CROMATOGRAFA

Por:
Eileen Bolvar Sarmiento
Lays Colpas Morales
Kevin Garca Sosa
Vianca Nieves Carrillo
Martha Wilches Torres
Bioprocesos
Programa de Ingeniera
Qumica
1 Universidad del Atlntico
Viernes, 7 de Nov. del 2014

CONTENIDO
CROMATOGRAFA
MIGRACIN

DIFERENCIAL
NATURALEZA DE LA FASE MVIL
MTODOS CROMATOGRFICOS PREPARATIVOS
ZONA DE DISPERSIN
PLATOS TERICOS
RESOLUCIN
ESCALADO EN CROMATOGRAFA

CROMATOGRAFA
Es la separacin de una
mezcla de dos o ms
compuestos
por
distribucin entre dos
fases, una de las cuales
es estacionaria y la otra
una fase mvil.

MIGRACIN DIFERENCIAL
Es el retardo selectivo de las molculas de soluto
durante su paso a travs de lecho de partculas de
resina.

CAUSAS DE LA MIGRACIN DIFERENCIAL

MIGRACIN DIFERENCIAL DE DOS

SOLUTOS (A y B)

PARMETROS DE CARECTIZACIN DE
LA MIGRACIN DIFERENCIAL
Factor de capacidad, K

Selectividad

o retencin relativa,

Volumen

total,

Volumen

(2)

(3)

de eluyente,

(4)

Coeficiente

de reparto del gel,

Volumen

(5)

interno de lquido, para slido seco

Volumen

(6)

interno de lquido, para slido hmedo

NATURALEZA DE LA FASE MOVIL

CARACTERSITCAS DE LOS TIPOS DE

CROMATOGRAFA

10

MTODOS CROMATOGRFICOS
PREPARATIVOS
Tipo de
Cromatografa

Fase estacionaria

Principio que
aplica

Cromatografa de
adsorcin.

Slido adsorbente.

Adsorcin.

Cromatografa de
reparto.

Ligandos orgnicos
unidos al soporte.

Reparto entre el
lquido y la fase
enlazada.

Cromatografa de
intercambio inico.

Resinas cargadas.

Intercambio inico.

Cromatografa de
gel.

Lquido en el interior Filtracin por

de los poros de un
tamao.
slido polmero (gel).

Cromatografa de
afinidad.

Ligando inmovilizado Unin reversible

en la matriz.
entre la
macromolcula de
inters y un ligando
especfico.

11

Cromatografa de adsorcin
Se caracteriza por utilizar una fase estacionaria
slida (Adsorbente) de carcter polar y una fase
mvil lquida (Eluyente) apolar.
Su limitacin ms importante la dificultad de separar
sustancias de polaridad parecida.

12

13

Cromatografa de reparto.
Se basa en la diferente distribucin del soluto entre
dos disolventes inmiscibles entre s.
Cromatografa en fase normal: Fase estacionara ms
polar que la fase mvil.
Cromatografa en fase reversa:
menos polar que la fase mvil.

Fase estacionaria

14

Cromatografa de intercambio inico.

La base de la separacin en este mtodo es la atraccin

electrosttica existente entre el soluto y densos
aglomerados de grupos cargados elctricamente en el
relleno de la columna.

15

Aplicaciones:
Purificacin de protenas de diferente tamao, actividad biolgica,
localizacin (intra y extracelular) a partir de diversas fuentes. Ej.
obtencin de antitripsina (plasma humano), purificacin de catalasa.

16

Cromatografa de gel.
Las molculas de la solucin se separan en una columna
empaquetada con partculas de gel de una determinada
porosidad. Los geles ms utilizados son los dextranos
entrecruzados, las agarosas y los geles de poliacrilamida.

17

Aplicaciones:
-separacin de grupos o desalado (tiempos ms cortos que dilisis),
-fraccionamiento de mezclas proteicas en etapas finales de
purificacin
-determinacin de pesos moleculares

Cromatografa de afinidad.
Se basa en la especificidad de
enlaces de la biomolculas.
Aplicaciones:
Identificacin,
separacin
y
purificacin
de
diferentes
molculas:
enzimas,
anticuerpos, antgenos, etc.

18

ZONA DE DISPERSIN
Difusin axial.
La difusin axial ocurre a lo largo de la longitud del tubo del
lugar de mayor concentracin a menor concentracin.

Difusin turbulenta.
El movimiento diferente de material debido a
variaciones errticas locales en la velocidad de flujo.

las

Efectos de la no existencia de equilibrios locales.

Es el factor ms importante que afecta la zona de
dispersin.

19

ZONA DE DISPERSIN EN UNA

COLUMNA CROMATOGRFICA

20

PLATOS TERICOS
Se utilizan para analizar el ensanchamiento de la
zona de dispersin.
Altura de plato equivalente terico, HETP

Nmero de platos tericos

21

RESOLUCIN

22

23

24

25

ESCALADO EN CROMATOGRAFA
Se utiliza para mantener la resolucin y la
recuperacin del soluto alcanzado durante la
operacin a pequea escala, pero aumentando la
capacidad del material tratado.
Las estrategias para el cambio de escala deben
considerar
los
efectos
dominantes
de
la
transferencia de materia en las separaciones
cromatogrficas.

26

CRITERIOS DURANTE EL ESCALADO

27

Ejemplo: Separacin de hormonas mediante

cromatografa de gel.
Para separar dos hormonas A y B se utiliza una columna de
cromatografa de gel a escala piloto empacada con resina
Spephacryl. La columna tiene 5 cm de dimetro y 0,3 m de
altura. El volumen hueco es 1,9 x10-4 m3. El valor de
ganancia de agua de gel e 3x10-3m3Kg-1 Spephacryl seco. La
densidad de gel hmedo es 1,25x103Kgm-3. El coeficiente de
reparto de la hormona A es 0,38 y el de la hormona B es
0,15. Si el caudal de eluyente es 0,71 h-1, Cul es el tiempo
de retencin para cada hormona?

28

El

volumen total de la columna es:

entonces:

29

Los tiempos asociados con estos volmenes de

elucin son:

30

GRACIAS
THANKS

MERCI
DANKE
GRAZIE