UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLNICO
MUTAGNESIS DE ADN CLONADOS
INTEGRANTES:
PARRALES GUILLEN AIDEE
CANTOS VERGARA FERNANDA
BRAVO ZAMBRANO JOSUE
CEDEO CEDEO MOISS
CHABLA ESPINALES BRYAN
MUSSO MUSO ALEXANDRA
CEVALLOS MORA DIEGO
BERMELLO LPEZ BRYAN

PALABRAS CLAVES

Gentica inversa
Mutacin
Genes clonados
Gen diana
Interferencia
Homlogos

GLOSARIO
Mutagnesis.- engentica se denominaMutagnesisa la produccin demutaciones sobreADN,clonado o no.
deleciones.- es un tipo especial deanomala estructural cromosmica que consiste en la prdida de un fragmento deADN de uncromosoma.
dicer

Es una ribonucleasa miembro de la familia de las ARNasa III es una gran protena (>200 kd) monomrica presente en el citoplasma celular. dicer cataliza el
primer paso del mecanismo de rnai corta ARN doble banda.
siARN
Son las siglas en ingls de small interfering rna. es una clase de ARN bicatenario. es un tipo de arn interferente con una longitud de 20 a 25 nucletidos que es
altamente especfico para la secuencia de nucletidos de su ARN mensajero diana, interfiriendo por ello con la expresin del gen respectivo.
Caenorhabditis elegans
Es una especie de nematodo rabdtido familia rhabditidae que mide aproximadamente 1 mm de longitud, y vive en ambientes templados. ha sido un importante
modelo de estudio para la biologa, muy especialmente la gentica del desarrollo, a partir de los aos 70.
Drosophil
Es un gnero de moscas pequeas, perteneciente a la familia drosophilidae, cuyos miembros se llaman frecuentemente moscas de la fruta, o, ms
adecuadamente aunque con menos frecuencia, moscas del vinagre, en referencia a la caracterstica de muchas especies de permanecer cerca de fruta madura o
podrida
Arabidopsis
Es un gnero de plantas herbceas de la familia de las brasicceas, que han sido objeto de intenso estudio en poca reciente como modelos para la investigacin
fitobiolgica. arabidopsis thaliana fue la primera planta cuyo genoma se secuenci por entero.

MUTAGNESIS DE ADN CLONADOS

En los estudios genticos clsicos, la

clave para identificar los genes y
entender su funcin es la observacin del
fenotipo alterado de los organismo
mutantes.
En dichos estudios los genes mutantes
son detectados porque producen
cambios fenotpicos observables.
El aislamiento de genes por tcnicas de ADN
recombinante ha permitido un enfoque
diferente de la Mutagnesis

Ahora es posible introducir la alteracin que se desee en un gen

clonado y determinar el efecto de la mutacin en funcin de los
genes

Dichos procedimientos han

gentica inversa, dado que
introduce una mutacin
posteriormente
se
consecuencia.
La capacidad de introducir mutaciones especificas
en ADN clonados ha demostrado ser una poderosa
herramienta en el estudio de la expresin y funcin
de los eucariticos

sido denominados
el primer lugar se
en un gen y
determina
su

Un mtodo habitual
es el uso de
oliogonucletidos
sintticos

La Mutagnesis in vitro ha permitido la caracterizacin en

detalle del papel funcional tanto de las secuencias
reguladoras como de las codificaciones para protenas de
los genes clonados.

-En clulas animales la recombinacin entre

el ADN transferido y su gen homologo es
un hecho poco frecuente.
-La inactivacin de genes por este mtodo
es mas difcil que en levaduras,
probablemente a causa del mayor tamao
de los genomas de las clulas en mamferos.

-Ha sido posible desarrollar mtodos tanto

para aumentar la frecuencia de la
recombinacin homologa como para
seleccionar y aislar las clulas transformadas
en las cuales se ha producido recombinacin
homologa, por lo que se puede inactivar
genes en clulas animales por este
procedimiento.

ES IMPORTANTE
RESALTAR QUE:
Estos genes pueden ser inactivados en las clulas madre
embrionarias en el ratn, y estas pueden usarse despus para
generar ratones transgnicos.
Estos ratones pueden criarse y generar progenie que
contiene copias mutadas del gen diana en ambos
cromosomas homlogos.
Adicionalmente, pueden cultivarse las clulas obtenidas a partir de
embriones de ratn y que contienen copias del gen mutado, de
modo que pueden estudiarse las funciones de genes diana en el
cultivo celular
Las actividades biolgicas de alrededor de 5.000 genes de
ratn han sido investigadas de este modo, y dichos estudios
han sido de importancia critica para el descubrimiento del
papel de muchos genes en el desarrollo del ratn.

INTERFERENCIA CON LA EXPRESIN

Un mtodo que se ha empleado
para inhibir la expresin de un gen
diana deseado es la introduccin de
cidos nucleicos antisentido en
clulas de cultivo.
ARN
o
ADN
monocatenario
complementario al ARNm del gen de
inters (antisentido) hibrida con el
ARNm y bloquea la traduccin de la
protena. Adicionalmente, los hbridos
ARN

ADN
resultantes
de
la
introduccin de molculas de ADN
antisentido
generalmente
son
degradados en el interior celular. Los
ARN antisentido pueden introducirse
directamente en las clulas o las clulas
pueden ser transfectadas con vectores
que han sido diseadas para expresar el
ARN antisentido.

GNICA CELULAR

Cuando los ARN de doble hebra son introducidos en la

clula son escindidos en pequeos molculas de doble hebra
por una enzima denominada Dicer. Esta molcula se asocia
con un complejo protenas conocido como el complejo
silenciador inducido por ARN

Dentro de este complejo , las 2 hebras del siARN se separan

por la hebra de ARNm (hebra anti sentido) gua al complejo
hacia la diana de ARNm como consecuencia de la
complementariedad de bases

El ARN es incidido por una protena del RISC. El

complejo de RISC siARN es librado despus de
la degradacin de ARNm y puede continuar con
su participacin en mltiples ciclos de
degradacin de ARNm, dando lugar a una
eficiente destruccin del ARN diana.

Adicionalmente se estn empleando bibliotecas de ARN

bicantenarias o si ARN( ARN de silenciamiento) que cubren
una gran parte de los genes del genoma
Funciones biolgicas especificas como el crecimiento o
la supervivencia celular

La interferencia por ARN es tambin

uno de los principales mecanismos de
regulacin empleados por clulas para
controlar la expresin gentica

Inactivan un gen y inducen la degradacin de un ARNm que

interfiere directamente con la funcin de las protenas en el
interior celular

Ser empleados
para estudiar los
efectos de
bloquear la
funcin gentica
normal

Los ADN clonados que codifican tales

protenas mutantes pueden
introducirse en las clulas mediante
transferencia genticas

Frente a la que estn dirigidas