Cromatografa

UNVES

La cromatografa agrupa un conjunto

importante y
diverso de mtodos que facilitan la
separacin, identificacin y
determinacin de componentes
estrechamente relacionados en mezclas
complejas.
Muchas de dichas separaciones son
imposibles por otros medios.

En todas las operaciones

cromatograficas la muestra se
disuelve con una fase mvilque
puede ser un gas, un liquido o un
fluido supercritico la cual se hace
pasar a travs de una fase
estacionaria inmiscible fija en una
columna o en una superficie solida.

Las dos fases se eligen de tal

forma que los componentes de
la muestra se distribuyen en
grados distintos entre la fase
mvil y la fase estacionaria.

Aquellos componentes que son fuertemente

retenidos por la fase estacionaria se mueven con
mucha lentitud con el flujo de la fase mvil.
En cambio, los componentes unidos dbilmente a la
fase estacionaria se mueven con rapidez. Como
consecuencia de las distintas velocidades de
migracin, los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas distintas que se pueden
analizar en forma cualitativa y cuantitativa.

Clasificacin:
Se pueden clasificar de varias formas
1- Medios fsicos por medio de los cuales las
fases estacionaria y mvil se ponen en
contacto.
- Cromatografa en columna
- Cromatografa en plano

Laadsorcin:

Proceso por el cualtomos,ionesomolculasson

atrapados o retenidos en la superficie de un
material en contraposicin a la absorcin, que es
un fenmeno de volumen.
Ejemplo: un contaminante soluble (adsorbato) es
eliminado del agua mediante el contacto con una
superficie slida (adsorbente).

 Clasificacin dependiendo de los

tipos de fases mviles y
estacionarias, y en la clase de
equilibrios involucrados

Cromatografa de
elucin en columna

La columna esta constituida por un tubo

angosto relleno con un solido inerte
finamente dividido que mantiene a la
fase estacionaria en su superficie. La
fase mvil ocupa los espacios abiertos
entre las partculas del material de
empaque. Para empezar, una solucin
de la muestra que contiene una mezcla
de A y de B en la fase mvil se introduce
en la parte superior de la columna.

La elucin implica la purificacin de una

especie por lavado en una columna
mediante la adicin continua de fase
mvil nueva.
En la cromatografia moderna, la adicion
continua se consigue por medio de una
bomba en CL y en CFS o por la
aplicacin de presin en CG.

A medida que la fase mvil limpia fluye

por la columna, transporta molculas de
soluto hacia abajo de la columna en una
serie continua de transferencias entre
las dos fases. Pero como el movimiento
de los solutos solo puede ocurrir en la
fase mvil, la velocidad media a la que
una zona de soluto migra hacia abajo en
la columna depende de la fraccin de
tiempo que permanece o reside en
dicha fase.

Cromatogramas
Si al final de la columna se coloca
un detector que responde
a la concentracin del soluto y se
registra su seal en funcin del
tiempo, o del volumen de fase
mvil aadido, se obtiene una
serie de picos.

Mejoramiento del
rendimiento de la
columna

1) Incrementar la velocidad de separacin de la

banda .
2) Disminuyen la velocidad de ensanchamiento de
la banda.

VELOCIDADES DE
MIGRACION DE LOS
SOLUTOS
La eficacia de una columna de
cromatografa para separar dos solutos
depende en parte de las velocidades
relativas con las que se lavan o se
purifican las dos especies.
Esas velocidades estn determinadas por
la magnitud de las constantes de
equilibrio para las reacciones mediante
las cuales los solutos se distribuyen entre
las fases estacionaria y mvil.

Constantes de
distribucin

Cuando las concentraciones son bajas o cuando

intervienen especies no anionicas, los coeficientes
de actividad.

Tiempo de retencin
Aunque la constante de distribucin es fundamental
para las separaciones cromatograficas, no se puede
medir con facilidad. En cambio, es factible medir la
cantidad llamada tiempo de retencion que es una
funcion de Kc.

Tm= al tiempo que se requiere para que una

molcula de la fase mvil pase por la columna.

 La velocidad lineal promedio de la migracin del

soluto a lo largo de la columna

De manera semejante, la velocidad lineal

promedio de las molculas en la fase mvil

Relacin entre la tasa

de flujo volumtrico y
la velocidad del flujo
lineal

Relacin entre tiempo

de retencin
y constante de
distribucin

La velocidad de
migracin del soluto:
el factor de retencin
factor de retencin k es un parmetro experimental
importante que se usa con frecuencia para
comparar
las velocidades de migracin de los solutos en las
columnas.
La razn por la cual k es tan til es que no depende
de la forma de la columna o de la tasa de flujo
volumtrico. Esto quiere decir que para una
combinacin
dada de soluto, fase mvil y fase estacionaria.
Cualquier columna de cualquier forma que funciona
a cualquier tasa de flujo de fase mvil dar el
mismo

Velocidades de
migracin relativas: el
factor de selectividad

Descripcin
cuantitativa de la
eficiencia de la
columna N= L/H
La teoria del plato explica de manera satisfactoria
la
forma gaussiana de los picos cromatograficos y su
velocidad
de desplazamiento por la columna.
Pero la teoria se abandono en favor de la teoria de
la velocidad,
debido a que la primera fallaba al intentar justificar
el
ensanchamiento de los picos de una manera

Teora cintica de la
cromatografa
El descenso por la columna ocurre solo mientras la molcula
esta en la fase mvil. Por tanto, ciertas partculas viajan con
rapidez gracias a su inclusin accidental en la fase mvil la
mayor parte del tiempo, mientras otras se retrasan a causa de
que estn incorporadas en la fase estacionaria por un tiempo
mayor al promedio.
El resultado de estos procesos aleatorios individuales es una
dispersin simtrica de velocidades alrededor del valor medio,
lo cual representa el comportamiento de la molcula de analito
promedio.

 Resolucin de ejercitario

Deformaciones de la
curva de gauss
Una causa comn de estas deformaciones
es una constante de distribucion que varia con la
concentracion.
La asimetria o deformacion del frente
tambien se presenta cuando se introduce
demasiada
muestra en una columna. Las distorsiones de este
tipo
son indeseables porque ocasionan separaciones
deficientes
y a tiempos de elucion menos reproducibles.

Definicin de altura de
plato
A menudo se supone que las bandas
cromatograficas
tienen una forma gaussiana, lo cual es
conveniente
para definir la eficiencia de una columna en
terminos
de la varianza por unidad de longitud de la
columna.