APLICACIN DE LAS

TCNICAS DEL ADN EN

LA BIOTECNOLOGA.
ALVAREZ ORTEGA YESIKA MONSERRAT
ALMA LIDIA MANZO CORTES
FERNANDO RUZ TORRES
JOS DE JESS SANDOVAL SALCEDO

ELECTROFORESIS

ANLISIS DE PROTENAS

Estas molculas son necesarias para las clulas de nuestro cuerpo y pueden ser
analizadas.
A travs de la electroforesis, la cantidad de protenas en la sangre o en la orina se
mide y se compara con los valores normales establecidos.

ANLISIS DE ANTIBITICOS

La aplicacin de la electroforesis en los estudios de los antibiticos se remonta a la

dcada de 1950.
Otros estudios se efectuaron para mejorar las tcnicas electroforticas y antibiticos
nuevos.

ANLISIS DE VACUNA

Hay varias vacunas que han sido

purificadas, procesadas y analizadas a
travs de la electroforesis, como la
vacuna contra la influenza, la vacuna
contra la hepatitis y la vacuna contra la
polio.

HUELLA GENTICA

El ADN contiene toda la informacin necesaria para el desarrollo

de los seres vivos.
Los individuos de la misma especie comparten gran parte de su
secuencia de ADN.

Estas
zonas
del
genoma
se
denominan
polimorfismos o marcadores genticos, y son
utilizadas para la identificacin de personas ya que
dos seres humanos no relacionados es poco
probable que tengan en comn los mismos
marcadores genticos.

La Huella gentica se utiliza en Medicina

forense, en la identificacin de restos
humanos, pruebas de paternidad o
parentesco, compatibilidad en la donacin
de rganos... etc.

OBTENCIN DE
FRMACOS

INSULINA

La insulina es el primer caso de protena producida por ingeniera gentica aprobada

para uso en humanos, desde 1982. La tcnica deingeniera genticaempleada
consiste en extraer de clulas humanas el gen que porta la informacin para fabricar
insulina humana.

Se multiplican a un ritmo veloz y, a

medida que lo hacen, producen grandes
cantidades de insulina humana, entre
otras sustancias.
La sustancia obtenida por ingeniera
gentica, en este caso insulina humana,
se denomina "insulina recombinante".

HORMONA DEL CRECIMIENTO

La hormona de crecimiento humana recombinante, que se produce dentro de

bacterias de tipo Escherichia coli.

ANIMALES TRANSGENICOS

QU ES UN ANIMAL TRANSGNICO?
Hay varias definiciones para el trmino transgnico. Los expertos lo definen como
un animal al cual se le ha modificado deliberadamente su genoma, la totalidad del
material gentico responsable de las caractersticas hereditarias. Un animal
transgnico es uno cuyos genomas han sido cambiados para portar genes de otras
especies.
Por otra parte los crticos de los hbridos llaman a todo esto como la ciencia de
Frankenstein,diciendo que es inmoral mezclar ADN animal con humano.

En los organismos superiores, animales o vegetales, la informacin gentica se

transmite por mecanismos de reproduccin sexual, es lo que se conoce como
transmisin gentica vertical. Sin embargo, hace ya mas de unos veinte aos se
lograron obtener los primeros ratones transgnicos mediante transferencia gnica por
inyeccin directa de ADN extrao en un cigoto obtenido por fecundacin in vitro. Es
decir, se trataba de una transmisin gentica horizontal, tambin llamada
transgnesis.

Desde los aos 80 la transgnesis ha permitido a

los cientficos investigar en la mutacin de
ciertas especies.
Y el trmino transgnico no aparece en la
literatura cientficahasta 1982, poco despus de
que se publicarn algunos de los primeros
ratones transgnicos, del cual se trataba de un
ratn gigante al cual se le incorpor a su
genoma la hormona de crecimiento humana, lo
cual catapult el lanzamiento de la biotecnologa
animal.

Actualmente,existen ratas, pollos, conejos, cerdos, vacas,

ovejas, cabras, codornices y peces transgnicos, aunque los que
encontramos en mayor nmero son las ratas y ratones, que
representan un 95% del total.

CMO OBTENER UN ANIMAL

TRANSGNICO?
Primero identificacin y luego se debe aislar el gen que se quiere insertar en el
genoma del animal para modificarlo. Una vez el gen identificado, hay 3 diferentes
maneras de modificar la gentica de un animal.
1. Micro inyeccin en l proncleo de un zigoto.
2. Transmisin utilizando un vector retro viral.
3. Transformacin clulas embrionarias.

MICROINYECCIN EN L PRONCLEO DEL

CIGOTO
Esta tcnicaes fcilmente aplicable a gran
variedad de especies. El problema de ella es que
el transgen se inserta al azar, por ellosolo un 5%
de los vulos dan lugar a un animal vivo.
En esta tcnica se provoca unasobre ovulacin
de las hembraspara asegurar el proceso,se
extraen los vulos que sonfecundados in vitro.
En el ncleo de esos vulos se inyecta el nuevo
transgen.Los vulos modificados se reintroducen
en las hembras, previamente tratadas con
hormonas que induzcan el momento adecuado
de su ciclo ovrico para recibir el embrin y que
el embarazo progrese.

TRANSMISIN UTILIZANDO UN VECTOR RETRO

VIRAL
Con esta tcnica se consigue queel transgen est presente
en todas las clulas del individuo, pero, como en el caso de
la microinyeccin, el gen tambin se inserta al azar.
En esta tcnicase elige un virus benigno y se atena hasta
eliminar su carga viral. Se inserta en el virus el transgen. El
virus acta como un transporte de este transgeny
cuandocomienza a replicarse en el interior de las clulasel
transgen se libera.
La problemtica de esta tcnica es que el virus utilizado se
reproduzca en el organismo ypueda dar lugar a
enfermedades.

TRANSFORMACIN CLULAS
EMBRIONARIAS
Es elmtodo menos aleatorioy se utiliza cuando es importante dirigir las secuencias
genticas a lugares especficos.
Es posible modificar genticamente las clulas cuando estas estn en cultivo.Estas
modificaciones pueden ser eliminar o sustituir un gen. Las clulasmodificadas son
inyectadas en un los embrionesen fase blastocito. Los individuos que se originan
portan el gen solo en un porcentaje de sus clulas.

LA BIOTECNOLOGA HA INCORPORADO LA TRANSGNESIS ANIMAL CON

LOS SIGUIENTES FINES:

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Estudiar el desarrollo y la fisiologa del animal.

Estudiar las enfermedades y los tratamientos.
Producir productos biolgicos
Someter a un test productos biolgicos (Vacunas...)
Aumentar el peso de los animales y sus calidad.
Obtener los rganos que hay que trasplantar

1. FISIOLOGA Y DESARROLLO

Los animales transgnicos pueden servir para el estudio del control de la expresin de
los genes. Podemos tambin estudiar cmo ciertos genes intervienen en el
funcionamiento y el desarrollo del cuerpo.
Se puede estudiar el papel de un gen en el modificante o suprimindolo. As, se ha
estudiado el papel del gen HNF6 en el desarrollo del hgado y del pncreas.

2. ESTUDIO DE ENFERMEDADES
Se implantan transgenes para fortalecer el sistema inmunolgico del animal yhacerlo
resistente o inmune a ciertas enfermedades. En ciertos casosla inmunidad puede
transmitirse a sus descendientes. En otros casos se les implantan hormonas del
crecimiento para que crezcan ms y a mayor velocidad.
Adems se implementala modificacin gentica de animales para avanzar en el
tratamiento de enfermedades o generar medicamentos. Para el estudio de
enfermedadesse asla el gen humano causante de la enfermedad y se inserta en el
animal, para que este desarrolle la enfermedad de la misma manera que lo hara un
humano.

Existen ratones transgnicos que reproducen los sntomas de enfermedades humanas, como
ciertos cncer, fibrosis qustica, artritis reumatoide y el Alzheimer. Ejemplos:
- Se han creado ratones knockout que carecen de las enzimas vitales de reparacin del ADN
con el objetivo de estudiar si este fenotipo causa un incremento en la tasa de aparicin de
tumores.
- En el laboratorio de Philip Leader en Harvard se desarrollo el modelo de ratn transgnico
para la investigacin del cncer de mama, donde se hicieron dos grandes
descubrimientos, el primero fue la identificacin de un elemento regulador en el virus del
tumor mamario del ratn, que actuaba especficamente en las clulas de la glndula
mamaria; el segundo fue la identificacin y clonacin de oncogenes. Se encontraron casos
en los que un nico oncogn causaba el cncer en el tejido de la glndula mamaria.

- Otro ejemplo son los mosquitos transgnicos

desarrollados
por
la
empresa
britnicaOxitecdiseados para combatir eficazmente
enfermedades infecciosas transmitidas por estos
insectos, como la fiebre amarilla, el dengue o el virus
chikungunya. Los primeros ensayos en campo abierto
con estos mosquitos ya han sidoaprobados en Brasily
estn siendo estudiados en otros lugares del mundo
para erradicar estas enfermedades.
- En Argentina, en el ao 2002 se logr clonar por
primera vez tres terneras transgnicas que producen
hormona de crecimiento humana, vital para tratar a
las personas que padecen enanismo.

3. PRODUCCIN DE PRODUCTOS
BIOLGICOS
Estos animales transgnicos tambin pueden utilizarse como
'bioreactores'.
Son
animales
capaces
deproducir
medicamentos o protenas humanas que ayuden a tratar
ciertas enfermedades. Esta tcnica, llamada 'pharming', se
introduce la porcin de ADN que codifica ese producto en
partcula en el animal para que la produzca. Esta tcnica se
utiliza, por ejemplo, para la produccin de insulina y para el
tratamiento del enfisema se utiliza una protena humana, la a1-antitripsina. Pudimos producir ovejas transgnicas que
producen esta protena en grandes cantidades en su leche.

4. ENSAYO DE SEGURIDAD DE VACUNAS Y

PRODUCTOS QUMICOS
Se han desarrollado ratones transgnicos para ensayar las vacunas y productos
qumicos antes de utilizarlos en humanos. Tambin se emplean animales transgnicos
con genes que les hacen mas sensibles a la toxicidad de frmacos o productos
qumicos presentes en el ambiente, de forma que los ensayos se realizan con menos
animales y se obtienen resultados con mayor rapidez.
Ya existen dos medicamentos, aprobados por la EMA y la FDA, originarios de animales
transgnicos:ATryn, derivado de la leche de cabras transgnicas; y,Ruconest,
derivado de la leche de conejas transgnicas. Ambos productos se utilizan en
medicina para tratar pacientes con deficiencia congnita en antitrombina (ATryn) o
pacientes con angioedema hereditario (Ruconest).

5. DONACIN DE RGANOS
En los animales transgnicos son los se esta trabajando en Xenotransplantes. Donde
Se han desarrollado cerdos transgnicos para producir rganos para trasplantar; y
para esto Se implantan genes humanos en los animales para que estos se puedan
convertir enposibles donantes de rganos.
El rechazo hiperagudo que se producira por el trasplante de rganos de distintas
especies no se produce debido a que los animales llevan en su ADN el antgeno
regulatorio del complemento humano. A pesar de ello, el trasplante de rganos entre
animales y humanos puede provocar que se transmitan enfermedades animales a los
humanos.

6. INCREMENTAR EN ANIMALES DE GRANJA LA

CALIDAD Y CANTIDAD DE SUS PRODUCTOS
La ingeniera gentica en animales de granja se ha
dirigido a mejorar la productividad animal: se han
desarrollado vacas que producen ms leche ovejas que
producen ms lana y peces con mayor tasa de
crecimiento
Se podran intentar ganar el apoyo de los comerciantes
produciendo peces genticamente modificado. Se podr
modificar el crecimiento, la resistencia a las
enfermedades etc. Ms de 20 especies de peces ya han
sido creadas y dos de ellas esperan su aprobacin en
los Estados Unidos.

El mas famoso se desarrollo en 1989; el Salmn transgnico AquAdvantage, capaz de

crecer ms rpidamente que los salmones no transgnicos de piscifactoras y de
llegar al tamao comercial en la mitad de tiempo (apenas un ao y medio, frente a
los tres aos que requiere un salmn no transgnico para comercializarse),
afortunadamente o desafortunadamente por ciertos grupos sociales se a impedido
que llegue a las tiendas. Probablemente este salmn transgnico sea el animal y
producto biotecnolgico ms analizado, testado, revisado y comprobado de toda la
historia de la humanidad, ya que lleva muchos aos en investigacin.

Por ejemplo, los puerco en los que se introdujo el gen de

la hormona del crecimiento de la vaca para aumentarle la
produccin de carne, sufre de artritis, de herida, de
enfermedad de los riones y de los problemas de
fertilidad.
Por el contrario, la comercializacin de unos peces cebra
transgnicos con genes de protenas fluorescentes,
denominadosGlofhis, destinados a su venta para
acuarios,est permitida en EEUU desde 2003.

DESVENTAJAS DE LOS ANIMALES

TRANSGNICOS.
- Pocos fetos logran sobrevivir.
- Alteran significativamente la evolucin de las especies obteniendo
como consecuencia cambios imprevisibles en el equilibrio ecolgico.
- Al desarrollar en ellos la resistencia a la salinidad, a la sequa o a las
bajas temperaturas, puede ocasionar la invasin por parte de estas
especies dehbitatsque no les son propios y cuyo equilibrio se vera
entonces amenazado al desplazar otras especies o favorecer su
extincin.

- La modificacin gentica de virus cuya capacidad de

mutacin y combinacin los hace ya de por s
peligrosamente imprevisibles, puede dar lugar a la
aparicin de nuevas enfermedades o la transformacin de
otras ya existentes que modifican sus vas de contagio o
las especies a las que pueden afectar.
- Las nuevas protenas que se expresan cuando se insertan
genes de otras especies pueden desencadenar reacciones
alrgicas o hipersensibles en algunas personas.

TCNICA DEL DNA

RECOMBINANTE Y EL AMBIENTE:

BIORREMEDACIN


Los problemas de contaminacin actualmente estn recibiendo gran
atencin por parte de las autoridades ambientales en el mundo
entero.
Si bien los problemas de contaminacin no se pueden revertir, en la
actualidad existe otra alternativa: la BIORREMEDACIN

QU ES LA BIORREMEDACIN?

La
biorremedacin
es
unatecnologaemergente
que
utiliza
organismos
vivos(plantas, algas, hongosy bacterias) para absorber, degradar otrasformarlos
contaminantes y retirarlos,inactivarlos o atenuar su efecto en suelo, agua y aire.

TIPOS DE BIORREMEDACIN:

En los procesos de biorremendiacin generalmente se emplea mezclas de ciertos

microorganismos o plantas capaces dedegradaro acumular sustancias
contaminantes tales comometales pesados y compuestosorgnicosderivados de
petrleo o sintticos.

Bsicamente. los procesos de biorremediacin puede ser deTres

tipos:
1. Degradacin enzimtica

2. Remediacinmicrobiana

3. Remediacincon plantas (fitorremediacin)

LA DEGRADACIN ENZIMTICA
Este tipo de degradacin consisteen el empleodeenzimasenel
sitiocontaminadocon el findedegradarlas sustancianocivas.

Estas enzimas se obtienen en cantidades industriales por bacterias

que las producen naturalmente, o por bacteriasmodificadas
genticamente.
Por ejemplo, existe un amplio nmero de industrias de
procesamiento de alimentos que producen residuos que
necesariamente deben serposteriormentetratados.

REMEDIACIN MICROBIANA
En este tipo de remediacin se usan microorganismo directamente en el foco de la
contaminacin. Los microorganismos utilizados en biorremediacin pueden ser los
ya existentes (autctonos) en el sitio contaminado o pueden provenir de otros
ecosistemas, en cuyo caso deben ser agregados o inoculados.
Lades contaminacinse produce debido a la capacidad natural que tiene ciertos
organismos de transformarmolculas orgnicas en sustancias ms pequeas, que
resultan menos txicas.

La gran diversidad de microorganismos existentes ofrece

muchosrecursos para limpiar el medio ambiente y en la actualidad
esta rea est siendo objeto de intensa investigacin.
Existen, por ejemplo, bacterias y hongos que pueden degradar con
relativa facilidad el petrleo y sus derivados, benceno, tolueno,
acetona, pesticidas, herbicidas, entre otros.

 Los metales pesados como uranio, cadmio y mercurionoson

biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlos de tal
manera de aislarlos para que sean eliminados ms fcilmente.

REMEDIACIN CON PLANTAS

(FITORREMEDIACN)
La fitorremediacin es el uso de plantas para limpiar ambientes contaminados.
Aunque se encuentra en desarrollo, constituye una estrategia muy interesante,
debido a la capacidad que tiene algunas especies vegetales de absorber, acumular
y/o tolerar altas concentraciones de contaminantes como metales pesados,
compuestos orgnicos y radioactivos.
La fitorremediacin ofrece algunasventajasylimitacionesfrente a los otros Tipos de
biorremediacin:

VENTAJAS:

LAS PLANTAS PUEDEN SER UTILIZADAS COMO BOMBAS

EXTRACTORAS DE BAJOCOSTO PARADEPURARSUELOS Y AGUAS
CONTAMINADAS.

ALGUNOS PROCESOS DEGRADATIVOS OCURREN EN FORMA MS

RPIDA PLANTAS QUE CONMICROORGANISMOS.

ES UN MTODO APROPIADO PARA DESCONTAMINAR SUPERFICIES

GRANDES O PARA FINALIZAR LADESCONTAMINACIN DE REAS
RESTRINGIDAS EN PLAZOS LARGOS.

LIMITACIONES:
El proceso se limita a la profundidad de penetracin de lasraceso guas poco
profundas.
Los tiempos del proceso pueden ser muy prolongados.
La biodisponibilidadde los compuestos o metales es un factor limitante de la captacin.
Las plantas pueden incorporar las sustancias contaminantes mediante distintos
procesos que se representan en las siguiente ilustracin y se explica en la tabla que
contina:

APLICACIONES EN LA
AGRICULTURA

 EXISTEN TECNICAS DIRECTAS E INDIRECTAS

INDIRECTAS:
la transformacin de clulas mediada por Agrobacterium
tumefaciens.

PRINCIPALES APLICACIONES DE LA
TRANSFORMACIN MEDIANTE
AGROBACTERIUM

Transformacin de plantas:

 Transformacin de hongos.
La transformacin mediada por Agrobacterium ha tenido
aplicaciones en el rea de micologa. Se han transformado hongos
filamentosos como Aspergillus niger, Fusarium venenatum,
Trichoderma reesei, Colletotrichum hongos ectomicorrizales y
hongos
patgenos
humanos
como
Coccidiodes
immitis.
Paracoccidiodes brasiliensis (Leal et al., 2004).

TRANSFORMACIN GENTICA MEDIDA POR

A. RHIZOGENES

Es una bacteria Gram negativa

ha sido utilizado para la formacin e incremento de pelos radicales que han sido
apropiados para la produccin de metabolitos secundarios por su estabilidad y alta
produccin.

 DIRECTAS.
Electroporacin:
Se trata de un mtodo utilizado para introducir macromolculas
en clulas vegetales. Llamamos protoplastos a las clulas
vegetales desprovistas de su pared celular. Cuando estos
protoplastos son cultivados in vitro, pueden reconstituir su
pared, dividirse por mitosis y regenerar una planta entera.

MICRO INYECCIN

LIPOSOMAS