Espectroscopa de Absorcin

En los mtodos de absorcin la base

de informacin es la magnitud del
poder radiante proveniente de una
fuente externa que es absorbido por
la especie analizada.
Aqu la absorcin de radiacin por la
especie, va acompaada por la
excitacin del analito.

Espectroscopa de Absorcin
Es el fenmeno que ocurre cuando una
radiacin electromagntica interacta
con la materia traspasando parte de su
energa a los tomos o molculas
presentes en la materia que pasan de
un estado energtico menor a estados
de mayor energa, o estados excitados.

Interaccin Rem - Materia:

absorcin
A temperatura ambiente la
mayora de las sustancias se
encuentran en su nivel
energtico menor, o estado
fundamental.

Espectroscopa de Absorcin

E2 = h 2 = hc / 2

E1 = h 1 = hc / 1
Radiaci
n
incidente

muestra
Radiacin
transmitida

Ejercicios
en cuntos kJ/mol aumenta la energa
de OZ cuando absorbe radiacin UV de
longitud de onda de 147 nm?
qu aumento de energa experimenta el
CO2 cuando absorbe radiacin infrarroja
de nmero de onda 2300 cm -1?

Desarrollo
E = h c /
2.998 x 10 m/s
x 10-34 Js) --------------------
(147 nm) (10 m/nm)
8

-9

= 1.35 x 10-18 J/molcula

= (1.35 x 10-18 J/molcula) (6.022 x 1023 molculas/ mol)
= 814 kJ/mol

Esta energa es suficiente para romper el enlace

O=O del oxgeno.

Desarrollo
E = h c / hc

x 10-34 Js)(2,998 x 108 m/s) (2300 cm-1) (100 cm/m)

= 4.6 x 10-20 J/molcula

= (4.6 x 10-20 J/molcula) (6.022 x 1023 molculas/ mol)
= 28 kJ/mol

Al absorber radiacin IR aumenta la

amplitud de las vibraciones de los enlaces
de CO2

Medida espectrofotomtrica
Cuando una muestra absorbe luz, la potencia radiante
del haz de luz disminuye.
La potencia radiante, P, es la energa por segundo y
por unidad de rea del haz de luz
La luz se hace pasar a travs de un monocromador
para seleccionar una longitud de onda. La luz de una
sola longitud de onda se llama monocromtica, o sea
de un color.
La luz monocromtica con una potencia radiante P0 ,
incide en una muestra de longitud b. la potencia
radiante del haz que emerge por el lado opuesto de la
muestra es P. Como la muestra puede haber absorbido
algo de luz, P P0

Transmitancia
La transmitancia, T, se define como la fraccin
de la luz incidente que pasa a travs de la
muestra.
P
Transmitancia: T = ----P0

T puede valer de 0 a 1
El porcentaje de transmitancia es simplemente
100 T y puede valer desde 0 a 100 %.

Absorbancia
P
P0

P/P0

%T

1
0,1
0,01

100
10
1

0
1
2

Absorbancia
Cuando no se absorbe luz,
P= P0

A=0

Si se absorbe el 90 % y se transmite el 10 %,
P= P0/10 y A= 1

Si solamente se transmite el 1 % de luz,

A= 2

La Absorbancia a veces tambin se llamaba densidad ptica

Absorbancia
La absorbancia es importante
porque es directamente
proporcional a la concentracin,
c, de la especie que absorbe la
luz en la muestra.

Leyes de la Absorcin
Cuando un haz de radiacin
monocromtica, con una potencia
P0, incide sobre una cubeta
conteniendo una solucin, puede
ocurrir que:

Leyes de la Absorcin
Parte del haz de radiacin sea absorbido
por el medio que est siendo analizado.
Parte de la radiacin incidente sea
reflejada:
dependiendo de la especie absorbente o,
de las diferencias entre del medio de
propagacin de la radiacin y el del medio
que esta siendo analizado.

Leyes de la Absorcin
Parte de la radiacin incidente sea
dispersada:
Dependiendo del medio: no sea transparente
ni homogneo

Parte de la radiacin incidente sea

transmitida, siendo su potencia menor a la
potencia de la radiacin inicial o incidente.

Potencia Reflejada
Puede ser minimizada:
Uso de medidas relativas y,
Cubetas con paredes homogneas, de
menor espesor y de caras paralelas
Una cubeta conteniendo la muestra y otra
cubeta conteniendo todos los componentes
de la cubeta anterior menos la sustancia de
inters.

Potencia Reflejada
La medida del haz
transmitido por la segunda
cubeta servir de referencia
para calibrar el instrumento,
antes de la medida de la
potencia transmitida por la
cubeta que contiene el
material a analizar.

Potencia Reflejada
Como vemos es necesario usar:
Cubetas prcticamente idnticas
De espesor reducido y
De caras paralelas

Potencia Dispersada
Normalmente los
procedimientos involucrados
en la absorcin de luz, son
realizados en soluciones
homogneas y transparentes,
de modo que la potencia de
la radiacin dispersada
puede despreciarse

Leyes de la Absorcin
Po

P t + Pd +

Pa
Cubeta

Pd
Po

Pa

Pt

P t < Po

Leyes de la Absorcin
Por lo anterior podemos considerar que:
PO = P a + P t
Las potencias incidente y transmitida
pueden ser medidas directamente, y
La potencia absorbida puede determinarse
como la diferencia entre P0 y Pt.

Pa = Po - P t

Leyes de la Absorcin
Investigaciones sobre la relacin entre las
potencias de radiacin incidente y
transmitida fueron realizadas por Pierre
BOUGUER (1729) y por Johann H.
LAMBERT (1760), llegando a enunciar
dos leyes fundamentales que caracterizan
al proceso de absorcin:

Leyes de la Absorcin
La intensidad o potencia de
luz monocromtica transmitida
por un medio homogneo es
proporcional a la intensidad o
potencia de luz incidente
Pt = k P o

( I t = k Io )

Leyes de la Absorcin: Ley de

Lambert
La intensidad o potencia de luz
monocromtica transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar
aritmticamente el espesor del medio
absorbente

Pt = Po e-kb

( It = Io e-kb )

Leyes de la Absorcin: Ley de

Lambert

Pt = Po e-kb
b = espesor del medio absorbente
k = constante para la longitud de onda
y el medio absorbente, denominada
coeficiente de absorcin

Leyes de la Absorcin: Ley de

Lambert

Pt = Po e-kb
Pt = Po 10-0.4343 kb
k = k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10-kb

Leyes de la Absorcin: Ley de

Lambert

Pt = Po 10- kb

Pt
k 'b
10
PO

Leyes de la Absorcin: Ley de

Lambert

Pt
k 'b
10
PO
Pt / Po = Transmitancia, fraccin de la
luz incidente transmitida por un espesor b

Ley de Lambert - Bouguer

Cuando una radiacin monocromtica
proveniente de una onda plana pasa a
travs de un medio capaz de absorber
radiacin, de concentracin constante,
la
potencia
radiante
disminuye
logartmicamente a medida que la
longitud del paso ptico aumenta
aritmticamente.

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

August Beer (1852) estudi la
influencia de la concentracin del
componente absorbente en la
transmisin y absorcin de la luz.
Descubri que existe la misma
relacin entre la transmisin y la
concentracin que la descubierta
por Lambert entre la transmisin
y el espesor del medio absorbente:

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

La intensidad o potencia de un
haz de luz monocromtica
transmitido disminuye
exponencialmente al aumentar
aritmticamente la concentracin
de la especie absorbente
Pt = Po e-kc

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt = Po e-kc
Pt = Po 10-0.4343kc
k =

k/2.3206 = k * 0.4343

Pt = Po 10-kc

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt = Po 10-kc
Pt
log
k'' c
P0
como

Pt
A log
P0

Leyes de la Absorcin: Ley de Beer

Pt
log
k'' c
P0

Ley de Lambert Bouguer - Beer

Pt = Po 10-kb
Pt = Po 10-kc
Pt = Po 10-kkbc

Ley de Lambert Bouguer - Beer

definiendo una constante a

a = k * k
P
t
y como
A log

P0

tenemos

Ley de Lambert Bouguer - Beer

LEY DE BEER

A=abc

A = Absorbancia

b = trayecto ptico, cm
a = absortividad, L g-1 cm-1
c = concentracin, g/L

Ley de Lambert Bouguer Beer

LEY DE BEER

A= bc
A = Absorbancia

=
=

trayecto ptico
absortividad molar

c = concentracin molar

Leyes de la Absorcin:
Ley de Lambert-Beer

A = Absorbancia
b = trayecto ptico
a = absortividad
c = concentracin
c=g/L
b = cm
a = L g-1 cm-1

Leyes de la Absorcin:
Ley de Lambert-Beer

A = bc

= absortividad Molar = M-1 cm-1

c = moles/L

b = cm

permite comparar
cuantitativamente la absorcin de
varias especies

Leyes de la Absorcin:
Ley de Lambert-Beer
La absortividad Molar

depende de:

La sustancia absorbente
Longitud de onda
Temperatura de medicin
Solvente

A mayor mayor nivel de

absorcin observado por lo
que es ms sensible el
mtodo espectromtrico

Ley de Beer
A = abc

A = bc

Esta ecuacin demuestra la

relacin lineal entre la A y
la concentracin c

Ley de Beer
Por lo que mantenindose
constante el camino ptico,
es posible determinar la
concentracin de una especie
en solucin a travs de una
medida de absorbancia

Ley de Beer
Cuando
un
haz
de
radiacin
monocromtica proveniente de una onda
plana, pasa a travs de un medio capaz de
absorber radiacin, contenido en una celda
de paso ptico constante, la potencia
radiante disminuye logartmicamente a
medida que aumenta la concentracin
aritmticamente

Alcances de la Ley de Beer

Mayoritariamente se aplica en las
regiones UV, VIS, IR cercano, R. X.
Aplicable a especies qumicas: iones,
molculas y tomos.
Aplicable a soluciones diluidas, y matrices
sin gran complejidad.
Aplicable a niveles de deteccin de
analitos del orden ppm o menores.

Alcances y Aplicaciones de la
Ley de Beer
Absorcin radiacin UV-VIS por
compuestos orgnicos
Absorcin radiacin UV-VIS por
compuestos Inorgnicos

Aplicaciones de la Ley
de Beer
Determinacin de un constituyente
absorbente presente en una muestra
Determinacin de dos o ms especies
absorbentes presentes en una muestra.
Valoraciones fotomtricas en cuyo
sistema participa una o ms especies
absorbentes.
Cintica de reacciones qumicas

Aplicaciones de la Ley de
Beer
Determinacin de un constituyente
absorbente
Determinacin de dos o ms especies
absorbentes
Valoraciones fotomtricas en cuyo
sistema participa una o ms especies
absorbentes.
Cintica de reacciones qumicas

Aplicaciones de la Ley de Beer

Determinacin de un constituyente
absorbente presente en una muestra:
Medicin directa de la muestra y un
patrn con lectura prxima a la muestra:
Mediante Curvas de Calibracin

Aplicaciones de la Ley de Beer

Medicin directa de la muestra y un
patrn con lectura prxima a la
muestra:

AX
C X CR
AR

Construccin de la Curva de
Calibracin
Restar el blanco de las seales o asuma un intercepto distinto de
cero en la curva
Sustraer el blanco de las seales es la prctica ms comn en los
laboratorios

asegurase que las seales de las muestras queden en el intervalo

de las seales de los estndares
La curva de calibracin calculada con su pendiente e intercepto
permite obtener la concentracin de las muestras desconocidas
Debe estar seguro que la relacin entre la seal y la concentracin
es lineal antes de aplicar los mnimos cuadrados para encontrar la
recta

Si matemticamente la relacin no es conocida, grafique la curva y elija

la mejor opcin para interpolar los valores de las muestras, el grfico es
una opcin vlida.

Curva de Calibracin externa

Obtencin de la recta:
Representacin grfica: A vs cc
Completamente lineal

Grfica de los puntos

Grfica de los promedios con rango

de error 1

Grfica de promedios con error

indicando un intervalo de confianza
de 95 %

Curva de Calibracin externa

Recta:
Completamente lineal
la lectura de la muestra se
interpola
en
la
recta
obtenindose la concentracin
de la solucin de muestra

Curva de Calibracin externa

Recta:
Rango lineal y regin no lineal
lectura muestra rango lineal: interpolacin en
la recta
lectura muestra en rango no lineal:
interpolacin en regin no lineal, pero requiere
mayor nmero de patrones en esa zona

Curva de Calibracin externa

Recta:
Puntos distribuidos no linealmente pero
con una tendencia lineal manifiesta
Elevar nmero de datos
establecer la mejor recta que pasa por los
puntos
ecuacin de los mnimos cuadrados
residuos cuyo error corresponde a
errores aleatorios de la medida y no a la
concentracin

Curva de Calibracin externa

La efectividad y confiabilidad
de sus resultados depende
de la exactitud en las
concentraciones
de
los
patrones
y
la
mnima
diferencia entre la matriz de
los patrones y de la muestra.

Igualdad de matrices
Opciones Prcticas
Separar el analito de la matriz de la
muestra
Uso de las Curvas de calibracin de
Adicin Estndar

Curva de Calibracin de Adicin

Estndar

Se utiliza para muestras

complejas en las que
existen
grandes
probabilidades
de
interferencia por efecto
de la matriz.

Curva de Calibracin de Adicin

Estndar
Formas de aplicacin de la Adicin Estndar:

Adicionar diferentes volmenes de

disolucin patrn a varias alcuotas de
muestra del mismo tamao. Despus
cada disolucin se lleva a un volumen
fijo, antes de efectuar la medida.
Adicionar incrementos sucesivos de
volmenes del patrn sobre un
volumen fijo de muestra exactamente
medido, requiere el control del
volumen total en cada incremento.

Curva de Calibracin de Adicin

Estndar

Preparacin de la serie de disoluciones:

Preparar una serie de matraces aforados de
volumen VT y aadir
alcuotas idnticas, VX, de la disolucin problema con
concentracin cX
volmenes variables de una disolucin patrn de
analito que tiene una concentracin cS.
reactivos apropiados y diluir hasta el volumen
determinado VT, y

medir la Seal S

Curva de Adicin Estndar

Uso: minimizar interferencias
Preparacin de los patrones
En cada matraz vierta el mismo volumen de muestra
Agregue cantidades o volumenes creciente de patrn o est{andar
Diluya a volumen conocida e igual todas las solucioneste

solvente
estndar
muestra

ejemplo

Solucin no. 1
Muestra vol. 5
Std
vol. 0
Total vol. 10

2
5
1
10

3
5
3
10

4
5
4
10

Std Conc=10 ppm

Adicin Estndar
Para calcular la concentracin de la
muestra
x

Ejemplo para
calcular la conc. de
la solucin 2

2.10
2
x 4.20 ppm

5x 1(10) x
1
10
2

Curva de Calibracin por Adicin

Estndar
La concentracin de la muestra viene dado por:

bcs
Cx
mVX

Curva de Calibracin de Patrn

Interno
Se basa en la medida de la respuesta
del analito y de otra sustancia
empleada como patrn interno.
Para esto se preparan una serie de
patrones con cantidades variables y
exactamente conocidas de analito y
de patrn interno y se mide la
respuesta del analito y del patrn
interno.

Curva de Calibracin de Patrn

Interno

Para construir la curva de

calibracin se representa el
cuociente de las respuestas
entre el analito y el patrn
interno, Ra/Rpi, respecto al
cuociente
de
las
concentraciones, Ca/Cpi, para
cada uno de los patrones.

Curva de Calibracin de
Patrn Interno

A continuacin se le agrega una

cantidad conocida de patrn interno a la
muestra y se miden sus seales, se
calcula la relacin de las respuestas y
se
determina
la
relacin
de
concentracin por interpolacin en la
recta de calibracin.

Principio de aditividad de la
Ley de Beer
Sistemas multicomponente : Si una
solucin contiene dos o ms sustancias
absorbentes, que no interactan entre s, la
absorbancia total de la solucin corresponde
a la suma de las absorbancias de las
especies absorbentes

Ley de Beer:
AT = A1 + A2 + A3
AT = a1bc1 + a2bc2 + a3bc3

Principio de aditividad de la
Ley de Beer
AT = A1 + A2
AT = a1bc1 + a2bc2
Si se miden las A a las de mxima
absorcin para cada especie y calculando
previamente las absortividades a esas y
manteniendo b constante, se pueden obtener
las concentraciones de la mezcla por medio
de un sistema de ecuaciones:

Principio de aditividad de la Ley de

Beer
Para una mezcla de dos componentes
absorbentes: c1 + c2
AT = a1bc1 + a2bc2
a11bc1 + a21bc2 = A T

1 para c1

a12bc1 + a22bc2 = A T

2 para c2

Cuando los espectros estn bien

resueltos
Para una mezcla de dos componentes, cuyos
espectros no se superponen demasiado:
Suponemos que la especie X tiene un mximo de
absorbancia a la longitud de onda que est bien
separado del mximo de absorbancia de la especie Y,
a la longitud de onda

Am = x bX + y bY
A m = x bX + y bY

Cuando los espectros estn bien

resueltos

Los valores de se aplican a cada especie para cada

longitud de onda, y se miden por separado
Es posible determinar X e Y despejando las incgnitas en la
ecuacin:
A
y b
x b
A
A
y b
x b
A
X = ---------------------- x b
y b
x b
y b

Y = -------------------- x b
y b
x b
y b

Cada smbolo a b es un determinante = ad bc

c d

Principio de aditividad de la Ley de Beer

Ejemplo cuando los espectros estn bien resueltos
Una mezcla de los compuestos X e Y en una
celda de 1,00 cm tiene una absorbancia de
0.957 a 272 nm y de 0.559 a 327 nm. Hallar las
concentraciones de X e Y en la mezcla.
Si de los compuestos X e Y se determinan
con compuestos puros: M-1 cm-1
Componente

272 nm

327 nm

16440

3990

3870

6420

Resolucin
A
A

y b
y b

X = ----------------------x b
y b
x b
y b

x b
x b

A
A

Y = --------------------x b
y b
x b
y b

Cada smbolo a b es un determinante = ad bc

c d
X = 0.957 *6420 3870*0.559
16440*6420 3990*3870

Y = 16440*0.559 0.957*3990
16440*6420 3990*3870

Resultados
X = 4.43 x 10-5 M
Y = 5.95 x 10-5 M

Principio de aditividad de la Ley de

Beer
Mezcla de tres componentes absorbentes:
c1 + c 2 + c 3
AT = 1bc1 + 2bc2 + 3bc3
b cte
A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3
A2 = 12c1 + 22c2 + 32c3
A3 = 13c1 + 23c2 + 33c2

para 1
para 2
para 3

Principio de aditividad de la Ley

de Beer
Mezcla de tres componentes
absorbentes:
Resolucin: matriz [3*3]
c1

A1

11

21

3 1

c2

A2

12

22

32

13

23

33

c3

A3

-1

Principio de aditividad de la Ley

de
Beer:
uso de espectrofotometra de
derivadas
Una de las dificultades mayores es
la seleccin de las longitudes de
onda para las mediciones; esto
puede minimizar mediante:

Uso de la espectrofotometra de
derivadas
Uso de longitud de onda dual,
mediante modulacin de la longitud
de onda, fuente de corriente alterna.

Principio de aditividad de la
Ley de Beer:
uso de espectrofotometra de
derivadas
Espectro normal:
A

Espectro derivado:

Se grafica la
primera derivada
en funcin de la
longitud de onda

Titulacin Fotomtrica
A + B
C + D
Especies Absorbentes:
Analito
Reactivo o Titulante
Producto

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el analito solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el titulante solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el producto solamente

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el analito y el titulante

Peq.

mL Titulante

Titulaciones Fotomtricas
Absorbe el producto y el titulante, pero el
primero el doble que el segundo
A

Peq.

mL Titulante

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de

Beer
La Ley afirma que la A es proporcional a la concentracin de
la especie absorbente.
La Ley de Beer se cumple para una radiacin monocromtica
que atraviesa una disolucin diluida, cuando la especie
absorbente no participa en un equilibrio que depende de su
concentracin.

Limitaciones :

Slo para soluciones diluidas (0.01 M) de la mayora de las

sustancias
Para soluciones de bajo contenido inico
Para soluciones con bajo contenido de grandes especies
moleculares de gran tamao que puedan afectar
electrostticamente a la especie absorbente.
Para soluciones cuyas concentraciones no modifiquen
grandemente el ndice de refraccin de las soluciones

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de

Beer
Desviaciones :
Qumicas:
Por asociaciones, disiociaciones, y/o
reacciones entre los componentes de la
muestra con el analito, entre el analito y el
solvente.
Por cambios en el equilibrio qumico de la
especie absorbente, por efecto de cambios
de
pH,
temperatura,
solubilidad,
normalmente por causa de las diluciones.

Limitaciones y Desviaciones de la Ley

de Beer
Desviaciones :
Instrumentales:
Por el no cumplimiento de hacer incidir sobre la
muestra un haz verdaderamente monocromtico
como lo contempla la Ley.
Por la presencia de radiaciones parsitas, radiacin
que contamina la radiacin separada por el sistema
selector de longitud de onda. Esta radiacin se
produce por efectos de dispersin de los diferentes
componentes pticos del sistema monocromador.

Limitaciones y Desviaciones de la Ley de

Beer
Desviaciones :
Instrumentales:
Efecto del ancho de banda.
Efecto de la utilizacin de longitudes
de onda que correspondan a los
extremos
tiles
de
los
espectrofotmetros.

Absorbancia, concentracin y precisin

El error aleatorio asociado a la medida de
T corresponde al error fotomtrico y la
precisin de una medida depende de este
error.
Como T y A se relacionan
logaritmicamente, la precisin de la
concentracin depende del intervalo de A
medido.

Relacin entre A y T, la variacin de los errores

en a resulta de un error constante en T de %

Variaciones en el error relativo debido solamente a la

relacin entre A y T.

Valores ptimos de A entre 0.2 y 0.8

Error relativo en las concentraciones

para un error constante en T de %

El valor ptimo para determinar las concentraciones

se encuentra entre 20 % y 60 % de T

Error en la medida de las concentraciones por

efecto de la resolucin espectral

Desviacin aparente de la Ley de Beer. Por esto las longitudes de onda usadas
para los anlisis se eligen en los picos de banda espectral donde la curva es plana
y se alcanza la mxima sensibilidad.

Resultados experimentales obtenidos para determinar el

error relativo en el intervalo visible para una solucin de
K2Cr2O7 en cido sulfrico

Valor optimo de la medida de A: 0.4 - 0.7

Ejercicio 1
Si la Ley de Beer demuestra que A = abc,
experimentalmente podramos demostrar que:

a)
b)
c)

EJERCICIO 2
Una disolucin de Ni 5.00*10-5M se coloca en
una cubeta de paso de 1.00 cm. La A a 592 nm
es 0.446. Cunto vale a 592 nm?. Si una
disolucin de Ni de concentracin desconocida
tiene una A de 0.125 a la misma , cul es su
concentracin?

= 8920
Cm = 1.40*10-5M

Ejercicio 3
En una disolucin, dos componentes absorben a la
misma longitud de onda.
Para i tenemos:

1i = 500 2i = 3000

1j = 2100 2j = 160

A (i) = 0.450

Para una segunda longitud de onda j :

A (j) = 0. 565

Si b es 1.00 cm y las unidades de a son L mol -1 cm-1;

hllese la concentracin de cada componente.
c1 = 2.61*10-4 M
c2 = 1.07*10-4 M

Ej. 4

a.- 60 M-1 cm-1

b.- 1.87 x 10-7 L ug-1 cm-1
c.- 110 L mol-1

Ejercicio 5

R.- 250