Biotecnologa y la produccin de bioetanol

de segunda generacin

Dra. Carolina Parra F.

Laboratorio Recursos Renovables,
Centro de Biotecnologa,
Universidad de Concepcin, Chile

Cmo se forma la biomasa?

La produccin de
biomasa se inicia en
la biosfera donde el
proceso Fotosinttico
capta energa solar y
la almacena en los
enlaces de las
molculas orgnicas
que forman la
biomasa.

MATERIAS
PRIMAS

Procesos Primera y Segunda Generacin

Biomasa
azucarada
caa azcar
remolacha

Biomasa
Amilcea
Maz, trigo
papa

Biomasa
Lignocelulsica
Madera
Residuos Agrcolas
Trituracin

Trituracin
Zumo

Hidrlisis
cida

Hidrlisis enzimtica

Fermentacin
Destilacin
Etanol

TECNOLOGA DE CONVERSIN
A BIOETANOL
Etapas Claves:
I.- HIDRLISIS
Liberacin de azucares presentes
normalmente en cadenas complejas.
II.- FERMENTACIN
Microorganismos fermentan azcares
a etanol.

Objetivo de los pretratamientos

Separar total o parcialmente la hemicelulosa de la lignina y de la celulosa
aumentando la accesibilidad de la celulosa a reactivos qumicos o
bioqumicos.

lignina

celulosa
hemicelulosa

1) pretratamiento

2) Hidrlisis enzimtica

celulasas

Hexosas y
pentosas
(hemicelulosa)

lignina

Hexosas

Tipos de pretratamientos

Fsicos: reduccin del tamao

Qumicas: ozonlisis, hidrlisis cida o

bsica, delignificacin oxidativa,
procesos organosolv

Fsico-qumicos: explosin con vapor,

AFEX, ultrasonido, explosin con dixido
de carbono, fluidos supercrticos

Biolgicos: hongos

Qu controla la hidrlisis?

Pretratamiento

BIOTECNOLOGA
La biotecnologa es un conjunto de tcnicas que utilizan las potencialidades de
los organismos vivos o de compuestos procedentes de ellos para la obtencin de
productos, bienes y servicios.
Hay dos tipos de biotecnologa:

Biotecnologa tradicional

Biotecnologa actual

Basada en el uso de
microorganismos.

Basada en los logros

obtenidos por la ingeniera
gentica.

Aplicaciones:
1. Alimentacin.
2. Farmacia.
3. Medio ambiente.

Aplicaciones:
1. Agricultura y ganadera
2. Aplicaciones biosanitarias.

Hidrlisis
Enzimtica
La hidrlisis enzimtica de la celulosa consiste en la
utilizacin de enzimas celulolticas, producidas por
algunos hongos y bacterias, para obtener una solucin
de

glucosa

partir

originalmente insoluble.

de

dicho

sustrato

que

es

Enzimas
Las enzimas, tambin conocidas como biocatalizadores,
son aquellos compuestos protenicos que actan como
catalizadores de numerosas reacciones biolgicas.
Estas no modifican el sentido de los equilibrios
qumicos, sino que aumentan la velocidad de la
reaccin.

Caractersticas de las Enzimas

Son efectivas en pequeas cantidades.
No

sufren

modificaciones

qumicas

irreversibles

durante la catlisis.
Pueden catalizar procesos a bajas temperaturas
No afectan la condicin de equilibrio de la reaccin
que catalizan.

Clasificacin de las Enzimas

Grupo

Accin

Oxidoreductasas Catalizan reacciones de oxidorreduccin.

Transferasas

Transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura

de ciertas molculas) a otras sustancias receptoras.

Hidrolasas

Actan en reacciones de hidrlisis con la

consiguiente obtencin de monmeros a partir de
polmeros.

Isomerasas

Actan sobre determinadas molculas obteniendo de

ellas sus ismeros de funcin o de posicin.

Liasas

Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces

denominados fuertes sin ir acoplados a sustancias de
alto valor energtico.

Ligasas

Realizan la degradacin o sntesis de los enlaces

fuertes mediante el acoplamiento a sustancias ricas
en energa como los nucleosidos del ATP.

Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas. Estos estudios
proporcionan informacin directa acerca del mecanismo
de la reaccin cataltica y de la especificidad de la
enzima.
En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten desarrollaron
la teora de la cintica enzimtica y propusieron una
ecuacin de velocidad que explica el comportamiento
cintico de las enzimas.

Ecuacin de Michaelis-Menten

Michaelis y Menten propusieron que las reacciones

catalizadas enzimticamente ocurren en dos etapas.

Celulasa
Son biocatalizadores de naturaleza proteica, que participan en
el rompimiento de los enlaces glicosdicos -1,4 presentes en
los polisacridos celulosa, liberando al medio glucosa y otros
monosacridos.

endo-glucanasas

exo-glucanasas

glucosidasa

Mecanismo de Accin de la Celulasa

Son enzimas que presentan multi dominios.
- Dominio Cataltico
- Dominio de unin a celulosa

Celulasas
Endo--1,4-glucanasa, ataca las regiones amorfas, que hidrolizan las
cadenas de celulosa a unidades ms pequeas como celobiosa o
celotriosa.
Exo--1,4-glucanasa, ataca la regiones cristalinas, rompe por los
extremos no reductores terminales liberando celobiosa como nico
producto de la hidrlisis.
-1,4-glucosidasa, corta la celobiosa y la glucosa libre puede ser tomada
por la clula como fuente de carbono.
BIOETANOL

Hidrlisis Enzimtica de la Celulosa

Inhibicin

CELULOSA
GLUCOSA

GLUCOSA CELOBIOSA OLIGOSACARIDOS

Inhibicin
Inhibicin

Microorganismos Productores de Celulasa

Microorganismo

Tipo de Respiracin

Bacterias
Cellulomonas

Aerbico

Pseudomonas Fluorescens

Aerbico

Clostridium
Thermocellulaseum

Anaerbico

Hongos
Aspergillus Nger

Aerbico

Fusarium Solani

Aerbico

Trichoderma Reesei

Aerbico

Trichoderma Viride

Aerbico

Aspergillus Niger

Ventajas y Desventajas de la Hidrlisis Enzimtica

Ventajas
Opera

condiciones

Desventajas
suaves

de La lentitud del proceso debido a la

temperatura (30 50 C)

propia estructura de los sustratos

celulsicos nativos.

La no utilizacin de agentes qumicos,

ya que as se evita la corrosin de los
equipos y la degradacin de los azcares
producidos.
Alta especificidad.

La necesidad de recuperacin de las

enzimas del medio de reaccin.

Hidrlisis Enzimtica
Condiciones
10% de consistencia;
15 UPF de celulasas / gr de material;
15 UCB beta-glucosidasa / gr de material;
pH= 4,8;
50 C;
150 rpm
Rendimiento % H.E =

Glucosa Producida
Glucosa Potencial

FERMENTACIN

Biotecnologa tradicional
Utilizada desde hace miles de aos, por ejemplo, el empleo
de los procesos de fermentacin microbiana para
producir bebidas alcohlicas, vinagre, pan, queso y yogur,
frmacos, etc.

FERMENTACIONES: TERMINOLOGA
L. Pasteur la denomin "la vie sans l'air" o la vida sin aire .
En el sentido biolgico es un proceso de obtencin de energa en condiciones
anaerbicas que genera cido lctico o etanol (fermentacin lctica o
alcohlica).
Fermentacin lctica:
Glucosa---------> cido Lctico+ energa+ H2O
Fermentacin alcohlica:
Glucosa-------> Etanol+ energa+ CO2
Fermentacin en biotecnologa
En el contexto industrial, fermentacin es un proceso microbiano
a gran escala, tanto en condiciones aerbicas como anaerbicas.
Fermentador o biorreactor

Microorganismos utilizados en
biotecnologa
Aislamiento de microorganismos
Procedimientos de screening
Mejoramiento de cepas-Optimizacin de
condiciones
Produccin a pequea escala
Produccin a gran escala. Fermentadores

Microorganismos utilizados en biotecnologa

Biotecnologa de Organismos
Se puede trabajar con organismos intactos y sus clulas
Se utilizan organismos que NO tienen modificaciones
introducidas por ingeniera gentica.
Se analizan y utilizan las variaciones genticas naturales.
Se optimizan las condiciones de produccin y crecimiento

Microorganismos utilizados en biotecnologa

Biotecnologa Molecular
Se cambia la informacin gentica del organismo
Se puede alterar la estructura o partes de la clulas
Involucra tcnicas de ingeniera gentica
Da como resultado organismos recombinantes

Caractersticas ventajosas de los microorganismos

usados en bioprocesos
Degradacin de polmeros heterogneos hasta
azcares simples
Fermentacin simultnea de una mezcla de
azcares
Tolerancia a los inhibidores producidos durante la
hidrlisis
Tolerancia a la concentracin creciente del producto
final y a las condiciones del proceso de fermentacin

METABOLITOS PRIMARIOS: molculas de bajo peso

molecular que intervienen, como productos finales o
intermediarios, en las distintas rutas metablicas. Los
ms importantes desde el punto de vista industrial son
los aminocidos, nucletidos, vitaminas, cidos
orgnicos y alcoholes.

METABOLITOS
SECUNDARIOS:
molculas
sintetizadas por determinados microorganismos,
normalmente en una fase tarda de su ciclo de
crecimiento.
antibiticos,
ciertas
toxinas
(micotoxinas), alcaloides (cido lisrgico), factores
de crecimiento vegetal (giberelinas) y pigmentos.

Medio de Cultivo:
Conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que
crean las condiciones necesarias para
el desarrollo de los microorganismos.
Diversidad metablica

Diversidad de medios

Esterilizacion: autoclave o filtracin

(termolbiles)

Utilizacin de los microorganismos de

la fermentacin alcohlica
El sustrato es el sumo de uva o la cebada,
cebada ..

Sacharomyces cerevisiae (levaduras)

Produccin de vino:
vino
Se obtiene de la fermentacin alcohlica de zumos de
fruta,
fruta fundamentalmente de la uva,
uva aunque tambin se
puede fabricar a partir de otros materiales ricos en azcar.

Fermentacin de glucosa a etanol

Glucosa

Etanol

C6H12O6

2C2H5OH

(1 Ton)

(0,51 Ton)

Dixido de Carbono

2CO2
(0,49 Ton)

C6H12O6 + 2 ADP + 2 H3PO4 > 2 CH3CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 2 H2O

FERMENTACION
Condiciones para fermentacin de materiales
pretratados
6 a 14 gr/L de inoculo
30 a 40C
150 rpm
10 % de consistencia
Sistemas batch, semicontinuos y continuos

Sacarificacin y Fermentacin
Simultnea (SFS)
Temperatura 40 C
15 UPF de celulasa y 15 UI de beta glucosidasa
6 g/L de inculo Saccharomyces cereviveae
Tiempo 72 horas.

Cuantificacin de etanol
Cromatografa de gases con head space y
detector FID

DESAFOS TECNOLOGICOS DE
LA PLATAFORMA BIOQUMICA

desafos: Alta produccin de biomasa a bajo costo de produccin.

Existen plantaciones forestales

optimizadas para la industria forestal.
Desarrollo de plantaciones
dendroenergticas.
Ej. plantaciones de alta
densidad.

DESAFOS TECNOLOGICOS DE LA PLATAFORMA

BIOQUMICA
Modificar la estructura de la pared celular de las plantas

biotecnologa vegetal.

Desarrollo de enzimas ms eficientes en la desestructuracin de la pared celular biotecnologa.

Celulosa
Hemicelulosa y
lignina

DESAFOS TECNOLOGICOS DE
LA PLATAFORMA BIOQUMICA

LA INTEGRACIN DEL PROCESO

HFS

SFS

SCFS

BPC

Celulasas
Hidrlisis celulosa
Fermentacin hexosas
Fermentacin pentosas
HFS: Hidrlisis y fermentacin separadas; SFS: Sacarificacin y fermentacin
simultneas, SCFS: Sacarificacin y co-fermentacin simultneas, BPC: Bioprocesos
consolidados

DESAFOS TECNOLOGICOS DE
LA PLATAFORMA BIOQUMICA
LA REVALORIZACION DE LOS
SUBPRODUCTOS

BIOREFINERIA
Lignina:

BIOMASA

INDUSTRIA

Lignina:

CALOR/ELECTRICIDAD

PRETRATAMIENTO

SFS

Hidrlisis de
hemicelulosa/extraccin
de lignina

Hidrlisis
enzimtica de
celulosa y
fermentacin

Oligmeros
Xilosa
Furfural, HMF
Otros compuestos
solubles

Masa celular,
enzimas

PRODUCCIN
DE ETANOL

Costo y Costo objetivos para la produccin de etanol

celulsico proyectado por los analistas del Laboratorio
de NREL EE.UU.

REFLEXIONES FINALES

Los biocombustibles de 2G constituyen un reto para alcanzar los objetivos

de futuro, planteado por los pases consumidores, en forma sostenible.
Aunque las tecnologas de B2G estn en el camino hacia la
comercializacin no son una opcin inmediata, existe necesidad de
avances tecnolgicos que reduzcan los costos de produccin y para ello se
necesita apostar decididamente por la I+D+i uniendo esfuerzos y
construyendo instalaciones de demostracin (escalamiento).

La investigacin bsica, aplicada, el desarrollo y la demostracin deben

realizarse de manera coordinada.