UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

FACULTAD DE DERECHO Y CRIMINOLOGIA

ADN RECOMBINANTE

Virginia Alejandra Montaez Martnez

Aula: 115

Turno: matutino

Dr. Javier Mata

1577802

AGOSTO 2016

La tecnologa del ADN recombinante tuvo sus orgenes en la dcada de

los 70s con el descubrimiento y caracterizacin de las endonucleasas
de restriccin y el desarrollo de mtodos rpidos de secuenciacin e
hibridacin de ADN, que aunado a la tcnica de reaccin en cadena de
la polimerasa (PCR) y la clonacin de genes en los 80s, sentaron las
bases para el desarrollo de esta nueva biotecnologa.
La DNA Recombinante, que se acorta a menudo al rDNA, es un hilo
artificial hecho de la DNA que es formado por la combinacin de dos o
ms series del gen.
Esta nueva combinacin puede o no puede ocurrir naturalmente, pero
se dirige especficamente para que un propsito sea utilizado en una
de las muchas aplicaciones de la DNA recombinante. Los cientficos
Genticos pueden hacer esto para crear el hilo nico de la DNA para
diferentes fines, usando varios tipos de tcnicas

ADN recombinantees una molcula

que proviene de la unin artificial de
dos fragmentos de ADN. Por lo tanto,
latecnologa de ADN recombinantees
el conjunto de tcnicas que permiten
aislar un gen de un organismo, para
su posterior manipulacin e insercin
en otro diferente. De esta manera
podemos hacer que un organismo
(animal, vegetal, bacteria, hongo) o
un virus produzca una protena que le
sea totalmente extraa.

La tecnologa del ADN

recombinante permite el
aislamiento de un gen de un
organismopara introducirlo en
otro. Entre sus aplicaciones se
encuentra la produccin de
grandes cantidades de la protena
codificada por dicho gen, como por
ejemplo protenas humanas
encantidad suficiente para que
puedan ser utilizadas como
frmacos. Las protenas
obtenidaspor esta tcnica se
denominan protenas
recombinantes.

La tcnica del ADN recombinante se utiliza en estudios

sobre la regulacin de la expresin gnica, en la regulacin
de la produccin comercial de sntesis de protenas como la
Insulina o la hormona del crecimiento, en el desarrollo de
organismos transgnicos y en la amplificacin del ADN, es
decir, en obtener un gran nmero de copias de un gen
determinado.
La tecnologa de ADN recombinante se desarrolla en tres
pasos: el aislamiento del gen deinters,laclonaciny
expresin de dicho gen,y laproduccina gran escala dela
protena codificada por el gen. Cada uno de estos procesos
precisa de unas herramientasla mayora de las cuales son
ofrecidas por la propia naturaleza

FORMACIN DE RDNA
En la mayora de los casos, el rDNA se crea en una
configuracin del laboratorio usando un proceso de
la reproduccin molecular. Este mtodo permite en
vivo la rplica de la DNA, en las clulas vivas del
tema.
Un vector de la reproduccin es una molcula de la
DNA que las rplicas dentro de una clula viva y se
utilizan para formar el rDNA. El vector de la
reproduccin es generalmente una pequea parte
de un hilo de la DNA que lleve a cabo la informacin
gentica que es necesaria para la rplica de clulas.

La tcnica consiste en introducir el

gen seleccionado en el interior de
un vector y ste, a su vez, dentro
de una clula, denominadaclula
anfitriona. Aprovechando la
maquinaria celular, el gen se
expresa, sintetizndose as la
protena codificada en el gen.
Adems, al dividirse la clula, las
nuevas clulas formadas
contienen ese gen que tambin
sintetizan esa protena. Se genera
un grupo celular que contiene un
genoma distinto.

Las etapas en la produccin de ADN recombinante son las

siguientes:
Preparacin de la secuencia del ADN para su
clonacin
Preparacin de un vector de clonacin
Formacin del ADN recombinante
Introduccin del ADN recombinante en una clula
anfitriona
Propagacin del cultivo
Deteccin y seleccin de clones recombinante

Preparacin de la secuencia del ADN

para su clonacin
Es la parte esencial del proceso, ya que el ADN debe
separarse y concentrarse.
Partimos de clulas con ncleo, que deben ser lisadas (rotas).
Las protenas estructurales, enzimas, ARN y restos
moleculares deben separarse del ADN.
El ADN obtenido se concentra y se fragmenta por accin de
lasenzimas de restriccin.
Se asla el ADN que se desea clonar, por ejemplo, mediante
cromatografa lquida o por centrifugacin.
Si el ADN debe expresarse hay que aadir los segmentos
reguladores de la expresin gnica.

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Preparacin de un vector de clonacin

El vector es el portador de la secuencia de ADN que se desea
clonar. Un vector debe presentar las siguientes caractersticas:
Una pequea secuencia de ADN fcil de aislar, como, por
ejemplo, un plsmido.
Contener distintos puntos deataque a enzimas de
restricciny que sean conocidos.
Poder ser incluido en laclula anfitriona con facilidad.
Replicarse de forma independiente al ADN de la clula
anfitriona.
Poseer un gen marcador con el que puedan identificarse y
seleccionar las clulas clonadas. Un ejemplo de marcador
puede ser la resistencia a un antibitico.

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Formacin del ADN recombinante

En esta etapa se produce la unin covalente del
vector y el ADN inserto mediante una ligasa. As se
realiza el sellado de la llamada Mella, Muesca o Nick.

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Introduccin del ADN recombinante

en la clula anfitriona
Para la clonacin (replicacin del ADN recombinante) se
necesita la maquinaria celular. Por ello, hay que
introducir el ADN recombinante en unaclula
anfitriona.
Los tipos de clulas anfitrionas son:
Clulas bacterianas
Clulas eucariotas:
Levaduras
Clulas tumorales

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Propagacin del cultivo

Se induce la divisin de clulas anfitrionas, de forma
que se producen tambin copias de ADN
recombinante y, por ello, la clonacin. Primero se
efecta una siembra en placas Petri con agar como
medio de cultivo. Se dejan crecer las colonias. Cada
una de ellas ser seleccionada y transferida a
distintos medios lquidos, donde seguir aumentando
el nmero de individuos de la colonia.

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Deteccin y seleccin de los clones

recombinantes
En los procesos de clonacin se utiliza un gran nmero de clulas. Al
final del proceso se hace necesario separar las clulas que contienen
ADN recombinante de las que no lo contienen.
Los mtodos para detectar y seleccionar son:
Mtodo de hibridacin: se utiliza una sonda marcada que hibrida
con el ADN recombinante o con el ARN mensajero que se transcribe a
partir de l.
Mtodo inmunolgico: se detecta la protena codificada en el ADN
recombinante mediante anticuerpos especficos.
Mtodos genticos: pueden ser:
Insercin del vector y el ADN recombinante en un gen de la clula
anfitriona que queda desactivado.
Vector con genes de resistencia a un antibitico:
Colonias con defectos nutricionales

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Aplicaciones
El vector que se utiliza contiene secuencias de ADN que al
ser replicadas confieren resistencia a antibiticos
especficos. Esta tcnica ha sido ampliamente utilizada en
el campo de la medicina y ha permitido el desarrollo de
importantes avances teraputicos como por ejemplo la
produccin deinsulina recombinante.
Permite adems la posibilidad de utilizar plantas
yalimentos transgnicos, as como microorganismos
modificados genticamente para producirfrmacosu
otros productos de utilidad para el hombre, entre los que
se pueden citar: lainsulinahumana, lahormona del
crecimiento,interferones, la obtencin de nuevas vacunas
o laclonacinde animales.

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Con el uso de ADN recombinante se ha logrado

obtener plantas transgnicas resistentes
ainsectos,hongos,bacteriasyherbicidas, con
mejores caractersticas de calidad durante
poscosecha y con alto contenido nutricional.Tambin
ha permitido la clonacin, expresin y produccin
mediante esta tcnica de diversosantgenos,

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Industria Alimentaria
Industria Farmacutica
Investigacin Mdica
Industria Agrcola