CROMATOGRAFIA
Histrico
CaCO
pigmentos
separados
Cromatografia =
kroma [cor] + graph [escrever]
(grego)
CROMATOGRAFIA
Princpio Bsico
CROMATOGRAFIA
Modalidades e Classificao
FM = Lquido
Cromatografia
Lquida
FM = Gs
Cromatografia
Gasosa (CG)
Slida
Cromatografia
Gs-Slido (CGS)
Lquida
Cromatografia
Gs-Lquido (CGL)
Em CG a FE
pode ser:
CROMATOGRAFIA GASOSA
Histrico
1940
CGS rudimentar
CGL proposta (Martin e Synge)
Separao de cidos orgnicos por CGL: primeiro cromatgrafo (Martin e James)
1950
1960
Presentemente:
Vendas de equipamentos e acessrios para CG nos EUA
estimadas em mais de US$ 750.000.000 (1995).
CROMATOGRAFIA GASOSA
Aplicabilidade
VOLTEIS (=evaporveis)
DE FORMA GERAL:
CG aplicvel para separao e anlise
de misturas cujos constituintes tenham
PONTOS DE EBULIO de at 300oC
e que termicamente estveis.
O Cromatgrafo a Gs
1
6
2
5
3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso.
2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra.
3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna.
4 - Detector.
5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).
Observao: em vermelho: temperatura controlada
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Requisito
s:
H2O,
O2
hidrocarbonet
os
INSTRUMENTAO
Gs de Arraste
Requisito
s:
CUST
O
C
A
PUREZ
A
DC
E
CH4
INSTRUMENTAO
Alimentao de Gs de Arraste
Componentes necessrios linha de
gs:
controladores de vazo / presso
de gs
dispositivos para purificao de gs
(traps)
3
6
4
2
1
5
1 - Cilindro de Gs
2 - Regulador de Presso Primrio
3 - Traps para eliminar impurezas do gs
4 - Regulador de Presso Secundrio
- Regulador de Vazo (Controlador Diferencial de Fluxo
6 - Medidor de Vazo (Rotmetro)
Nota: Tubos e Conexes: Ao Inox ou Cobre
INSTRUMENTAO
t=x
Injeo lenta:
t=0
t=x
INSTRUMENTAO
1
2
3
4
Septo (silicone)
Alimentao de gs de arraste)
Bloco metlico aquecido
Ponta da coluna cromatogrfica
INSTRUMENTAO
INSTRUMENTAO
Parmetros de Injeo
Amostra
s
Lquidas
Amostra
s
Gasosas
0,2 L ... 20
L
0,1 ml ... 50
mL
0,01 L ... 3
L
INSTRUMENTAO
agulha (inox
316)
mbol
o
corpo
(pirex)
agulha
guia
mbolo (fio de
ao soldado ao
guia)
INSTRUMENTAO
EMPACOTADA
= 3 a 6 mm
L = 0,5 m a 5 m
CAPILAR
= 0,1 a 0,5 mm
L = 5 m a 100 m
Paredes internas
recober-tas com um
filme fino (fra-o de
m) de FE lquida ou
slida
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
Presso
de
vapor
Velocidade
de
migrao
INSTRUMENTAO
Temperatura da Coluna
TEMPERATURA DA
COLUNA
CONTROLE CONFIVEL DA
TEMPERATURA DA COLUNA
ESSENCIAL PARA OBTER BOA
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um
Forno:
AMPLA FAIXA DE TEMPERATURA
DE USO Pelo menos de Tambiente at
400oC. Sistemas criognicos (T <
Tambiente) podem ser necessrios em
casos especiais.
TEMPERATURA
INDEPENDENTE
DOS DEMAIS MDULOS No deve
ser afetado pela temperatura do
injetor e detector.
TEMPERATURA UNIFORME EM
SEU
INTERIOR
Sistemas
de
ventilao interna muito eficientes
para
manter
a
temperatura
homognea em todo forno.
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um
Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A
operao de troca de coluna pode
ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO
Importante
tanto
em
anlises de rotina e durante o
desenvolvimento de metodologias
analticas novas.
TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL
INSTRUMENTAO
Forno da Coluna
Caractersticas Desejveis de um
Forno:
FCIL ACESSO COLUNA A
operao de troca de coluna pode
ser frequente.
AQUECIMENTO E ESFRIAMENTO
RPIDO
Importante
tanto
em
anlises de rotina e durante o
desenvolvimento de metodologias
analticas novas.
TEMPERATURA ESTVEL E
REPRODUTVEL
INSTRUMENTAO
TCOL ALTA:
- Componentes mais
vol-teis no so
separados
- Componentes menos
vol-teis eluem mais
rapidamente
INSTRUMENTAO
TINI
Temperatura Inicial
TFIM
Temperatura Final
tINI
Tempo Isotrmico
Inicial
tFIM
Tempo Final do
Programa
Velocidade de
Aquecimento
TEMPERATURA
tFIM
tINI
TEMPO
INSTRUMENTAO
DE
VAZO
DO
GS
DE
A viscosidade de um gs
aumenta com a temperatura.
ARRASTE
viscosidad
e
vaz
o
INSTRUMENTAO
Detectores
INSTRUMENTAO
Detectores
Mais Importantes:
DETECTOR
POR
CONDUTIVIDADE
TRMICA (DCT OU
condutividade
arraste.
TCD) Variao da
trmica do gs de
REGISTRO
DE
SINAL
Registradores
XY
DIGITAL
Integradore
s
Computador
TEORIA BSICA
SINA
L
tR
tR = tR tM
t
M
TEMP
O
tR = Tempo de Reteno (tempo decorrido
entre a in-jeo e o pice do pico
t = Tempo decromatogrfico)
Reteno do Composto NoM
TEORIA BSICA
t R t R t M x FC
VR = Volume de Reteno (volume de gs de
arraste necessrio para eluir um analito)
VM = Volume de Fase Mvel (volume de gs
de ar-raste contido na coluna; volume
morto) Ajustado (volume
VR = Volume de Reteno
de gs de arraste consumido enquanto o
analito est sorvido na FE)
V R =
f
Fatores
termodinmicos
Parmetros dimensionais da
coluna
TEORIA BSICA
Constante de Distribuio, KC
Coluna cromatogrfica: srie de estgios
inde-pendentes onde acontece o equilbrio
entre o analito dissolvido na fase estacionria
e no gs de arraste:
KC
A S
A M
KC = Constante de
Distribuio
RETENO !!!
Volatilida
de
[A]
TEORIA BSICA
Fator de Reteno, k
FATOR DE RETENO,
k: razo entre as
massas de analito
contidas na FE (Ws) e
gs de arraste (WM)
RAZO DE FASES, :
razo entre volumes
de FE e gs de arraste
na coluna
WS
k
WM
VM
VS
O fator de reteno k
depen-de da constante
termodi-nmica de
distribuio KC e da
razo de fases
da
TEORIA BSICA
Razo de Fases,
Depende das DIMENSES da coluna:
L = comprimento da
coluna
rC = raio
da
coluna
df =
espessura
do filme de
FE rC
df
2rCd f
Valores de para
colunas capilares
de dimenses
tpicas:
Empacotadas
:
5 < < 50
rC >>
df
dC / mm
df / m
0.10
0.20
0.20
0.25
0.25
0.32
0.32
0.32
0.53
0.53
0.53
0.10
0.11
0.33
0.25
1.00
0.17
0.52
1.00
0.88
2.65
5.00
250
455
152
250
63
471
154
80
151
50
27
TEORIA BSICA
Relaes entre VR, KC e
possvel estimar
tanto o fator de
reteno quanto a
constante de
distribuio a
partir do
cromatograma
TEORIA BSICA
Eficincia de Sistemas
Cromatogrficos
TEMP
O
A migrao um
analito pela
coluna provoca
inevitavelmente
o alargamento da
sua banda:
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
Supondo a coluna cromatogrfica como uma
srie de estgios separados onde ocorre o
equilbrio entre o analito, a FE e o gs de
arraste:
Cada estgio de
equilbrio chamado
de PRATO TERICO
O nmero de pratos
te-ricos de uma
coluna (N) pode ser
calculado por:
t
R
Coluna
mais
eficiente
TEORIA BSICA
Quantificao da Eficincia
ALTURA EQUIVALENTE A UM PRATO
TERI-CO (H) Tamanho de cada estgio
de equilbrio
(L = comprimento da
coluna)
Valores tpicos de H e N:
Capilares, L =
30 m
Empacotadas, L =
2m
dC
df
0.10
0.25
0.32
0.32
0.32
0.32
0.53
0.53
2.16
2.16
0.25
0.25
0.32
0.50
1.00
5.00
1.00
5.00
10%
5%
0.081
0.156
0.200
0.228
0.294
0.435
0.426
0.683
0.549
0.500
370370
192308
150000
131579
102041
68966
70423
43924
3643
4000
TEORIA BSICA
Otimizao da Eficincia
HMIN
uMAX
O valor de
H pode ser
minimizad
o
otimizando
-se a vazo
de gs de
arraste
(A, B, C =
constantes)
- Colunas Capilares: Equao de
Golay
(B, CM, CS =
constantes)
FASES ESTACIONRIAS
Conceitos Gerais
LQUIDOS Depositados sobre a superfcie
de: s-lidos porosos inertes (colunas
empacotadas) ou de tubos finos de materiais
inertes (colunas capilares)
FE
lquida
SUPORTE
Slido
inerte
poroso
Tubo capilar
de material
inerte
Entrecruzada: as
cadeias
polimricas so
quimicamente
ligadas entre si
Quimicamente
ligadas: as cadeias
polimricas so
presas ao suporte
por ligaes
qumicas
SLIDOS Colunas recheadas
com material
finamente granulado (empacotadas) ou
depositado sobre a superfcie interna do tubo
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
SELETIVA Deve interagir
diferencialmente com os
componentes da amostra.
FE Seletiva:
separao
adequada dos
constituintes
da amostra
FE pouco
Seletiva: m
resoluo
mesmo com
coluna de boa
eficincia
Regra geral: a FE deve ter caractersticas
tanto quanto possvel prximas das dos
solutos a serem separados (polar, apolar,
aromtico ...)
FASES ESTACIONRIAS
Caractersticas de uma FE ideal
AMPLA FAIXA DE
TEMPERATURAS DE USO Maior
flexibilidade na otimizao da
separao.
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas: Adsoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel
pela interao analito + FE slida a
ADSORO
Solutos polares
Slidos com grande
nmero de stios
ativos (hidroxilas,
pares de eletrons...)
FASES ESTACIONRIAS
FE Slidas
Caractersticas
- Slidos Gerais:
finamente granulados
Mais
usados:
Polmeros Porosos
Porapak (copolmero
estireno-divi-nilbenzeno), Tenax (polixido de
difenileno)
Slidos Inorgnicos Carboplot, Carboxen
(carves ativos grafitizados), Alumina, Peneira
Molecular (argila microporosa)
Principais
Aplicaes:
- Separao de gases
fixos
- Compostos leves
- Sries homlogas
GASES DE REFINARIA
Coluna:Carboxen-1000 6080
mesh; 15 x 1/8
TCOL: 35oC a 225oC / 20oC.
min-1
Gs de Arraste: He @ 30
ml.min-1
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
POLIGLICIS Muito polares; sensveis
a umidade e oxidao; ainda muito
importantes. Principal: Polietilenoglicol
(nomes comerciais: Carbowax, DB-Wax,
Supelcowax, HP-Wax, etc.)
Estrutura
H O CH2 CH2 OH
Qumica:
AMINAS ALIFTICAS
Coluna:4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH
TCOL: 200oC (isotrmico)
Gs de Arraste: N2 @ 20
mL.min-1
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Maior parte das aplicaes em CG
moderna
Quatro grandes
grupos
estruturais:
PARAFINAS Apolares; alta inrcia
qumica; praticamente abandonadas.
Principais: esqua-lano (C30H62), Apiezon
(graxas para vcuo).
FASES ESTACIONRIAS
FE Lquidas: Absoro
O fenmemo fsico-qumico responsvel
pela interao analito + FE lquida a
ABSORO
ABSOR
O
Grande superfcie
lquida exposta ao
gs de arraste
Interao forte
entre a FE lquida e
o analito (grande
solubilidade)
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
SILICONES (polisiloxanas) As FE
mais em-pregadas em CG. Cobrem ampla
faixa de pola-ridades e propriedades
qumicas diversas.
CH3
H3C Si
CH3
R1
O Si
R2
CH3
O Si CH3 R1, R2 = qualquer
n
CH3
radical orgnico
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
FE derivadas de polidimetilsiloxano (PDMS)
por substituio de -CH3 por radicais
orgnicos, em ordem crescente aproximada
de polaridade:
Substituintes
Nomes Comerciais
Observaes
-
carborano ?
Dexsil 300GC
fenil 5 %
pouco polar
cianopropil 7%
fenil 7%
moderadamente polar
fenil 50 %
moderadamente polar
retm aromticos
trifluoropropil 50%
OV-210 QF-1
moderadamente polar
retm compostos carbonlicos
cianopropil 50%
fenil 50%
polar
retem doadores de eltrons
cianopropil 100%
altamente polar
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de pesticidas - FE = 100 %
PDMS
1 - TCNB
2 - Dichloram
3 - Lindano
4 - PCNB
5Pentacloroanilina
6 - Ronilano
7 - Antor
8 - pp-DDE
9 - Rovral
10 - Cypermetrin
11 - Decametrin
17 min
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de piridinas - FE = 100 %
CNpropilsilicone
1 - piridina
2 - 2-metilpiridina
3 - 2,6dimetilpiridina
4 - 2-etilpiridina
5 - 3-metilpiridina
6 - 4-metilpiridina
3 min
FASES ESTACIONRIAS
Famlias de FE Lquidas
Separao de fenis - FE =
fenilmetilsilicones
50%
Ph
50%
Me
5% Ph
95%
Me
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Separao de ismeros
ticos:
PRODUTOS BIOLGICOS Distino entre
pro-dutos de origem sinttica e natural
(natural = normal-mente substncias
oticamente puras; sinttico = mui-tas vezes
so misturas racmicas).
FRMACOS Em muitos frmacos apenas um
dos ismeros ticos tm atividade
farmacolgica.
Propriedades fsico-qumicas de ismeros
ticos so MUITO SIMILARES
FE convencionais no interagem
diferencialmente com ismeros ticos
FE Quirais
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
FE oticamente ativas mais
importantes:
CH
3
Si
CH3
Derivados de
aminocidos:
Misturas de
compostos
formadores de
pontes de
hidrognio.
CH3
Si
CH2
CH3
CH O
NH C
C
CH3
CH3
C*
CH CH3
CH3
ChiralsilVal
CH3
O
Si
CH3
Organometlicos:
CH3
CH3
O
Si
CH2
CH2
Separao de
enantimeros
formadores de
complexos.
O
Ni
O
C3F7
Chiralsil-
/
2
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais
Derivados de ciclodextrinas
alquiladas:
-ciclodextrina:
oligosacardeo
cclico quiral
ChiralsilDex
- Introduzidas em
1983
- Quando ligadas a cadeias de polisiloxano:
uso extremamente favorvel como FE lquida
(viscosidade baixa, estabilidade ...)
- Podem ser quimicamente imobilizadas nas
colunas
- Colunas disponveis comercialmente
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
leo essencial artificial de limo:
separao de terpenos primrios
1 - (+/-) pineno
2 - sabineno
3 - (+/-) pineno
4 - (+/-)
limoneno
Detector:
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Aroma de bergamota: distino entre
aroma natural e artificial
leo essencial
natural
Essncia
artificial
Detector:
FASES ESTACIONRIAS
FE Quirais: Aplicaes
Anfetaminas: resoluo dos ismeros
Gs de Arraste: He @ 25
cm.min-1
Detector:
COLUNAS EMPACOTADAS
Definies Bsicas
Tubo de material inerte recheado com FE
slida gra-nulada ou FE lquida depositada
sobre suporte slido.
MATERIA
L
DO
TUBO
Granulometr
ia
do
recheio
ao
inox
vidro
pirex
nque
lTEFLON
MES
H
60 - 80
mesh
80 - 100
mesh
100 - 120
mesh
= 3 mm a 6
mm
L = 0,5 m a
5m
dp
177 - 250
m
149 - 177
m
125 - 149
m
Eficincia maximizada
com:
Limitados pela
- Diminuio de
resistncia
dC
passagem de gs de
- Diminuio de
arraste
dp
- Recheio
regular
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
A FE lquida deve
ser disposta
sobre um
SUPORTE slido
TERRA
DIATOMCEA
Esqueletos
fsseis (SiO2 +
xidos
metlicos) de
algas
microscpicas
secage
m
calcina
o
fuso com
soda
lavagem com
cido
silaniza
o
Chromosorb
Anachrom
Supelcoport
...
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Suporte
Chromosorb - caractersticas
gerais
Chromosorb P Rseo, muito
ativo.
Chromosorb
W Branco, mais inerte
que o P.
AW
NOME
m 2 .g -1
Chromosorb P
Chromosorb W
Chromosorb G
4,0
1,0
0,5
g.ml
-1
0,47
0,24
0,58
Tratamentos
especiais:
% Mx. de FE
Tamanho de Poro
rea Superficial
Ordem
crescente
de inrcia
mecnica
Densidade Aparente
0,4 - 2
8-9
-
30
15
5
COLUNAS EMPACOTADAS
FE Lquidas: Carga de FE
df = f (% FE no
recheio)
Maior eficincia (d f =
Menor sangria da FE com temperatura
N)
programada
Separaes rpidas e em temperaturas
menores
%
FE
Maiores
volumes de
Melhor blindagem amostra
dos stios adsortivos do
suporte
Melhor reprodutibilidade no preparo do
recheio
TIPICAMENTE % FE = 1 % a 30 % do
recheio
COLUNAS CAPILARES
Definies Bsicas
Tubo fino de material inerte com FE lquida
ou slida depositada sobre as paredes
internas.
slica
= 0,1
MATERIA
vidro
fundida
mm
ao
L
pirex
aL0,5
mm
=
5
Nylon
inox
DO
m
Silcostee
TUBO
a 100
l
Colunas de slica so revestidas externamente com
m
CAPILARES
Colunas Capilares x
Empacotadas:
L = N Colunas mais
eficientes
FC = 1 ... 10 mL.min-1 Controle de vazo
mais difcil
Vi Dispositivos especiais de
injeo
WCOT
Famlias de Colunas
Capilares :
PLOT
SCOT
COLUNAS CAPILARES
Dimetro Interno
dC =
Eficincia
0,10
mm
1
1
Valores
comuns:
0,25
0,32
mm
mm
0,53
mm
COLUNAS CAPILARES
Fast GC: Colunas Capilares
Finas
Detector:
FID
COLUNAS CAPILARES
Colunas Capilares: Injeo
Baixa capacidade de processamento de
amostra (sub-microlitro)
2
3
4
1 - Septo;
2 - Entrada de gs de
arraste;
3 - Liner (misturador);
4 - Coluna Capilar
5 - Purga de gs de
arraste;
6 - Vlvula de controle de
purga.
6
COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Combinando injetores com temperatura
programada, vl-vulas controladas por
microprocessador e pr-colunas pode ser feita
injeo de grandes volumes (> 100 L) de amostra
1 Colunas e
injetor frios;
vlvula de
purga aberta
(solvente
eliminado)
2 Colunas e
injetor
aquecidos;
vlvula de
purga fechada
(constituintes
de interesse
transferidos
para coluna
COLUNAS CAPILARES
Large Volume Injection (LVI)
Separao de PAH com LVI (Vinj = 25 L,
soluo 400 ppb em CH2Cl2)
Gs de Arraste: He @ 2
ml.min-1
Detector:
FID
COLUNAS CAPILARES
Colunas Multicapilares
Feixes paralelos
de colunas
capilares com dC
convencional
- Eficincia prxima das colunas
- Capacidade similar das colunas
convencionais
- Colunas mais curtas: anlises mais
empacotadas
rpidas
Separao de
explosivos em
coluna multicapilar
(OV-17, 1000
capilares
x 6 m)
1 - 2,6-DNT
2 - 2,4-DNT
3 - 2,4,6TNT
4 - 3,4,5TNT
5 - 2,3,4TNT
6 - RDX ?
7 - tetryl
DETECTORES
Definies Gerais
Dispositivos que geram um sinal eltrico
proporcional quantidade eluida de um
analitoj usados
~ 60 detectores
em CG
~ 15 equipam cromatgrafos
comerciais
4 respondem pela maior parte das
aplicaes
DCT TCD
DIC FID
Detector
por
Condutivida
de
Trmica
Detector
por
Ionizao
em
Chama
DCE ECD
EM MS
Detector
por
Captura de
Eletrons
Detector Espectromtri
co de
Massas
DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
QUANTIDADE MNIMA DETECTVEL
SINAL
(S)
S =
N 3
RUDO
(N)
Fontes
de
Rudo
Contaminantes nos
gases
Impurezas acumuladas no
detector
Aterramento eltrico
deficiente
DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
LIMITE DE DETEO
Quantidade de
analito que gera um pico com S/N = 3 e w b =
1 unidade de tempo
Mesmo detector, nvel de rudo e massa de analito
MAS diferentes larguras de base:
QMD =
f
wb
Detector (sinal gerado,
rudo)
Largura do pico
cromatogrfico
[LD] =
massa / tempo
(ng.s-1, pg.s1
...)
DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
SINA
L
Constante de
Tempo, :
tempo
necessrio para
o sinal chegar a
63,2 % FSD (full
63,2%
scale deflection
FSD
= fundo de
escala) aps a
entrada de
TEMP
amostra
O
A constante de tempo do sistema (detector +
dispositivos de registro de sinal) igual ou menor a
10% da largura a meia altura (w0.5 ) do pico mais
estreito do cromatograma
>>
w0.5
R medido
>t
real
w medida > w
real
Deformao no pico
(cauda)
Diminuio do rudo
(damping)
DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
SENSIBILIDADE
Relao entre o
incremento de rea do pico e o incremento
de massa do analito
RE
A
Fator de
Resposta, S:
inclinao da
reta rea do
pico x Massa
do analito
MASS
A
Sensibilidad
e
o mesmo
incremento de
massa causa um
maior incremento
de rea
Na ausncia de erros
determinados:
A = rea do pico
cromatogrfico
m = massa do
analito
DETECTORES
Parmetros Bsicos de
Desempenho
FAIXA LINEAR
DINMICA Intervalo de
massas dentro do qual a resposta do
detector linear
REA
A partir de
certo ponto
o sinal no
aumenta
mais
linearmente
MASS
A
O fim da zona de linearidade pode ser
detectado quando a razo (rea / Massa)
diverge em mais de 5 % da inclinao da
reta na regio linear:
REA /
MASSA
1,05
S
0,95
S
MASS
DETECTORES
Classificao
UNIVERSAIS:
Geram sinal para qualquer
substncia eluida.
SELETIVOS:
Detectam apenas substncias
com determinada propriedade
fsico-qumica.
ESPECFICOS:
DETECTORES
Detector por Condutividade
Trmica
PRINCPIO Variao
na condutividade
trmica do gs quando da eluio de um
analito.
A taxa de transferncia de calor entre
um corpo quente e um corpo frio
depende da condutividade trmica do
gs no espao que separa os corpos
Se a condutividade trmica do gs
diminui, a quantidade de calor
transferido tambm diminui - o corpo
quente se aquece.
Cela de Deteco do
DCT:
1 Bloco metlico (ao)
2 Entrada de gs de
arraste
3 Sada de gs de arraste
4 Filamento metlico (liga
4
2
W-Re) aquecido
5 Alimentao de corrente
eltrica para aquecimento
do filamento
DETECTORES
Detector por Condutividade
Configurao tradicional
Trmica do DCT: bloco
CELAS DA
AMOSTRA
CORTE
LATERAL
CORTE
SUPERIOR
AMOSTR
A
CELAS DE
REFERNCI
A
CELAS DE
REFERNCI
A
Filamentos
nas celas de
referncia no
se aquecem
Resistncia
eltrica dos
filamentos nas
celas de amostra
aumenta
Resistncia
eltrica dos
filamentos nas
celas de
referncia fica
constante
Diferena
de
resistncia
eltrica
entre os
filamentos
de amostra
e
referncia
DETECTORES
Detector por Condutividade
Os filamentos do DCT
so montados numa ponte
Trmica
de Wheatstone que transforma a diferena de
resistncia quando da eluio de amostra numa
diferena de voltagem:
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT sinal para qualquer
SELETIVIDADE Observa-se
subs-tncia eluida diferente do gs de arraste =
UNIVERSAL
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE Dependendo
da configurao particular e do analito: QMD
= 0,4 ng a 1 ng com linearidade de 104 (ng dezenas de g)
VAZO DE GS DE ARRASTE O sinal
proporcional concentrao do analito no
gs de arraste que passa pela cela de
amostra.
Fc =
0
VAZO DE GS DE
ARRASTE CONSTANTE
DURANTE A ELUIO
VARIAO DA VAZO DE
GS DE ARRASTE DURANTE
A ELUIO
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
NATUREZA DO GS DE
ARRASTE Quanto maior
DCT
a diferena
X, maior a
Como
(M = massa
:
molecular)
QUANTO MENOR A MASSA MOLECULAR DO
GS DE ARRASTE, MAIOR A RESPOSTA
1
1
2
He
outr
o
gs
Usando He ou H2 como gs de
arraste, maximizado: MAIOR
RESPOSTA
Com outros gases,
eventualmente
X > A: PICOS NEGATIVOS
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT
FATORES DE RESPOSTA Quanto menor a
Os fatores de resposta
dependem da condutividade
trmica do analito
Quantidades iguais de substncias
diferentes geram picos cromatogrficos com
reas diferentes !!!
CHCl
Mistura de
quantidades
equimolares de:
Etano = 17,5
Clorofrmio =
6,0
Etanol =
12,7
C2 H
6
C2 H 5 O
H
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCT
Sina
l
TF
Limitaes:
TB
Limitao:
Sina
l
DETECTORES
DCT: Aplicaes
1 Separao e quantificao de compostos que
no geram sinal em outros detectores (gases
nobres, gases fixos)
DCT
2 CH4
3 CO2
4 n-C2
5 NH3
6 n-C3
7 i-C4
8 n-C4
DETECTORES
Detector por Ionizao em
Chama
PRINCPIO Formao
de ons quando um
composto queimado em uma chama de
hidrognio e oxignio
O efluente da coluna
misturado com H2 e O2 e
queimado. Como numa
chama de H2 + O2 no
existem ons, ela no
conduz corrente eltrica.
Quando um composto
orgnico elui, ele
tambm queimado.
Como na sua queima so
formados ons, a chama
passa a conduzir
corrente eltrica
DETECTORES
Detector por Ionizao em
Chama
COLETOR
AR
FLAME
TIP
H2
BLOCO
COLUNA
O ar e o H2 difundem para o
interior do coletor, onde se
misturam ao efluente da
coluna e queimam:
DETECTORES
Detector por Ionizao em
Qumica
da Chama de
Chama
Hidrognio:
Incandescnc
ia
Estrutura da
chama
trs regies
bsicas
Reao
Quebra
Regio de quebra
Mistura dos gases, praquecimento, incio da quebra das molculas de
H2, O2 de
e dos
analitos. Reaes exotrmicas com
Zona
reao
produo e/ou consumo de radicais H, O, OH, HO2
(provenientes do H2), CH e C2 (proveniente do
analito)
CHO+ (analito).
Zona
dee ons
incandescncia
Emisso de luz por
decaimento de espcies excitadas: OH (luz UV), C H
e C2 (visvel).
Queima de
substncias com
ligaes C-H
Queima de H2
CH + O CHO+ +
e-1 on formado a cada ~10
5
tomos de C queimados
Formam-se apenas
radicais !!!
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICpara substncias que
SELETIVIDADE Seletivo
contm ligaes C-H em sua estrutura
qumica.
(como virtualmente todas as substncias analizveis por
CG so orgnicas, na prtica o DIC UNIVERSAL)
NH3, NxOy
CCl4,
peralogenados
HCOOH, HCHO *
DI
C
SiX4 (X =
halognio)
H2 O
CH
4
CO
2
O2
DC
T
N2
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICdo gs de arraste, as
VAZES DE GASES Alm
vazes de alimentao de ar (comburente) e
hidrognio (combustvel) devem ser
otimizadas.
SINAL
H2
AR
150
300
450
600
15
30
45
60
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
TEMPERATURA DE DIC
OPERAO O efeito da
temperatura sobre o sinal do DIC
negligencivel.
TRATAMENTO DE SINAL Por causa da baixa
magnitude da corrente eltrica gerada (pA a
nA) ela deve ser amplificada para poder ser
registrada.
2
Diagrama
eletrnico
simplificado
de um DIC
1
4
Sada de Registro de
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DICO fator de resposta de
FATORES DE RESPOSTA
um determinado composto aproximadamente
proporcional ao nmero tomos de carbono.
Presena de heteroelementos diminui o fator de
resposta.
(X = Contribuio de
cada tomo ao NEC)
Mistura com
quantidades
equimolares de:
C2H6 NEC = 2,00
C2H5OH NEC =
1,40
CH3CHO NEC =
1,00
tomo
C aliftico
C aromtico
C olefinco
C carbonila
O lcool prim.
Cl aliftico
X
+1,00
+1,00
+0,95
+0,00
-0,60
-0,12
DETECTORES
Detector de Nitrognio - Fsforo
Modificao do DIC altamente seletiva para
compostos orgnicos nitrogenados e
fosforados
Prola de sal de metal
alcalino:
RbCl (normal),
KCl
(100 pg
cada)
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
PRINCPIO Supresso de um fluxo de
eletrons lentos (termais) causada pela sua
absoro por espcies
eletroflicas
Um fluxo
contnuo de
eletrons lentos
estabelecido entre
um ando (fonte
radioativa
-emissora) e um
catodo.
Na passagem de uma
substncia
eletroflica alguns
eletrons so
absorvidos,
resultando uma
supresso de
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
1
3
4
4
Cavidade
3
Catodo
5 Coluna
cromatogrfica
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrons
Mecanismo de Captura de
Eletrons
Ib corrente de
repouso
Ie corrente na eluio do
analito
K constante de
captura
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
FONTE RADIOATIVA
O ando deve estar
Sob a forma de
Ta3H3
Maior
sensibilidade
Tdet deve ser <
Usado como
63
Ni 0
Maior
linearidade
til at
~400oC
225oC
63
Ni preferido
em
equipamentos
modernos
Raramen
te
usados:
85
Kr, 90Sr,
226
Ra
99
Tc,
147
Pm,
241
Am,
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
GS DE ARRASTE Funcionamento
do DCE
muito dependente da natureza do gs de
arraste
MAIS
USADOS:
N2
Ar + 5%
CH4
Geram eletrons
lentos quando
bom-bardeados
com -
Adsoro de
contaminantes
sobre os eletrodos
causa deformao
nos picos
Sina
l
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE
SENSIBILIDADE / LINEARIDADE
QMD = 0,01
pg a 1 pg (organoclorados), linearidade ~ 10 4
(pg a ng)
10 fg Lindano
(C6H6)
-ECD HP-6890
PESTICIDA
S
1 tetracloro-m~250 fg cada
xileno
analito
2 - BHC
3 Lindano
4 Heptachlor
5 Endosulfan
6 Dieldrin
7 Endrin
8 DDD
9 DDT
10 Metoxychlor
10
decaclorobifenila
O DCE O DETECTOR PREFERENCIAL
PARA
ANLISES DE TRAOS DE
ORGANOALOGENADOS E SIMILARES
DETECTORES
Caractersticas Operacionais do
DCE DE RESPOSTA
SELETIVIDADE / FATORES
Valores de S maximizados para compostos
eletroflicos
S tpicos (clorobenzeno: S =
1)
hidrocarbonetos e esteres alifticos, dienos
lcoois, cetonas e aldedos alifticos, aminas,
nitrilas, mono - Cl, mono - F
enis, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F
tri - Cl, cloretos de cidos, alquil - Pb,
anidridos
mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS2
di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 dicetonas, fumaratos, organo - Hg
Comparando-se
organoalogenad
os:
DETECTORES
DCE: Aplicaes
Contaminantes em ar atmosfrico - deteco
paralela DIC + DCE
DI
C
DC
E
1, 2, 3 - Hidrocarbonetos
4, 5, 6 -aromticos
Hidrocarbonetos
ANLISE QUALITATIVA
Conceitos Gerais
Aplicae
s
Qualitativ
as de CG
Fontes de Informaes
Qualitativas
RETENO Uso de dados de reteno de um
analito para sua identificao
DETECO
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
tR =
f
Interaes analito /
FE
Presso
de vapor do
analitooperacionais (TCOL,
Condies
FC ...)
Fixas as condies operacionais, o tempo
de reteno ajustado de um analito
uma constante
AMOSTR
A
PADRO
Comparao
de
cromatogra
mas da
amostra e de
uma soluo
padro do
analito
suspeito
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Identificao por tR muito pouco
confivel:
Dependncia com FC e TCOL Variaes
nestas condies afetam sensivelmente
os tR
T
=
COL
VARIAO
DE 1% NO
0,1%
tR
FC = 1%
MASSA
ANLISE QUALITATIVA
Tempos de Reteno
Comparao de tR usando dopagem
(spiking) da amostra com o analito
suspeito: aumento da confiabilidade de
identificao.
Amostra complexa:
incerteza nos tR
medidos pode levar
a identificao
errnea
Comparao com
cromatograma da
amostra dopada
permite
identificao mais
confivel do
desconhecido
ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
FUNDAMENTO Os tR isotrmicos para uma
srie homloga de compostos dependem
logaritmicamente do nmero de tomos de
carbono na cadeia.
Separao isotrmica
de uma mistura de nalcanos (n-C4, n-C5, ...
n-C16)
Um grfico de log(tR)
em funo do nmero
de tomos de carbono
do analito nC LINEAR
ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
O ndice de reteno de Kovts I para um
analito definido por:
tR (A) Tempo de
reteno ajustado do
analito A
tR (N) Tempo de
reteno ajustado do nalcano com N carbonos
tR (n) Tempo de
reteno ajustado do nalcano com n carbonos (n
= N + 1)
Interpolao
logartmica
dos tR
Ex.: um analito com I = 874 teria um
tempo de reteno ajustado equivalente
ao de um n-alcano hipottico com cadeia
de 8,74 tomos de carbono
ANLISE QUALITATIVA
ndice de Reteno de Kovts
REPETIBILIDADE - REPRODUTIBILIDADE Os
efeitos de TCOL e FC nos ndices de Kovts
so pequenos
ANALITO
I/T
Dependncia de I
para algumas
CHCl3
+0,02 %
substncias em uma
CH3CH2OH
-0,12 %
coluna apolar na
CH3CHO
-0,05 %
faixa de TCOL = 70oC
CH3(CO)CH3 -0,04 %
a TCOl = 130oC
Identificao por ndices de reteno
muito confivel que comparaes baseadas
em tR
ANLISE QUALITATIVA
Retention Time Locking (RTL)
PRINCPIO Em cromatgrafos com:
controles pneumticos e trmicos
microprocessados, injetores automticos e
colunas cromatogrficas de qualidade
excepcional possvel alta repetibilidade
CORRIDA
#1
TCOL (1)
FC (1)
nos tR
CORRIDA
#2
TCOL (2)
FC (2)
Coluna
Coluna
A
B
O software
RTL (Hewlett-Packard)
automaticamente ajusta as condies
operacionais em um segundo CG para reproduzir
os tR obtidos em um primeiro equipamento
Cromatogramas
obtidos em diferentes
equipamentos e
colunas com
condies
operacionais da
segunda corrida
ajustadas pelo
software de RTL
ANLISE QUALITATIVA
Mtodos de Deteco
Qualitativos
Mtodos de
deteco que fornecem
informaes qualitativas sobre os analitos
eludos:
ANLISE QUALITATIVA
Espectrometria de Massas
PRINCPIO A amostra fragmentada e
ionizada em um padro caracterstico da
espcie qumica.
1 Molculas da amostra so bombardeadas por
eltrons (electron impact = EI) ou
(chemical
ionization
=- CI):
ABCDE
+ e
ABCDE.+ +
ons
2 e-
2 O on formado se fragmenta:
ABCDE.+ AB. +
+
ABCDE.CDE
+ AB+ +
.+ .
ABCDECDE
A+ +
BCDE.
ABUNDNCI
A
MASSA /
CARGA
O grfico do nmero
de ons formados em
funo da razo
Massa / Carga dos
ons o ESPECTRO
DE MASSAS do
analito
ANLISE QUALITATIVA
Espectrmetro de Massas
1
Cmara de Ionizao
Sada de Vcuo
Separador Magntico
Detector
ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Massas
2
0
4
0
6
0
m/Z
8
0
10
0
12
0
CO
m/Z =
118
m/Z =
80
m/Z =
79
- (CO +
H)
m/Z =
90
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Interface cromatgrafo espectrmetro:
E
M
C
G
Vcu
o
Separador
Molecular
O gs de arraste
leve (He) difunde
mais rapidamente
que o analito e
tende a ser drenado
para o vcuo.
Cmara
de
Ionizao
Colun
a
Capila
r
Interface Capilar
Direta
Com colunas
capilares a vazo
baixa de gs de
arraste pode ser
drenada pelo
sistema de vcuo.
ANLISE QUALITATIVA
Acoplamento CG - EM
Sistema de Controle e Aquisio de
Dados:
MANDATRIO que
sistemas CG-EM
sejam totalmente
controlados por
microcomputador.
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: Gerao do
Cromatograma
Espectros de massas completos
coletados e arquivados em intervalos
regulares de tempo
Gerao do cromatograma a partir dos
espectros:
CROMATOGRAMA DE ONS TOTAIS (TIC
= ToPara
cada
espectro o nmero total de ons
tal Ion
Chromatogram)
detectados na faixa de massas varrida
somado e plotado em funo do tempo,
gerando o cromatograma.
MONITORAMENTO DO ON
SELECIONADO (SIM = Single Ion
Seleciona-se um fragmento resultante da
Monitoring)
TIC
SIM
Universal
Seletivo
Similar a
DIC
Maior
Sensibilidade
ANLISE QUALITATIVA
CG-EM: TIC x SIM
Aroma de polpa industrializada de caj
aps extrao por SPME
TIC
Aparecem os picos
correspondentes a
todas substncias
eludas
SIM (m/z =
149)
Cromatograma
construido a partir
dos mesmos dados
acima, mas apenas
usando
fragementos com
massa = 149
(ftalatos:
plastificante)
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
1 Seleo manual ou automtica do
CONTAGEN
S
CONTAGEN
S
MASSA /
CARGA
TEMP
O
ANLISE QUALITATIVA
Identificao de Eluatos
Busca automtica em bibliotecas de
espectros: comparao estatstica
( Probability Based Matching )
ESPECTRO
DESCONHECID
O
PB
M
BIBLIOTECA DE
ESPECTROS
PBM de um
eluato
desconhecido
(1-dodeceno)
#
1
NOME
1-dodeceno
1-dodecanol
ciclododecano
2-dodeceno
5
6
LIMITAES
:
Lista com
possveis
candidatos +
porcentagem de
confiabilidade
FRM. %
C12H24 99
C12H26O 91
C12H24 91
C12H24 66
C11H22 35
8-metil-3-undeceno C12H24 32
1-undeceno
ANLISE QUALITATIVA
Emisso Atmica em Plasmas
PRINCPIO A amostra fragmentada num
plasma, os fragmentos so excitados e
emitem luz ao retornarem aos seus estados
fundamentais.
1
ABCD + He
+ B + CD +
Ao
retornarem
aos
seus
estados
fundamentais os fragmentos excitados emitem
luz em comprimentos de onda caractersticos.
A+* A+ +
h 1
B* B + h 2
CD* CD +
h 3
ANLISE QUALITATIVA
Gerao e Sustentao de
Plasmas
PLASMA Gs ionizado
por aplicao de uma
descarga eltrica e sustido por um campo
eltrico oscilante
Eletrons da descarga
eltrica colidem com o
gs gerando ons
ons formados so
acelerados pelo campo
eltrico aplicado gerando
continuamente mais ons e
espcies excitadas
ANLISE QUALITATIVA
Espectro de Emisso Atmica
Mistura de raias de emisso atmicas e
moleculares de frag-mentos do analito e raias de
emisso do plasma e impurezas
nHexano
Fragmento
s:
C2
OH
CN
NH
200
nm
800
nm
Naled
(C4H7Br2Cl2O4P)
Fsfor
o
Bromo
Cloro
456
nm
566
nm
ANLISE QUALITATIVA
Esquema Tpico de um CG-DEA
1 Cromatgrafo
Gasoso
2 Alimentao de Gs de Suporte do
Plasma (He)
3 Linha de Transferncia (acoplamento
CG - DEA)
4 Cavidade Ressonante (gerao do
plasma)
5 Lente de
Focalizao
6 Monocromador /
Policromador
7 Detector de Luz (fotomultiplicadora /
diode array)
8 Amplificao / Digitalizao
de Sinal
9
Computador
ANLISE QUALITATIVA
DEA: Gerao de Plasma
Uma cavidade ressonante focaliza potncia gerada
por uma fonte de microondas no interior de uma
cela de deteco por onde passa o gs de suporte.
H
e
CELA DE
DETEC
O
PLASM
A
ANLISE QUALITATIVA
Interface CG - DEA
Plasmas de He se extinguem pela passagem de
grandes quantidades de material (~ 1 L de
lquido vaporizado)
H
e
PURGA
COLUN
A
CELA
VLVULA
DIVERSOR
A
Quando da
eluio de
grandes
quantidades de
analito o fluxo
da coluna
desviado para
a purga