Anda di halaman 1dari 35

UNIVERSIDAD POLITCNICA

METROPOLITANA DE PUEBLA.
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA
4 CUATRIMESTRE

TCNICAS DE AISLAMIENTO,
IDENTIFICACIN, CONSERVACIN Y
PROPAGACIN DE MICROORGANISMOS.

Bacillus cereus
Integrantes de equipo:
Castrejn Aguilar Adriana V.
Islas Alvarado Wendy
Santos Miranda Ingrid
Vicente Jimnez Arely

OBJETIVO

Aislar el microorganismo de inters a partir de una


muestra propuesta

Emplear tcnicas bioqumicas y microscpicas para


identificar microorganismos

Conservar cepas del microorganismo de inters

Bacillus cereus

Es una bacteria Gram-Positiva.

Tiene forma de bastn alargado.

Esporuladoaerobiooanaerobio facultativo, mvil.

La espora es ovoidea.

Su pH ptimo 4.5 a 9.3

Aw 0.95

Concentracin de sal 7.5%.

Temperaturas de crecimiento
Mnima

estn entre 15C a 20C

Mxima

es entre 40C a 45C

Temperatura
Son

ptima de 37C

saprfitos.

Su

ambiente natural es en suelos de todo


tipo, y puede ser encontrado en el polvo y en
el
aire.
Los
alimentos
secos
como
condimentos, leche en polvo y harinas
pueden estar contaminadas con esporas.

Tipos de toxiinfecciones

El B. Cereus provoca dos tipos:

1) Forma diarreica: Producida


diarreognica o termolbil.

2) Forma emtica: Causada por la ingestin de la


toxina cereulida.

por

la

toxina

NORMA

Oficial Mexicana NOM-247-SSA1-2008,


Productos y servicios. Cereales y sus productos.
Cereales, harinas de cereales, smolas o
semolinas. Alimentos a base de: cereales,
semillas comestibles, de harinas, smolas o
semolinas o sus mezclas. Productos de
panificacin. Disposiciones y especificaciones
sanitarias y nutrimentales. Mtodos de prueba.

Fsicas

Microbiolgicas

Materiales

Materiales

Material biolgico

Equipos

Matraz de 250ml

Harina de trigo inicio de


contaminacin !!!!!!

Incubadora

Mechero de bunsen

Agua peptonada

Balanza granataria

5 tubos de ensaye

Agar triptona extracto de


levadura fundido y enfriado a
45C

Frasco lechero
4 pipetas de 1ml
4 cajas Petri

Metodologa

Resultados

La harina no esta contaminada.

Discusin de resultados

El mtodo que seguimos.

La literatura propone otro mtodo.

Sembrar en sendas placas del medio de cultivo con 0,1 mL de las diluciones
decimales del alimento (comnmente 10-2 a 10-6) y extender el inculo con
una varilla de vidrio doblada en L. Incubar a 30C durante 24 hs. Si es
necesario incubar otras 24 hs.
AGAR MYP. Extracto de carne 1 g, peptona 10 g, D-manitol 10 g, cloruro de
sodio 10 g, rojo de fenol 0,025 g, agar 15 g, agua 900 mL. Distribuir en
porciones de 200 mL Esterilizar a 120C durante 20 minutos. Enfriar a 50C,
agregar 10 mL de la emulsin de yema de huevo y 2 mL de la solucin de
polimixina.

las colonias redondas, chatas, secas, de color rosado a violeta


pues no ha sido fermentado el manitol, rodeadas de un
precipitado causado por la actividad lecitinasa. Repicar 5
colonias en agar nutritivo e incubar a 30C durante 24 hs.
Colorear las preparaciones; observar el endosporo verde,
central a subterminal, que no deforma la clula y los glbulos
pseudolipdicos dentro del citoplasma teido de azul obscuro.

Bibliografa

Bacillus cereus http://


www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/8%20granos%20y%20harinas.p
df
recuperado 25 de marzo del 2015

NORMA Oficial Mexicana NOM-247-SSA1-2008, http://


depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasic-Diluciones_6526.pdf
recuperado el 25 de marzo del 2015

GRANOS y HARINAS http://


depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/NOMcereales_12434.pdf Recuperado el
25 de marzo del 2015

Preparacin y dilucin de muestras de alimentos para su anlisis


microbiolgico http://www.bvsops.org.uy/pdf/cereus.pdf Recuperado el 25 de
marzo del 2015

Escherichia coli

Salmonella

Nuestras
pruebas

Prueba bioqumica

Nuestras
pruebas

Gram (-)

Tincin de Gram

Gram (-)

Positivo (S/

Positivo

Agar TSI

Negativo

Positivo

Negativo

Positivo

Agar Urea

Negativo

+ (Gas)

Positivo

Caldo lactosado

Positivo

Positivo

Catalasa

Positivo

+/-

Negativo

Movilidad

Negativo

Positivo

Positivo

Hidrlisis de almidn

Positivo

Positivo

Teora
Gram (-)

Teora
Gram (-)

RESULTADOS

CALDO LACTOSADO
Se recomienda como prueba para investigar la presencia de
bacterias del grupo coliforme en agua y est indicado para el
preenriquecimiento
en
la
bsqueda
de
Salmonella.

CALDO
LACTOSADO
Produccin
de gas

Salmonella
E. coli

regresar

Agar TSI (Agar-hierro-triple azcar)


Empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido
sulfhdrico.

Si la bacteria problema fermenta la glucosa, lactosa y sacarosa acidificar el


medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras
que si no es fermentadora, el medio permanecer de color rojo.

Agar TSI (Agar-hierro-triple azcar)

Salmonella
E. coli

Regresar

AGAR UREA
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad
uresica, es decir bacterias que hidrolizan urea por medio de la enzima
ureasa liberando amonaco y dixido de carbono.

Prueba de Ureasa

Salmonella

E. coli

Regresar

PRUEBA
CATALASA

Escherichia coli

Objetivo: Determinar si la bacteria posee


la enzima catalasa.

Se agrego de 2 a 3 gotas de perxido de


hidrogeno.

Positivo: Efervescencia

Negativo: Ningn cambio

Salmonella

Objetivo: Determinar si la bacteria posee


la enzima catalasa.

Se agrego de 2 a 3 gotas de perxido de


hidrogeno.

Positivo: Efervescencia

Positivo: Ningn cambio

Regresar

PRUEBA
HIDROLISIS DE
ALMIDN

Escherichia coli

Objetivo: Produccin de la exoenzima


Se agrego gotas de lugol hasta cubrir

todo el cultivo.
Positivo:

rea
cultivo (halo).

clara

alrededor

del

Negativo: Color negro alrededor del

cultivo.

Salmonella

Objetivo: Produccin de la exoenzima


Se agrego gotas de lugol hasta cubrir

todo el cultivo.
Positivo:

rea
cultivo (halo).

clara

alrededor

del

Negativo: Color negro alrededor del

cultivo.

Regresar

E
D
A
B
E
U
D
A
PR
D
I
L
I
V
O
M

Escherichia coli

Esta prueba determina la


movilidad de los bacilos
fermentadores.

Negativo para cepas deE.


coli

Salmonella

Negativo. Los organismo mviles


migran de la lnea de siembra y se
difunden en el medio provocando
turbiedad.

Regresar

TINCIN DE GRAM
Tcnica de coloracin
La diferencia de color se
relaciona a sus diferencias en la
composicin de su pared y
arquitectura celular: clulas de
color violeta (bacterias de
pared Gram positivas) y
clulas de color rosa (bacterias
de pared Gram negativa).
Las bacterias Gram positivas
tienen una gruesa capa de
peptidoglicano
o
murena,
mientras que esta capa es ms
fina en las Gram negativas y
est rodeada por una bicapa
lipdica externa

Escherichia
coli

Bacteria

(capa

Gram negativa
fina

de

peptidoglicano y rodeado
por una bicapa lipdica)

Forma de bacilo

Tincin de salmonella
Salmonella spp. es un bacilo
Gram-negativo
anaerobio
facultativo perteneciente a la
familia enterobacteriaceae.

Microscopa electrnica de Salmonella typhimurium

Regresar