INTEGRANTES:

GABRIELA
SEVILLANO
JENNIFER TORRES
CAROLINA VARELA

Clulas
dendrtic
as

Tumores
malignos
problema en
salud pblica

Quimioterapi
a
Alternativa:
vacuna
que
aproveche la
capacidad
natural
del
cuerpo para
reconocer
y
eliminar
las
clulas
cancerosas.

Capacidad
de
inducir
una
respuesta
segura,
especfica de
antgeno
y
de
larga
duracin
inmune

Centinelas del sist. Inmunolgico

DCAPC con la capacidad de provocar respuestas

inmunes tanto primarias como secundarias a
antgenos extraos

Inmunizacin
A travs DC con antgenos asociados a
tumores

estrategia de inducir inmunidad antitumoral

especfica

Vacuna con lisados

tumorales y DC (TPDC)

Lisados tumorales

Posible fuente de antgenos asociados a

tumores

Provoca respuestas
clulas T

Imitar
procesos
fisiolgicos
reconocimiento y rechazo de tumor

efecto antitumoral limitada

de

ms

amplio

de

requiere la adicin de adyuvantes para

provocar una respuesta inmune fuerte y
de larga duracin.

cido rico (UA)

Producto natural de
la va metablica de
la purina
Liberada
de
las
clulas que mueren
Finalmente conduce
a la cristalizacin

UA
cristalino
estimula
la
maduracin de DC
mediante
el
aumento
de
la
UA cristalino activar
expresin
de
los macrfagos para
molculas
producir mediadores
coestimuladoras
inflamatorios.
CD80 y CD86, y
mejora
las
respuestas
de
clulas
T
a
antgenos extraos

UA, podra ser utilizado como un

adyuvante potencial para vacunas
basadas en DC para la inmunidad
antitumoral.
Resultados demostraron que UA
aument la actividad antitumoral de
la vacuna TP-DC contra tumores.

MATERIALES Y MTODOS
RATONES Y TUMOR MODELO.- RATONES HEMBRAS DE TIPO SALVAJE C57BL/6,
EDADES ENTRE 6-8 SEMANAS, SE MANTUVIERON EN CONDICIONES LIBRES DE
PATGENOS ESPECFICOS.
E.G7 (OVA-TRANSFECTANTE DE LAS CLULAS T DE LINFOMA EL4 MURINOS).
PREPARACIN DE CRISTAL URATO MONOSDICO.- UA SE DISOLVI A UNA
CONCENTRACIN DE 5 MG/ML EN 0,1 MOL/L TAMPN DE BORATO DE SODIO (PH
8,5).LA SOLUCIN SE CALENT A 55 C, Y EL SOBRENADANTE DESPUS DE LA
FILTRACIN SE DEJ REPOSAR DURANTE MS DE 72 H.CUANDO LOS CRISTALES
DE URATO MONOSDICO FORMARON, SE LAVARON CON ALCOHOL Y ACETONA.

Generacin de TP-DC.-

Clulas del fmur y tibia de los ratones

Medio de cultivo RPMI1640, con GM-CSF y IL-4, Co .2
x 106clulas por mL. Celulas tumorales y
resuspendidas a una concentracin de 1 107por ml

El sobrenadante (lisados tumorales) se recogi y se

incubaron con DC purificada en el da 7 en una
proporcin de 3: 1 a las clulas tumorales DC. El da 9,
TP-DC se recogieron para estudios posteriores.

Protocolo
de
1 106TP-DC resuspendi en 100
L de solucin
salina junto con 100 g UA se inyectaron
subcutneamente en el da 0, 14, 21.
Ratones inmunizados con TP-DC (1 10 6 ) fueron
utilizados como controles.

vacunacin
Clulas
E.G7 se cultivaron en medio RPMI
1640. 3 106clulas E.G7 se inyectaron por
va subcutnea en el da 7 despus de la
tercera inmunizacin.Dimensiones del tumor
se midieron cada tres das.

La transferencia adoptiva de clulas T o inmunoglobulinasIn

Vivo
Ratones inmunizados mueren al da 7 despus de la
3ra inmunizacin.
Las inmunoglobulinas se purificaron a partir de la
mezcla de sueros derivados de los ratones
inmunizados por cromatografa de afinidad

Eficacia de las inmunoglobulinas en la actividad

antitumoralinvivo, las inmunoglobulinas purificadas (50
mg / kg) fueron transferidos adoptivamente por va
intravenosa un da antes de los ratones fueron tratados
con clulas tumorales y despus se trataron dos veces por
semana durante 3 semanas.

El
agotamient
o de
subconjunt
os de
clulas
Inmunes in
vivo
Citometra
de flujo

Respuesta
de
citoquinas

Los ratones recibieron inyecciones intraperitoneales

de 500 mg de cualquiera de los anti-CD4 , anti-CD8 ,
anti-NK un da antes de la primera inmunizacin, y
luego dos veces por semana durante tres semanas.
Los ratones fueron tratados con las clulas tumorales
(E.G7) despus de la tercera inmunizacin

CTL especficos de OVA generados por estimulacin de linfocitos

del bazo con 50 mg / ml de protena OVA durante 3 das.
Para la tincin intracelular de citoquinas, las clulas T del bazo
se incubaron a una densidad de 2 106clulas por ml en RPMI
1640 completo que contiene 10 mg / ml OVA257 a 264o OVA323339durante 24 h,.
Las clulas se recogieron y se tieron por anti-CD4-APC y antiIFN--PE o anti-CD8-FITC y anti-IFN--PE.

Las clulas se resuspendieron

con RPMI 1640
completo y se sembraron en placas de microtitulacin
de 24 pocillos a una densidad de 2 106por pocillo
en 1 ml de medio de cultivo suplementado con 10 mg /
ml OVA257-264o OVA323 a 339
Despus de 48 h a 37 C, el sobrenadante libre de
clulas se recogi y se ensay para IFN- por kit ELISA

RESULTADOS

DISCUSIN
Debido a estas
propiedades, se han hecho
esfuerzos en la utilizacin
de la potencia
inmunoestimulante de DC
activado.

DC capturan
y procesan
los
antgenos
inmaduros
en tejido
perifrico
DC son clulas
presentadoras de
antgenos
profesionales
juegan un papel
vital en la
iniciacin,
programacin y
regulacin de las
respuestas
inmunes
especficas de
tumor

un nmero de estudios
han demostrado que la
inmunizacin por DC
cargado con tumor
antgenos pueden cebar
una respuesta CTL
especficos del tumor ,
inducir inmunidad
antitumoral protectora en
animales experimentales
la inmunoterapia DC ya ha
sido introducido en la
clnica, demostrado
factible, segura y eficaz en
algunos pacientes, otras
investigaciones Todava se
requieren para mejorar la
respuesta inmune de las
vacunas basadas en DC

UA mole endgena, producto

final del catabolismo de la
purina, actuar como una
seal de peligro para sist.
inmune

demostraron UA
estimula la maduracin
DC in vitro por el
aumento de la expresin
de las molculas
coestimuladoras CD80 y
CD86

mejora la generacin de
respuestas de clulas T
CD8+ cuando inyecta con un
antgeno particulado

administraci
n de
alopurinol o
uricasa,
disminuy
notablement
e las []
plasmticas
UA, inhibir
los
niveles
cebado
de
UA
fueron
clulas
T
elevados en
los tumores
sometidos a
rechazo
inmune

Las [] de UA estimularon DC correspondan a la que

precipitaron cristales UA.
los cristales preformados fueron altamente
estimulante, mientras que UA soluble no

UA podra mejorar la inmunidad de Ac.

Combinaron UA y Mycobacterium Smegmatis para el
tratamiento local, fue eficaz en retrasar el
crecimiento del tumor.
hallazgos indican los efectos adyuvantes de UA
fomentar la administracin potencial de la AU en las
vacunas tumorales

Cristales UA activar efectores inmunes resp

innata incluyendo macrfagos y DC

Varias observaciones
se han realizado en
el presente estudio
relativo a la
inmunidad
antitumoral de
tumores-lisados
basan vacunas DC.

mayor acumulacin de
tumor especfico OVAtetrmero + CTL
CD8+

administracin de la
AU como un
adyuvante podra
aumentar los efectos
antitumorales in vivo
de la vacuna TP-DC.

Efectores de clulas
T, aparte de
autoanticuerpos,
participaron en la
actividad antitumoral

estudio sugiere
respuesta inmune
autorreactivos contra
las clulas tumorales
puede ser provocado
en reaccin cruzada
por la inmunizacin
de TP-DC con UA

antgenos
exgenos
se cruzan
a ruta
endgena
para
obtener
acceso a
MHC de
clase I.

generaci
n con xito
de MHC
clase I y
la
actividad
CTL CD8
dependien
te

ensayos
de
citotoxicid
ad in vitro

actividad
antitumoral

linfocitos
transferidos
adoptivame
nte

hallazgos
las clulas
NK tambin
estn
involucrados
en la fase
efectora

el
agotamient
o de
Clulas T
CD8 y
clulas NK

eliminan
parcialment
e la
actividad
antitumoral in
vivo

Las respuestas
inmunitarias
mediadas por CTL
CD8 + MHC de
clase I
dependientes

pueden
desempear un
papel importante
en el actividad
antitumoral de la
TP-DC con la
vacuna de la UA

la vacuna puede
tener efectos
antitumorales
contra los
tumores que son
sensibles a la CD8
+

o la muerte
celular mediada
por NK.

clulas T CD4 + provocaron poca funcin en esta

vacuna.

experimento in
vitro, los
linfocitos
estimulados con
OVA257-264

aumento
significativo

nmero de
clulas T CD8
+ productoras
de IFN-
ELISA tambin
observ un
aumento de la
produccin
IFN- de en el
sobrenadante
de cultivo de
linfocitos.

resultados apoyan an ms la importancia del

papel de
Clulas T CD8 + en esta vacuna

las inmunoglobulinas purificadas

no mostraron ningn efecto
antitumoral

aumentar
fuertemente
la funcin
lasDC
clulas
NK regulan
la expresin
de
dar
forma
tanto
la
inmunidad
citotxica
de las clulas
NK. y la
molculas
coestimuladoras
en DC
adaptativa hacia una respuesta Th-1.
produccin de IL-12 e IL-15,

por lo tanto clulas T CD8 + y la

destruccin mediada por clulas
NK

fueron los procesos clave que

participan en la actividad
antitumoral.

mecanismo por el cual UA podra

aumentar el efecto antitumoral de
la vacuna basada en DC todava
tiene que ser investigado.

varios estudios clnicos han indicado la posibilidad de TP-DC inducir clulas T antitumorales
respuestas en pacientes con linfoma, melanoma maligno, cncer de ovario y carcinoma de clulas
renales.
inmunoadyuvantes
estn diseados
para facilitar la movilizacin y la maduracin de
UA podra
servir
DC para mejorar la inmunidad antitumoral

como un
adyuvante eficaz
para la vacuna
basada en DC
contra los
tumores.

proporcionan una
nueva estrategia
de la vacuna