Structure et croissance

bactrienne
Relations htes - bactries
L3
2012-2013

Introduction - Dfinition dune bactrie

Etre unicellulaire de petite taille (microorganisme, micron) qui prsente des caractristiques propres (Procaryote).
1 micron (1m) = 10-6m
Taille : variable: 1m x 2-5m en gnral
les plus petites : 0.3-0.8m (Chlamydia, Rickettsia)
la plus grande : 60 x 800m (Epulopiscium fishelsoni)

Tableau 1: Quelques caractres distinctifs des procaryotes et eucaryotes

Caractristiques

Procaryote

Eucaryote

Taille habituelle

0,3 2,5 m

2 20 m

Noyau avec membrane

Nombre de chromosomes

>1

Rplication par mitose

Position de lADN

Nuclotide ou plasmides

Noyau et certains organites

intra

Prsence dorganites intra

Aucun

Habituellement prsents
(mitochondries, app. De Golgi)

Chap. I : Anatomie des bactries

A - Mthodes dtude
Compte tenu de leur taille (de l'ordre du micron), elles seront visualises par le

microscope

1 - microscopie optique fond clair (G x 1000 -1500 fois)

La prsence de bactries est habituellement recherche
avec un microscope optique sans coloration (tat frais) ou aprs coloration.
- tat frais : cytologie et bactries x 40

- aprs coloration
ralisation dun frottis mince, schage, fixation et coloration.
* Bleu de mthylne
pr la cytologie
les cellules et les bactries
st colores en bleu
pus urtral avec
diplocoques phagocyts

* MGG (May Grnwald Giemsa)

pr la cytologie surtt

pneumocoques (capsule)

* coloration de Gram
= LA coloration des bactries
permet dindividualiser les bactries Gram positif (violettes)
des bactries Gram ngatif (roses)
principe : cf chaptre sur la paroi.

*coloration de Ziehl-Neelsen
spcifique des Mycobactries.
mise en vidence des Bacilles Acido-Alcoolo-Rsistants =
BAAR
Les bacilles retiennent le colorant malgr l'action combine
de l'acide dilu et de l'alcool. Ils apparaissent comme des
fins btonnets rouges

2 - microscopie optique fond noir

permet d'amliorer le contraste d'chantillons transparents
image de points ou traits trs lumineux
ex : Treponema pallidum, agent de la syphilis

3 - microscopie optique fluorescence

utisation dun fluorochrome pour
la mise en vidence de bactries
ou danticorps.
ex : inclusions de Chlamydia trachomatis

4 - microscopie lectronique (G x >10.000 fois)

Pseudomonas aeruginosa

B - Structure gnrale dune bactrie

Professeur A. PHILIPPON (Facult de Mdecine COCHIN-PORT-ROYAL, Universit PARIS V )

Campus de Microbiologie mdicale

Structures obligatoires :
- Paroi (sf chez Mollicutes)
- membrane cytoplasmique
- Cytoplasme (ribosomes)
- appareil nuclaire

Enveloppe
Enveloppe
intracytoplasmique
information gntique

Structures facultatives :
- capsule
- inclusions intracytoplasmiques
- plasmides
- flagelles
- pili et fimbriae

Enveloppe
intracytoplasmique
information gntique
appendices filamenteux
appendices filamenteux

10

1- les enveloppes
1-1 La capsule
*inconstante.
*excrte par certaines bactries.
*mise en vidence par coloration ngative.

Pneumocoque (Gram)

C. neoformans (encre de Chine)

*constitue de polysaccharides acides.

*rle : empche la phagocytose virulence des bactries.
rle important ds le pouvoir pathogne de certaines espces.
11

*antignique formation danticorps protecteurs

utilisation des polymres capsulaires purifis comme base de
certains vaccins : Streptococcus pneumoniae, Haemophilus
influenzae.
* peut se trouver l'tat soluble dans les liquides de l'organisme
emploi dans le diagnostic = recherche d'antigne soluble.
* intervient dans l'identification infra-spcifique = typage = une des
mthodes dinvestigation des pidmies.
* des mutations peuvent affecter sa production :
les bactries sauvages capsules donnent
des colonies lisses (S pour smooth ) ou
muqueuses, tandis que les bactries
mutantes non capsules donnent des
colonies rugueuses (R pour rough ).
12

1-2 : la paroi
Dfinition : enveloppe rigide assurant l'intgrit de la bactrie,
responsable de la forme des cellules.
Elle protge des variations de pression osmotique (mer).
Elle est absente chez les Mollicutes (Mycoplasma).
En dehors de bactries halophiles ou thermophiles, la partie
commune toutes les parois bactriennes est le peptidoglycane,
enveloppe la plus interne.
1-2-1 : le peptidoglycane
* macromolcule rticule faite de chanes polysaccharides et de
pentapeptides relis entre eux.
* biosynthse en 3 tapes (ractions de transglycolisation et de
transpeptidation). Certaines tapes peuvent tre entraves par
certains antibiotiques: -lactamines, glycopeptides (cf antibiotiques)
ou encore enzyme (lysozyme).

13

Peptidoglycane de
Gram ngatif

Peptidoglycane de
Gram positif

14

1-2-2 : paroi des bactries Gram positif

* paroi paisse, daspect homogne.
* principal constituant = peptidoglycane associ divers
constituants (protines, polysaccharides, acides techoiques
((= antignes importants)).
1-2-3 : paroi des bactries Gram ngatif
* structure complexe
* couche mince de peptidoglycane
* lextrieur : la membrane externe comporte :
** des lipopolysaccharides (LPS) avec un lipide A
(toxique) + 1 partie polysaccharidique externe qui
porte les antignes O.
** des protines formant des canaux (porines).
* espace priplasmique : peut contenir des enzymes
inactivant certains ATB.
15

Structure bactrie Gram positif ( gauche) / Gram ngatif ( droite).

16

1-2-4 : paroi des Mycobactries

peptidoglycane important recouvert de lipides complexes
(acides mycoliques et cires) lis des polysaccharides et
des protines.

17

1-2- 5 : proprits de la paroi

a - elle dtermine la forme des bactries :
2 types principaux de morphologie :
sphrique = cocci (diplocoques, chanettes, amas)

en btonnets = bacilles ( courts ou longs, rguliers ou non, fusiformes,

incurvs)

18

b - coloration de Gram
3 tapes :
- coloration par le violet de gentiane
action combine du violet de gentiane et du Lugol
(=mordanceur) le cytoplasme de ttes les bies est color
en violet
- dcoloration par lalcool :
# de structure paroi Gram +/ Gram - permabilit des bies
Gram - l'alcool permet la dcoloration bies Gram
st incolores, les bies Gram + restent colores en violet ou
mauve.
- contre-coloration par la Fuschine :
permet de visualiser nouveau, les corps cellulaires des
bactries Gram ngatif en rose.
L'intrt de cette coloration est de donner une information rapide et
mdicalement importante.
19

Forme de la bactrie + coloration de GRAM classification des bactries en

Cocci Gram positif

Cocci Gram ngatif

Bacilles Gram positif

Bacilles Gram ngatif

20

c rle dans lantignicit

Ag O des BGN
apparition danticorps spcifiques chez lhomme srodiagnostic
dfinition de srogroupes, srotypes ou srovars
pidmiologie

d rcepteurs de bactriophages
lysotypes pidmiologie
e action de certains ATB
-lactamines, glycopeptides, fosfomycine.

21

1-3 : la membrane plasmique

* = interface entre cytoplasme et structures externes.
* membrane trilamellaire forme de phospholipides dont
les ples hydrophobes sont face face, entourant des
protines (permases, enzymes respiratoires, PLP =
Protines de Liaison aux Pnicillines jouent 1 rle ds la du
peptidoglycane)
GRAM +

GRAM
(selon V. JARLIER)

22

* les flagelles st fixs ce niveau

* polymyxines et antiseptiques la dtruisent
Pales fonctions :

* permabilit slective et transport actif des substances

solubles l'intrieur de la bactrie.
* fonction respiratoire par transport d'lectrons et
phosphorylation oxydative
* support d'enzymes et de transporteurs de molcules
impliqus dans la biosynthse de l'ADN, des polymres de la
paroi et des lipides membranaires.
* excrtion d'enzymes hydrolytiques, qui dgradent les
polymres en sous-units suffisamment petites pour pouvoir
traverser la membrane cytoplasmique et tre imports dans
la bactrie.

23

2- le cytoplasme
= gel collodal, qui contient 80 % d'eau et des substances
organiques et minrales, une pression interne considrable
(5 20 atmosphres).
* + simple que les Eucaryotes.
* pas de mitochondries
* trs riche en ARN soluble, surtt ribosomal :
environ 15000 ribosomes/bie 40% du pds sec et
90% de lARN total.
* les ribosomes st constitus de protines et d'ARN
(ARNr16S, ARNr23S et ARNr5S).
Ils sont classiquement diviss en 2 sous-units :
- la sous-unit 30S contient de l'ARNr16S et est la
cible des aminosides et des cyclines ;
- la sous-unit 50S est constitue d'ARNr23S et est
la cible des macrolides et apparents.

24

3 : lADN bactrien
3-1 : lappareil nuclaire
* = support de linformation gntique
dble hlice dADN circulaire
dpli 1000 fois la longueur de la bie
* = ADN 80 % (le chromosome)
+ ARN 10 % (rle de structuration)
+ protines 10 % (ADN polymrases + topoisomrases surtt
ADN gyrases)
action de plusieurs antibiotiques : les quinolones inhibent les topoisomrases et les
rifamycines inhibent les ARN polymrases, tandis que les nitromidazols entranent
la fragmentation de l'ADN chez les anarobies stricts.

25

3-2 : lADN extrachromosomique

lments gntiques (ADN) de petite taille (0,5 5 % du chromosome
bactrien), extra-chromosomiques = plasmides (lments incsts).
Les + connus :
* le facteur sexuel ou facteur F : assure le transfert de
fragments de chromosome bactrien par conjugaison.
* les plasmides de rsistance aux ATB (facteurs R)
La R peut concerner plusieurs ATB # R par mutation.
La R code par les gnes plasmidiques est svt lie la
production denzyme qui inactivent les ATB.
* les autres plasmides : responsables de la virulence (ex :
production de toxines), R aux ATS, dgradation de cert.
substances..

26

4 - Les flagelles
4 types de ciliature
* monotriche : 1 seul flagelle polaire
(dplacement en flche)
Pseudomonas aeruginosa
* lophotriche : plusieurs flagelles
polaires (dplacement flchant
+ oscillant)
Stenotrophomonas maltophilia
* amphitriche : 1 flagelle chaque ple
(dplacement oscillant)
* pritriche : flagelles entourant la bie
(dplacement flchant hlicodal)
Entrobactries (E. coli, Proteus,)
les spirochtes ont un flagelle interne dnomm filament axial

27

Structure des flagelles :

complexe
dans le filament : nbx monomres
d1 seule protine = la flagelline

les flagelles Ag H bactrien.

28

Rle des flagelles :

- mobilit
- chimiotactisme
- ds le diagnostic et la classification.(Ag H)
5 - Les pili ou fimbriae (incsts)
= Appendices se situant la surface de la paroi de nbx BGN (et
exceptionnellement chez les BGP), + courts et + fins que les flagelles.
- pili communs
2 3000/bie
rle ds ladhsion de cert. bies
(gonocoque, Salmonella)
- pili sexuels
3 5 /bie
rle essentiel ds la conjugaison
29

6 - La spore bactrienne

= forme de survie de certaines bies,

mtaboliquement inactive et non pathogne
/ forme vgtative mtaboliquement active et potentiellement pathogne.
.
.

la sporulation = forme vgtative spore

Temps : 6 8 heures 37C pour Bacillus subtilis.
Conditions : dclenche par des modifications de l'environnement tel
puisement en matires nutritives.
. Etapes : dshydratation progressive du cytoplasme, densification
des structures nuclaires et synthse d'une paroi sporale
paisse et impermable, donc hautement rsistante (chaleur).
La spore intra-bactrienne ou endospore est libre dans le milieu
extrieur et y survit des annes.
La germination = spore forme vgtative qd conditions redevenues
favorables (nutritives, thermiques et chimiques).
30

Proprits de la spore :
Rsistance la chaleur, aux radiations, au temps, aux fortes pressions.
* La spore peut tre : * ronde ou ovale
* centrale, subterminale ou terminale
* dformante ou non
intrt taxonomique +++
exemples :

B. anthracis spore ovale, centrale, non dformante

C.tetani (spore ovale, terminale, dformante)

* Intrt mdical +++

* botulisme (conserves familiales)
* ttanos ( plaies souilles de terre)
* charbon

31

Chap.II : Physiologie et croissance

Rf : Anne-Laure Michon-Laboratoire Bactriologie- Hpital Arnaud de Villeneuve Montpellier

Professeur R. Courcol (Facult de Mdecine- Universit Lille 2)

32

1 Besoins nutritifs choix des milieux de culture

Bactries :organismes vivants devant trouver dans lenvironnement les
substances ncessaires leur nergie et leurs synthses cellulaires.
1-1 : source dnergie.
lumire, composs minraux ou organiques.
1-2 : source de carbone.
CO2 ou substances hydrocarbones (alcool, sucres,)
1-3 : source dazote, besoins en soufre, en phosphore.
1-4 :autres.
sodium, potassium, oligo-lments, vitamines, facteurs de
croissance spcifiques.
33

2 Conditions environnementales choix de la temprature et de

latmosphre dincubation.
2-1 : la temprature
bactries msophiles: 10-45C optimum 30-37C,

psychrophiles : -15C 20C (5-10C)

thermophiles (45-70C)
hyperthermophiles (>80C)

2-2 : le Ph
bactries neutrophiles(6-8) Escherichia coli
alcalinophiles (> 8) Pseudomonas
acidophiles (< 6) Lactobacillus

34

2-3 : loxygne molculaire : mode respiratoire des bactries

1 bactrie arobie stricte

ex : Pseudomonas, Neisseria
2 bactrie microarophile
ex : Campylobacter
3 bactrie aro-anarobie
facultative = AAF
ex : Entrobactries
4 bactrie anarobie stricte
ex : Clostridium

35

atmosphre normale
tuve 37C

atmosphres particulires

tuve CO2 sachets et jarres (anarobiose et microarophilie

36

3 Division bactrienne
Croissance bactrienne = accroissement ordonn et coordonn de tous les
composants de la bactrie
du nombre des bactries
appauvrissement du milieu de culture en nutriments
enrichissement du milieu en sous-produits du mtabolisme
Division bactrienne : les bactries (organismes asexus) se multiplient par fission
binaire (= scissiparit)
* Allongement de la bactrie,
* Duplication des constituants,
* Sparation

37

Division bactrienne

38

Dlais de croissance
selon la bactrie et les conditions du milieu extrieur

Rf : Site de Microbiologie Mdicale. Professeur R. Courcol (Facult de Mdecine- Universit Lille 2)

conditionne le dlai de lanalyse et donc du rendu des rsultats.

ex : tps de gnration E.coli = 20mn culture en 18 h
tps de gnration M.tuberculosis = 24-48h culture en 3 sem.

39

4 - Dynamique de la croissance
4- 1 - Courbe de croissance :
studie en milieu liquide

1 : phase de latence,
2 : phase de croissance
exponentielle,
3 : phase de ralentissement,
4 : phase stationnaire,
5 : phase de dclin.

Ex. d'une courbe de croissance

40

4- 2 : Croissance in vitro (milieux liquides et solides)

4-2-1 : milieux liquides (pr enrichir)
Ex : culture d'une bactrie dans un bouillon nutritif ou encore partir du sang
d'un malade (hmoculture en flacon)

41

4-2-2 : milieux solides ou semi-solides, base d'agar

(glose) (pr l'isolement de bactries)

ex : ensemencement d1glose au sang colonies hmolytiques.

1 colonie = ensemble de bactries filles issues d1 bactrie mre par division binaire
= 1 clone
colonies S (smooth), R (rough), M (muqueuses).
42

Chap.III : Relations htes- bactries

43

I Diffrents types de bactries

I-1 Bactries saprophytes
* Dfinitions :
saprophytisme = forme de nutrition permettant un organisme
dutiliser des matires organiques en dcomposition.
bactrie saprophyte = bactrie qui vit et se nourrit dans
lenvironnement (sol, eaux, surfaces)
* Proprits
* strictement indpendantes de lhomme
* peuvent tre retrouves transitoirement sur la peau et les
muqueuses
*Inoffensives mme si certaines espces trouvent chez lhomme44
des
conditions de croissance favorables.

I-2 Bactries commensales

* Dfinitions :
Commensalisme : type dassociation conduisant 2 espces
dorganismes vivre ensemble, sans que lune nuise lautre, et o
parfois lune des espces se procure de la nourriture, une protection
ou dautres avantages.
Bactrie commensale : bactrie qui vit, de faon persistante, au
contact du revtement cutano -muqueux dun hte sans entraner de
dsordres flores commensales
* Proprits
* quilibre des flores
* effet de barrire : sopposent limplantation des bactries
pathognes.
45

I-3 Bactries pathognes

provoquent chez lhomme une MALADIE
I-3-1 : Bactries pathognes spcifiques = BPS maladie
cliniquement et physiopathologiquement dfinie.
III-1-1 : BPS obligatoires
st incapables de se en dehors d1 foyer infectieux
ex : gonocoque, BK, trponme de la syphilis, Brucella

III-1-2 : BPS facultatives

pvt se dvelopper ds la nature, sur la peau et les muqueuses
de lhomme et des animaux, chez les porteurs sains.

46

I-3-2 : Bactries pathognes opportunistes = BPO

= bies qui ne peuvent exprimer 1 rel pouvoir pathogne que lors d1
dficience de lhte ou si modification importante de leur
environnement.
I-3-3 : Pouvoir pathogne et virulence
* Le pouvoir pathogne conditionne le type de maladie;
il dpend de l'espce bactrienne responsable de l'infection.
ex : le cholra (agent = Vibrio cholerae ) est une maladie
compltement diffrente de la mningite mningocoque.
* virulence : pour un mme pouvoir pathogne, il peut y avoir des
souches virulentes.
ex: S. dysenteriae et S. flexneri ttes les 2 la dysenterie
bacillaire, mais pas avec les mmes doses.
Qq bactries suffisent pour dvelopper une infection avec
S.dysenteriae alors que plusieurs milliers sont ncessaires avec S.
flexneri. S. flexneri est donc moins virulente que S.dysenteriae.

La virulence est une notion quantitative alors que le pouvoir

pathogne est une notion qualitative.
47

II : Physiopathologie de linfection
II 1 : modes de transmission

*Transmission directe : contamination par contact

avec le rservoir (contact direct avec individu ou
animal infect)
* Transmission indirecte : contamination par
lintermdiaire dobjet infect, aliment contamin,
eau, Notion de survie possible de la bactrie dans
lenvironnement pendant un certain dlai.
* Transmission horizontale (contamination interhumaine)
verticale (in utero).

48

II-2 : voies de contamination

= porte dentre de la bactrie
* voie digestive : ingestion deau ou aliments souills
(ex : cholra, typhode)
* voie respiratoire : inhalation darosols contamins
(ex : lgionellose, coqueluche)
* voie cutane : inoculation par contact (plaie souille)
(ex : ttanos, surinfections de plaie)
* voie transcutane : inoculation iatrogne (injection,
cathter) ou par piqre dinsecte vecteur de
bactries (ex : peste, maladie de Lyme)
* voie sexuelle : maladies sexuellement transmissibles
(ex : syphilis, urthrite gonococcique ou Chlamydia
trachomatis)

49

II-3 :tapes du processus infectieux

1re tape : colonisation = implantation des bactries sur
le revtement cutano-muqueux; dpend de ladhsion
2me tape : invasion infection localise (ex : IU,
pneumonie)
3me tape possible : dissmination par voie sanguine
(bactrimie) ou lymphatique; peut localisations 2aires =
mtastases septiques (ex : endocardites, ostites).

Le pouvoir pathogne des bactries repose sur :

* des facteurs de pathognicit permettant la
multiplication bactrienne
* la scrtion de toxines (agissant distance)

50

II- 4 : facteurs de pathognicit

* adhsion :
adhsines = prot. de S, pili, composants de la paroi (ac.
lipoteichoiques)
* R phagocytose :
capsule ( Pneumocoque), cires (BK)
* persistance ds les cellules par :
- inhibition de la fusion phago-lysosomiale (Legionelles, Chlamydia)
- inhibition de l'acidification du phagosome (BK)
- dveloppement dans le phagolysosome (Salmonella, Coxiella)
- lyse de la membrane vacuolaire et multiplication dans le cytoplasme
(Listeria)

51

* Diffusion dans l'organisme

production d'enzymes facilite la diffusion des bactries :
- collagnases (Clostridium perfringens)
- hyaluronidase (staphylocoques, streptocoques)
dissociation du tissu conjonctif
- coagulase (staphylocoque dor) thrombophlbite
- kinases ou fibrinolysines (Staphylocoques,
streptocoques) embols septiques

52

II- 5 : toxines bactriennes

- 2 types de toxines bactriennes
- endotoxines: lipopolysaccharides, associs l'enveloppe
des BGN, librs des bactries en train de se diviser ou
lyses par la rponse cellulaire (lysozyme).
- exotoxines: protines extracellulaires, scrtes ou
injectes (dans qq cas, libres lors lyse bact).
- La production d'une toxine est spcifique d'une espce
bactrienne qui produit une pathologie qui lui est associe
- Clostridium tetani toxine ttanique
- Corynebacterium diphteriae toxine diphtrique
- Bordetella pertussis toxine pertussique (coqueluche)

53

II - 5 -1 :
endotoxines = toxines glucido-lipido-protques LPS
LPS= constituant de la mb externe des b ies

Les chanes latrales sont des sucres de nature et de squence

propres la
bactrie (ce sont les antignes O). Elles sont fixes un noyau central (le noyau ou
"core").
Le lipide A est le support de la toxicit de la molcule : il ne peut se dtacher de la
54
bactrie qu'au moment de la lyse (d'o le terme d'endotoxine)

action essentielle = activation du macrophage qui libre l'ensemble

des cytokines de l'inflammation : TNF, IL1 et IL6.
activation du complment, du systme de coag. CIVD
responsable de la majorit des chocs septiques.
II - 5 -2 :exotoxines = toxines protques.
scrtes ou libres lors de la lyse bactrienne.
vont agir sur un site cellulaire prcis.
sont thermolabiles.
toxicit spcifique, dintensit considrable.
Les doses minimales ltales (DML) par voie parentrale schelonnent
entre 2x10-5 mg (toxine botulinique) et 1 5 mg.
neurotoxine botulinique = poison le plus violent dans la nature.
activit inhibe par des anticorps spcifiques (antitoxines)
utilisation pour le ttt si toxine pas encore fixe sur son rcepteur =
srothrapie.
transformable en anatoxine par action du formol et de la chaleur
(non toxique, antignique) vaccins
55

II- 4 : moyens de dfense de lhte contre linfection bactrienne

II-4-1 barrires anatomiques
* peau : infranchissable (qq exceptions)
infection si : lsion cutane, introduction de matriel
tranger.
* muqueuses = barrire moins tanche ms scrtion de
lysozyme, pH acide (estomac, vagin), flores commensales.
II-4-2 raction inflammatoire - immunit inne
permet llimination du microorganisme lorsqu'il se trouve
dans un tissu habituellement strile.
Recrutement des phagocytes + extravasation des
protines de linflammation

56

** acteurs de l'immunit inne

- Le complment
l'activation du complment bactriolyse, opsonisation et
chimiotactisme (C3a, C5a)
- Les cellules phagocytaires: 2 types
* les polynuclaires
* les macrophages
** composants bactriens qui activent l'immunit inne
- lipide A du lipopolysaccharide des bactries Gram-ngatif
- peptidoglycane
- acide lipotichoque des bactries Gram-positif
- lipoarabinamananne des mycobactries

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II-4-3immunit acquise
* ncessite plusieurs jours pour se dvelopper
* repose sur les lymphocytes B production danticorps et
les lymphocytes T immunit de type cellulaire
* Ac : effets opsonisant, neutralisant et bactricide.
* lymphos T (CD4 et 8) hypersensibilit retarde (HSR)
* Immunit locale : IgA scrtoires (muqueuses resp. et
digestive)

* Rponse immunitaire secondaire : second contact avec

une bactrie dj rencontre une rponse plus rapide et
plus importante.

(voir cours immunologie)

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