
cuales se les aade 5 ml.
De la muestra en estudio.
Se lleva a la incubadora.
a las 24 horas se lee
cuantos tubos hay
positivos y cuantos tubos
negativos, utilizando una
tabla ESTNDAR.
Se obtiene el numero
mas probable de
coliformes presentes en
la muestra.

22/11/15

165

Tabla para obtener el No. Mas probable de


coliformes en el liquido estudiado
Tubos de C.L.B.V.B.
NEGATIVOS

22/11/15

POSITIVOS

No. Mas probable de


coliformes en el liquido
estudiado

200

510

920

1,610

Mas 1610
166

IMViC

22/11/15

El IMVIC esta conformado por 4 pruebas:


Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskawer y
Citrato.

167

IMViC
Resultados:

++--

22/11/15

E. coli

168

IMViC
Resultados:

--++
Klebsiella
o Enterobacter

22/11/15

169

La prueba del IMViC puede ser sustituida por una prueba de


movilidad en semisolido y una prueba de indol

22/11/15

La E. coli: indol
positivo
Es una bacteria
mvil
Brillo metlico
en EAM

Klebsiella es
inmvil
Indol negativo
o Enterobacter
Indol negativo
Es mvil

170

sembrando en Eosina azul de


metileno(EAM).
La E. coli crece con brillo verde
metlico.
La E. coli es la bacteria que se toma
como ndice de contaminacin fecal

22/11/15

171

Eosina Azul de Metileno


EAM con brillo

22/11/15

172

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA

22/11/15

Cndida albicans
Tubo
germinativo
positivo

173

Test de Camp

22/11/15

Para diferenciar a
los estreptococos
grupo B

174

Sensibilidad a la optoquina / Streptococcus pneumoniae


(en agar sangre

22/11/15

175

22/11/15

Bacilos gram.
Negativos
Fermentadores de
Glucosa
Haemophilus
influenzae
Coloracin de Gram.
Forma: Coco Bacilos
Propiedad tintorial.
Gram. Negativo

176

22/11/15

177

22/11/15

178

PRUEBAS DE IDENTIFICACIN EN EL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGA

22/11/15

Diplococos gram.
Negativos
Neisseria
gonorroheae
Coloracin de Gram.
Forma. Cocos
Disposicin:
diplococos
arrionados
intracelulares
Propiedad tintorial.
Gram. negativo
( Cocos teidos de
rojo de rojo)

179

Prueba de oxidasa

22/11/15

Prueba de
oxidasa + en la
N. gonorroheae
igual que N.
meningitidis

180

Control de Microorganismos

22/11/15

1.- De qu mtodos se vale el hombre para el


control de los microorganismos?
De agentes fsicos, qumicos y quimioterapeuticos.
2.- Define los siguientes trminos:
Esterilizacin: Es el proceso de destruir todas
las formas de vida microbiana.
Estril: Libre de vida de cualquier clase.
Desinfectante: Es un agente que tiene la
propiedad de matar las formas de desarrollo, pero
no necesariamente las esporas resistentes de
microorganismos patgenos.
Se aplica en superficies inanimadas (pisos, mesas,
paredes).

181

22/11/15

Desinfeccin : Es la operacin de destruir agentes


infecciosos.
Antisptico: Sustancia que impide el desarrollo de
microorganismos por destruccin o inhibicin de su
crecimiento o actividad. Contrario al desinfectante se aplica
sobre el cuerpo.
Sptico: Caracterizado por la presencia de
microorganismos perjudiciales en el tejido vivo.
Bactericida: Agente que mata a las bacterias (Accin
irreversible).
Bacteriosttico: Agente que inhibe la multiplicacin
bacteriana (Accin reversible).
Germicida: Agente que mata microbios.
Desgerminacin: Procedimiento encaminado a
disminuir el numero de grmenes en un rea, tal es el caso
de aseos de pisos y descontaminacin de paredes y techos.

182

Agentes antimicrobianos

22/11/15

Agentes antimicrobianos: son los que interfieren en el


crecimiento y la actividad de los microbios y se
denominan teraputico (se utilizan en el tratamiento de
las infecciones).
3.- Cules son los factores que influyen sobre la
esterilizacin y la desinfeccin? La hidratacin, el
tiempo, la temperatura, concentracin, materia orgnica
extraa, pH.
4.- Cul es el modo de accin de los agentes
antimicrobianos?
Daos a la pared celular.
Alteracin de la permeabilidad celular.
Alteracin o coagulacin de las molculas de protenas y
de los cidos nucleicos.
Inhibicin de la accin enzimtica.
Mecanismos genticos.

183

22/11/15

5.- Control por agentes fsicos.


Cules son los agentes fsicos ms usados?
La temperatura.
Radiaciones.
Filtracin.
Gases.
Presin osmtica.
6.- Por qu mata el calor seco a las bacterias?
Porque les coagula las protenas y las deshidrata.
Por qu mata el calor hmedo a las bacterias?
Por hidrlisis y coagulacin de las protenas

Altagracia Jimenez Diaz MA

184

22/11/15

7.- Mencione los medios mas usados


para matar bacterias por calor
hmedo: el autoclave, la ebullicin, la
tindalizacin, Pasteurizacin.
8.- Entre los agentes qumicos capaces
de matar bacterias, cules son los ms
usados? Alcoholes, fenol y compuestos
fenolicos, metales pesados y sus
compuestos, agentes oxidantes, colorantes,
detergentes, gases.

Altagracia Jimenez Diaz MA

185

22/11/15

10.- Cul es el mecanismo de accin de los


antibiticos?
Inhibicin de la formacin de la pared celular.
Ej.: Penicilina, cesfalosporina, vancomicina.
Efecto sobre la membrana celular.
Ej.:Polimicina, nistatina, anfotericina, etc.
Inhibicin de la sntesis proteica. Ej.:
tetraciclina, cloranfenicol, gentamicina, neomicina.
Accin sobre los cidos nucleicos. Ej.:
griceofulcina, antinomicina.
inhibicin de metabolitos esenciales, los sulfas
que compiten con el paba.

186

22/11/15

1.- En qu consiste cultivar una bacteria? Es el


procedimiento por el cual promovemos el crecimiento de
los microorganismos in vitro y el medio por el cual
estudiamos su fisiologa.
2.- Cul es la formula bsica de los medios de
cultivo?
Agua
Na Cl
Peptona
Extracto(levadura o carne)
3.- Cmo se clasifican los cultivos segn su estado
fsico?
Lquidos
Semi-solid
solid

187

22/11/15

4.- Cmo se clasifican los cultivos segn su uso y finalidad?


Enriquecidos
Diferenciales
Selectivos
Especiales
Simples
5.-Define:
Medio de cultivo simple: crecen en ellos microorganismos no
exigentes.
Medio de cultivo enriquecido: contienen nutrientes extra
como el agar sangre y agar chocolate
Medio de cultivo selectivo: medios en los que se favorece el
desarrollo de determinado microorganismo, al contener sustancias
inhibidoras para los dems grmenes. MC, EAM etc
Medio de cultivo diferencial: medios generalmente slidos,
que le imparten algunas caractersticas especiales a las colonias de
determinado microorganismo, por medio de cual podemos fcilmente
identificarlo. MC y EAM

188

22/11/15

6.- Cmo se le llama a la sustancia que


proporciona solidez a los medios de
cultivo? agar
7.- Qu son los pigmentos bacterianos
y como se clasifican? son sustancias
coloreadas elaboradas por las bacterias
Exopigmento
Endopigmento.

189

Bioseguridad

22/11/15

La Bioseguridad no solo esta limitada a un mero listado de


normas de trabajo sino que requiere de participacin.
Es el conjunto de medidas preventivas destinadas a
proteger la salud de los trabajadores, los usuarios del
servicio y la preservacin del medio ambiente frente a
riesgos de agentes biolgicos, fsicos o qumicos.
agentes fsicos, qumicos y biolgicos en sus reas de
trabajo, a los usuarios del servicio y preservar el
ambiente.
La Bioseguridad se concibe hoy como:
Un derecho de la poblacin (que exige la proteccin de las
personas y del ambiente)
Derecho de los pacientes
Derecho de quienes trabajan en ellos. Se relaciona as con
la higiene hospitalaria y el control de las infecciones
nosocomiales y con la higiene y la seguridad en el trabajo

190

Objetivos de las normas de


Bioseguridad

22/11/15

Reducir el riesgo de accidentes en el personal que


labora en los laboratorios de microbiologa
provocado por las acciones que estos realizan.

Reducir la contaminacin ambiental producto de los


desechos emanados de los laboratorios

Asegurar la integridad de las muestras


bacteriolgicas contra la degradacin o
contaminacin de las mismas que pueda poner en
peligro la validez de los resultados.

Proteger la salud del personal que labora en


laboratorios frente a riesgos asociados con

191

Bioseguridad

Normas generales de bioseguridad

22/11/15

Colocar la seal de Riesgo Biolgico.


Utilizar bata de trabajo. Evitar su uso fuera de los
ambientes del laboratorio.
Utilizar guantes, mascarillas, lentes y/o cubreboca para
todos los trabajos, que obliguen el contacto de material
infeccioso del nivel 4
Evitar entrada del personal ajeno al laboratorio durante la
jornada de trabajo
Durante el trabajo deber mantenerse las puertas
cerradas
No comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos dentro del
ambiente de laboratorio
Lavarse las manos antes y despus de manipular el
material biolgico con jabn lquido.
Usar toallas desechables para el secado de las manos.
No utilizar las neveras para almacenar alimentos.

192

Bioseguridad
No conservar alimentos en el rea de
trabajo del No manipular material
infeccioso en el rea de papelera.
No reencapuchar las agujas, pues es una
fuente importante de accidentes corto
punzantes.
En caso de ruptura de material de vidrio,
no recoger vidrios rotos con los dedos.

22/11/15

193

Bioseguridad
Descartar agujas u otros materiales
punzocortante en recipientes de paredes
gruesas, NUNCA EN LA BASURA COMN
Descontaminacin de los desechos
contaminados antes de su eliminacin
segn tipo
Disponer de manual de procedimientos
para toma de muestras variadas

22/11/15

194

Bioseguridad
Todo el personal del laboratorio deber
ser sometido a un examen mdico
completo, que debe comprender una
historia clnica detallada al momento de
su incorporacin a la institucin, este
debe ser repetido una vez al ao
Todo el personal del laboratorio recibir
inmunizacin protectora segn rea
especfica en que labore, bajo supervisin
mdica y segn criterio epidemiolgico

22/11/15

195

Bioseguridad

22/11/15

Las personas que usan pelo por debajo de


los hombros deben protegerse con gorro o
mantener amarrado el cabello hacia atrs.

No usar durante la jornada de trabajo


brazaletes o collares largos.

Usar zapatos que cubran completamente


los pies

196

Bioseguridad

Normas de Bioseguridad para


evitar riesgos fsicos
Tener totalmente libres las zonas de
circulacin.
Mantener orden en el laboratorio.
Tener estantes seguros.
Evitar sobrecarga en las conexiones
elctricas

Utilice, siempre que sea posible, ayudas


mecnicas para manipular cargas pesadas.

22/11/15

197

Seal de Riesgo Biolgico.

22/11/15

198

Debes recordar:

22/11/15

1-Cuales son las formas


fundamentales de las bacterias?
cocos, bacilos y helicoidal
2-Cuales son las formas
fundamentales de los hongos?
Levaduriforme y filamentosa

199

Hongos filamentosos

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

200

Levaduras

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

201

22/11/15

5.- Esquematice una clula bacteriana y


pngale sus nombres a las diferentes partes.
Diagrama de un Corte Axial de una Bacteria
Fimbrias
Membrana Citoplasmtica
Sustancias Nuclear
Grnulos
Flagelos
Cpsulas
Pared celular

Altagracia Jimenez Diaz MA

202

Clula bacteriana

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

203

22/11/15

6.- Mencione las partes fundamentales de las


bacterias.
Partes fundamentales:
Membrana citoplsmica.
Pared celular
Citoplasma material nuclear.
Mesosoma.
Ribosomas.
Partes especiales.
Fimbrias
Flagelos
Espora
Cpsula

Altagracia Jimenez Diaz MA

204

22/11/15

7.- Esquematice y pngale sus nombres a los


diferentes tipos de flagelos.
Los flagelos son apndices muy delgados
que sobresalen a travs de la pared
celular y se originan en el citoplasma.
8.- De qu sustancia estn qumicamente
compuestos los flagelos de la bacterias?
Por una protena llamada flagelina.
9.- Los flagelos les proporcionan a las
bacterias: movilidad.

Altagracia Jimenez Diaz MA

205

Flagelos

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

206

Bacteria con flagelos

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

207

Fimbrias o Pilis:

22/11/15

Fimbrias o Pilis: Son


apdices filamentosos que
no son flagelos.
Son ms pequeos y no
tienen funcin en la
movilidad. Hay varios tipos
como la F que funciona en la
cpula sexual de transmisin
de material gentico que se
llama conjugacin.
Las fimbrias facilitan la
adherencia a las clulas
epiteliales, como ocurre en
pacientes con fibrosis
qustica, en los cuales la
infeccin por pseudomonas
esta relacionada con la
presencia de fimbrias y otros
factores.

Altagracia Jimenez Diaz MA

208

Esporas

22/11/15

10.- Defina espora bacteriana :


se denomina tambin endoesporas,
pues se produce intracelularmente,
y son formas resistentes que
adquieren los microorganismos en
determinadas condiciones.
Contienen acido dipicolinico + calcio

Altagracia Jimenez Diaz MA

209

22/11/15

11.- De qu sustancia estn


qumicamente compuestas las esporas
bacterianas? De cido dipicolinico y calcio.
12.- Qu le proporcionan las esporas a
las bacterias? Resistencia
13.- Define cpsula bacteriana: cubierta
mucilaginosa que cubre toda la clula.
Aumenta la capacidad infecciosa de la
bacteria.
Son las causantes de algunas molestias en
procesos industriales porque producen
material viscoso.
Altagracia Jimenez Diaz MA

210

22/11/15

14.-Que le proporcionan las


cpsulas a las bacterias? Una
cubierta protectora.
15.- De qu sustancia estn
qumicamente compuestas las
cpsulas bacterianas? De
polisacridos como : dextran,
dextrin, levan y celulosa.

Altagracia Jimenez Diaz MA

211

Cpsulas

La capsula es un Factor de
virulencia
Esta es una coloracin negativa
porque no se tio la cpsula se
observa REFRINGENTE
22/11/15

212

Bibliografa

Alvarez FE et al. Confeccin del Manual de Procedimientos y las Pruebas


de Competencia. Encuentro de Inmunohematologa y Medicina
Trasnfusional. Houston, 12-14 de Junio 1998.
Alvarez MV, Boquete E, De Fez I. Manual de Tcnicas en Microbiologa
Clnica. 2da.Edicin. Asociacin Espaola de Farmacuticos Analticos.
Madrid 1990.
Bantar C, Lopardo H. Urocultivo: Procesamiento, Criterios de
Interpretacin e Informe. www.britanialab.com.ar/apuntes/01_01.
01/01/2000.
Caballero E. Manual de Control de Calidad en Microbiologa.
www.monografas.com/trabajos/mmbiologia. 9/05/2002.
Echniz-Avils IG, Velsquez-Mesa ME, Carnalla MN, Soto Noguern A.
Manual de Laboratorio para el Aislamiento e Identificacin de
Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Enterococcus y
Staphylococcus spp. Instituto Nacional de Salud Pblica. Cuernavaca,
Morelos.
Gabastou JM, Cruz Lpez JR. Sistema de Garanta de Calidad. Conceptos
Generales para los laboratorios de Salud Pblica en la Regin de Amricas.
Organizacin Panamericana de la Salud. Washington,D.C. Enero 2001.

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

213

Bibliografa

Garca M,E. Atlas Electronico de Microbiologia y Enfermedades Infecciosas.


www.movieandinfection.com
Instituto Nacional de Salud. Taller sobre la Identificacin Bioqumica y
Serolgica de Haemophilus influenzae y Streptococcus pneumoniae. Santa Fe
de Bogot, Colombia. Mayo 1998.
Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos Bacteriolgicos en
Infecciones Intrahospitalarias. Serie de Normas Tcnicas No.28. p.6. Lima,
Per. 2001.
Lynch B, N. Seguridad e Higiene en los Laboratorios de Salud. Riesgos,
Prevencin y Normas. p.76-83. Maracaibo, Venezuela. 2002.
Lopardo H, Hernndez C, Soloaga R. Diagnstico Microbiolgico de las
Infecciones Respiratorias Bacterianas. www.britanialab.com.ar/apuntes/22_03.
01/01/2000.
Llop A, Valds-Dapena MM, Zuazo JL. Microbiologa y Parasitologa Mdicas.
Tomo III, Cap. 4, 146 y 147. Editorial Ciencias Mdicas. La Habana.2001.
Maldonado B A, Lepe L R, Prat M MS. Mantencin y control de equipos y
accesorios. Manual de Control de Calidad en el Laboratorio Clnico. Instituto de
Salud Pblica de Chile. 1998.

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

214

Bibliografa

Maldonado B A, Prat M MS, Carmona C. y col. Control de


calidad en bacteriologa. Manual de Control de Calidad en el
Laboratorio Clnico. Instituto de Salud Pblica de Chile. 1998.
Organizacin Mundial de la Salud (OMS). Manual de tcnicas
bsicas para un laboratorio de salud. Serie de publicaciones
cientficas No. 439. Ginebra, Suiza. 1983.
Pidrola de Angulo,G, et.al. Procedimientos en Microbiologa
Clnica No. 1.
Recogida, transporte y conservacin de muestras. Sociedad
Espaola de Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica.
Madrid, Espaa. 1993.
Prescott. Harley. Klein. Microbiologia . Mcgraw-Hill.
Interamericana, Cuarta edicion. 2000
Romero Vivas J, y col. Procedimientos en Microbiologa
Clnica No.3 Hemocultivos. Sociedad Espaola de
Enfermedades Infecciosas y Microbiologa Clnica.
Madrid,Espaa. 1993.

22/11/15

Altagracia Jimenez Diaz MA

215

Bibliografa

22/11/15

Secretara de Estado de Salud Pblica y Asistencia Social. Direccin


Nacional de Laboratorios. Manual de Normas de Bioseguridad para
Laboratorios. Santo Domingo. Enero 2003.
Secretara de Estado de Salud Pblica y Asistencia Social. Programa
Nacional de la Tuberculosis. Mdulo de capacitacin en la aplicacin
de la estrategia DOTS/TAES en Repblica Dominicana.Mdulo 2:
Deteccin, diagnstico y tratamiento. P35. Santo Domingo, Julio
2002.
Secretara de Estado de Salud Pblica y Asistencia Social. Direccin
Nacional de Laboratorios. Manual de Normas y procedimientos
bacteriolgicos para Laboratorios. Santo Domingo.
Departamento de Laboratorio clnico _Microbiolgica
Hospital de Clnicas Facultad de Medicina Monte video Uruguay.
Manual de toma de muestras para estudio Bacteriolgico,
Parasitolgico y Micolgico 2004
Joaqun Hiciano Francisca. Manual de microbiologa Universidad
Autnoma
de Santo Domingo.

216

Bibliografa

22/11/15

Enciclopedia Cumbre, novena ediccion. Madrid: Espaa


Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005.
1993-2004 Microsoft Corporation. Reservados todos los
derechos.
http://es.wikipedia.org/wiki/Protozoo"
www.primer.ru/std/gallery_std/mycoplasmaceae.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/Protozoo
www.dp-c.nl/artikel_11.htm
www.homeoint.org/.../infinitesimal.htm
iws.ccccd.edu/.../media_SD_list_page.htm
www.google.com
Warrem E.Levimson Ernest Jawetz, Microbiologa
e inmunolgica
Jawetz. Melnich Adelberg: Microbiologa Mdica

Altagracia Jimenez Diaz MA

217

22/11/15

Es un recurso didctico fcil de


elaborar, econmico se puede enviar
por correo electrnico , lo puedes
colocar en una pagina Web y permite
a los usuarios aprender, a su medida
segn el tiempo disponible en su hogar
cmodamente y compartirlo con sus
compaeros, estudiar a distancia y se
ha comprobado que el aprendizaje con
su uso es eficaz, eficiente y efectivo.

Altagracia Jimenez Diaz MA

218

Manual de prctica de
Microbiologa
Digital

22/11/15

Se le debe hacer revisiones permanentes


y actualizarlo
Se entregar a la ctedra de microbiologa
a la cual pertenezco para que le hagan las
revisiones y correcciones pertinentes.
Agradezco las sugerencias a la siguiente
Direccin electrnica
A Jimnez 16@ hot mail. com

Altagracia Jimenez Diaz MA

219