MEDIOS DE CULTIVO
SIEMBRA
Y
AISLAMIENTO
MEDIOS DE CULTIVO
Definicin: soluciones acuosas que
contienen concentraciones adecuadas de
nutrientes
que
proporcionan
al
microorganismo los elementos requeridos
para su crecimiento y multiplicacin.
Permiten:
-aislar
las
microbianas
diferentes
-proceder a su identificacin
especies
MEDIOS DE CULTIVO
La composicin precisa de un medio adecuado
depender de la especie que se quiere cultivar
Necesidades nutricionales variables
Requerimientos mnimos:
macroelementos (C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg, Fe)
Muchos seres vivos dependen adems de:
micro u oligoelementos
(Mn, Mo, Zn, Cu, Co, Ni, V, B, Cl, Na, Si)
MEDIOS DE CULTIVO
CLASIFICACIN
Consistencia
Composicin
Lquidos
Comunes
Slidos
Enriqueci
Origen
Semisli
dos
do
Complejos o
naturales
Sintticos
Semi-sintticos
Funci
n
Enriquecimiento
Selectivos
Diferenciales
Selectivodiferenciales
Identificacin
MEDIOS DE CULTIVO
Consistencia
Lquid
os
Caldo
nutritiv
o
Caldos: nutrientes en
solucin acuosa
Semislido
Slidos
Agar citratoSimmons
Agar
Mac
Conkey
Medio SIM
Adicin de agente
solidificante (agar 1,5%
p/v) al medio lquido
Adicin de agente
solidificante en meno
proporcin (0,75%
p/v)
MEDIOS DE CULTIVO
Origen
Complejo
s o
naturales
Componentes:
sustancias
complejas de origen
animal o vegetal
(lisados de casena,
carne, soja,
levadura), minerales
y otras sustancias.
Sintticos
Componentes:
ingredientes
qumicamente puros
Semi-sintticos
Componentes:
algunas sustancias
qumicas cuya
naturaleza y
cantidad se conoce
+ sustancias de
naturaleza y
composicin
indefinida; como
por ejemplo,
peptona como
fuente de
nitrgeno, etc.
MEDIOS DE CULTIVO
Composicin
Comun
es
Finalidad: crecimiento de la
mayor parte de los
microorganismos poco
exigentes.
Medios frecuentemente
utilizados para mantener
colonias microbianas.
Enriquecidos
Adems de las sustancias nutritivas
normales, incorporan una serie de
factores (sangre, suero, leche,
huevo, bilis, etc.) indispensables
para el crecimiento de
microorganismos con grandes
exigencias nutricionales.
MEDIOS DE CULTIVO
Funcin
Enriquecimie
nto
Medios lquidos
Selectivo
Medios slidos.
Similar medios
enriquecimiento,
permiten desarrollo de
ciertos m.o. e inhiben a
otros.
Uso: seleccin y
aislamiento de m.o. a
partir de poblaciones
mixtas.
Diferencial
Contienen
sustancias
indicadores de la
actividad
metablica de
ciertos m.o. que
permite
diferenciarlos
MEDIOS DE CULTIVO
Funcin
Selectivodiferencial
combinan en un mismo
medio caractersticas
de un medio selectivo y
diferencial
Identificacin
Medios destinados a
comprobar alguna
cualidad especfica que
permita identificar un
m.o.
Transporte
Se usan cuando
transcurre un
tiempo entre toma y
procesamiento de
muestra
Sus componentes
aseguran
superviviencia de
las clulas hasta su
siembra sembradas
en medios
adecuados
SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Siembra: Introducir artificialmente una
porcin de muestra (inculo) en un medio
apropiado con el fin de iniciar un cultivo,
que luego se incuba a una temperatura
adecuada para el crecimiento.
SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Cultivo
puro:
Es
aquel que contiene un
slo
tipo
de
microorganismo y que
procede
generalmente
de una sola clula
Aislamiento: Procedimientos que se
realizan para obtener un cultivo puro a
partir de una muestra, con el objeto de
efectuar estudios qumicos, bioqumicos o
metablicos del microorganismo aislado.
SIEMBRA Y AISLAMIENTO
Tcnicas aspticas
Trabajar con instrumentos y medios de cultivo
previamente esterilizados.
Procurar que el inculo no se contamine,
modifique o destruya.
Mantener los tubos, placas y todo el material
estril cerrados cuando no se usen.
Recordar que el aire siempre contiene polvo
en suspensin que generalmente lleva consigo
una comunidad de microorganismos.
Pipetas
Ansas
Siembra en
Medio Lquido tubo
o
erlenmeyer
Siembra en
placa
Medio Slido
Siembra en
tubo
Estriado
Extensin en
superficie
Difusin en
profundidad
Pico de flauta o agar
inclinado
Por puncin o picadura
(3
)
(4
)
(5
)
el
en
profundidad
identificacin
Medio
semislido
Medio SIM
Uso: determinar
movilidad de las
especies en estudio
RECUENTO DE COLONIAS
Recuento en placa
1) Preparar diluciones decimales seriadas de
la muestra para obtener colonias contables
Muestra
(homogenato)
10-1
10 ml de muestra
+
90 ml agua peptona
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
RECUENTO DE COLONIAS
2)
Siembra
Vertido en placa
(siembra por
profundidad)
Extensin en placa
(siembra en
superficie)
RECUENTO DE COLONIAS
3) Determinar N de unidades formadoras de
colonias (ufc)
182 colonias
16 colonias
3,2 x 105ufc/ml
UROCULTIVO
(Protocolo de Rutina)
Actividades en clase
1 mL
10-1
0,5 mL
0,5 mL
Medio
1
0,5 mL
10-4
10-3
10-2
Medio
2