UNIVERSIDAD

AUTNOMA DE ZACATECAS
FRANCISCO GARCA SALINAS
Unidad Acadmica de Medicina Humana y C S
Doctorado en Ciencias en la Especialidad
de
Farmacologa Mdica y Molecular
Examen de Proyecto
Tesis Doctoral

TRATAMIENTO CARDIOPROTECTOR y efecto antioxidante

con fitorterapeuticos EN HEMODINAMIA CARDIACA.
PRESENTA
M.C. RAUL E. DEL HOYO GUTIERREZ

DIRECTOR DE TESIS: DRA. MARIA PATRICIA LOZANO HERNANDEZ

Zacatecas, Zac., 5 de MAYO de 2016

CONTENIDO
I. Introduccin y
II. Antecedentes
Justificaci
nIII. Pregunta
Cientfica
IV.
Gener
Hiptesis
al
Especfic
V.
os
Objetivos
VI.
Diseo
Metodol
Exp.
Mat. y
VII.oga
Mt.
Bibliogr
VIII.afa
Cronogr
ama

Estrs oxidante
Inflamacin
Metabolismo

CONCENTRACIN DE
RADICALES LIBRES (M)

Produccin de radicales libres durante la

Isquemia miocrdica
7
6
5
4
3
2
1
0

10 min
0
Isquemia

10

20 30

40

50 60

REPERFUSIN TIEMPO
(segundos)

Zweier JL., 1989

TBARS
nmol/wet weight

Produccin de lpidos peroxidados en la Isquemia

miocrdica

POST-INFARCTION PERIOD

Hill M., 1997

Sistema renina angiotensina clsico y nuevo

Kumar R., 2012

Ang II (fmol/ml)

Sistema renina-angiotensina en la isquemia

miocrdica

SC

VI

VD
Santos RA., 1990

Inflamacin en isquemia miocrdica

Citocinas:
IL-6, IL-18,IL-10

Isquemia

Proteolisis:

Activacin endotelial:
ICAM-1, VCAM-1, Eselectina

MMP-1,-2, -9,-10

Martn Ventura J.l Rev Esp Cardio. 2009; 62:677-88

Disfuncin Endotelial en la Isquemia Miocrdica

Efecto del Rosmarinus officinalis en la isquemia

miocrdica

Kandaswamy -Senthil K., 2010

II- Justificacin

MorbiMorbiMortalidad
Mortalidad

EFECT
O

COST
O
BENEFI
CIO

Uso de
fitoterapia:
Con efecto
Cardioprotec
tor y
Antioxidante
como
tratamiento
alternativo.

Langendorff para corazn

Nos permite trabajar con un corazn aislado y perfundido, sin la
influencia del sistema neurolgico y de hormonas para analizar
parmetros mecnicos.

Presin ventricular (PV)

Presin de perfusin (PP)
Frecuencia cardiaca (FC)
Trabajo cardaco
Resistencia vascular

Estudio macroscpicos
Identificacin del rea infartada: Clorhidrato de trifenil tetrazolio (TTC). La
zona del miocardio no infartada se tie de color rojo, el tejido infartado
presenta una coloracin amarilla.

Tejido no
infartado

Tejido
infartado

Gou Y.,
1998

Microscopa ptica

Fijacin

Aldehdos

Pos Fijacin

Deshidratacin

Serie de alcohol
etlico

Inclusin

Paraplast
(parafina)

CORTE

3-5 m

Desparafinar e hidratar
Tincin

Observacin

Xilol, alcohol 100%,

96%, 70% y 50%

Hematoxilina
-eosina y
tricrmico
de Masson
Gonzlez G., 1996

Determinacin por ELISA de IL-6 e IL-10

Medicin de la Capacidad Antioxidante

Plasma

Agregar agente
oxidante CuCl2 o
FeCl3

Sistema
Oxidativo

Incubar 3min
con agitacin

Agregar un stop de
la reaccin:
Batocuprana

Cu 2+

Cu+

Si hay muchos antioxidantes la

fluorescencia es pequea.
Pocos antioxidantes mucha
fluorescencia

Medir Fluorescencia

MEDICION DE LA PEROXIDACION DE LIPIDOS

Homogenizar tejido (ventrculo izquierdo
isqumico) en 3ml de agua desionizada
Mezcla Cloroformo-Metanol (2:1)
Extraccin de Lpidos
Agitar y colocar en hielo 30 min.
Retirar la fase superior por aspiracin
cuidadosamente
Lectura de productos lipdicos fluorescentes
350 nm excitacin y 430 nm emisin.
Fluorescencia relativa/mg de protena
Triggs, W. J., and Willmore, L. J. 1984; Segovia, J. 2002

Determinacin de Ang-II, Ang1-7 , endotelina ,

BH4 y BH2 por electroforesis capilar.

Tcnica de separacin
basada en la diferente
velocidad de migracin de
las distintas especies
cargadas bajo la accin
de un campo elctrico.

Actividad de la NOS
NOS

L-arginina + [3H]-L-arginina
tritiada

Preparar y
equilibrar
columnas de
intercambio
ionico

Agregar
mezcla de
reaccin a
columnas

NADPH
BH4
Calmodulina
Ca2+

cofactores
(BH4, NADPH,
calmodulina, CaCl2)
L-arginina
[3H]-L-arginina

L-arginina
radiactiva/

L-[3H] citrulina

500mg de
protena de
homogenado

Agregar
lquido de
centelleo

+ NO

30
min

Adicionar
37C buffer de
paro

Cuantificar en un
contador de
centelleo

L-arginina
L-citrulina
radiactiva/
L-citrulina

Expresar la actividad de NOS como ng

L-citrulina/500 g prot/30 min

Anlisis Estadstico

PRUEBA DE
DE TUKEY
TUKEY
PRUEBA

Si se ha rechazado la hiptesis
nula de igualdad de medias esto
supones que existe al menos una
diferencia, pero no sabemos
cuantas ni entre que medias. Para
esto se establecen pruebas de
COMPARACIONES
MLTIPLES ENTRE MEDIAS.

VII. Bibliografa
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