UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE
BIOLOGIA-MICROBIOLOGIA

COLIMETRIA:
RECUENTO DE
COLIFORMES TOTALES
Curso : Microbiologa Acutica

INTRODUCCION
Debido a que un gran nmero de enfermedades son
transmitidas por va fecal-oral utilizando como
vehculo los alimentos y el agua.
Es necesario contar con microorganismos que
funcionen como indicador de contaminacin fecal.
Estos deben de ser constantes, abundantes y
exclusivos de la materia fecal, deben tener una
sobrevivencia similar a la de los patgenos
intestinales y deben ser capaces de desarrollarse
extraintestinalmente.

INTRODUCCION
El grupo coliforme constituyen un grupo
heterogneo con hbitat primordialmente
intestinal que involucra la materia fecal, su
sobrevivencia y multiplicacin tambin se
observan en aguas potables.
Por lo que se les utiliza como indicador de
contaminacin fecal en agua; mientras
mayor sea el nmero, mayor ser la
probabilidad de estar frente a una
contaminacin reciente.

INTRODUCCION
El grupo de bacterias
coliformes totales el
cual comprende a todos
los bacilos Gramnegativos aerobios o
anaerobios facultativos,
no esporulados, que
fermentan la lactosa con
produccin de gas en un
lapso mximo de 48 h. a
35C 1C. Son 4
gneros principalmente:
Escherichia,
Enterobacter, Citrobacter
y Klebsiella.

Para su
estudio,
se
dividen
en dos
grupos:

El grupo de coliformes
fecales (ahora
llamados
termotolerantes), est
constituido por bacterias
Gram-negativas
capaces de fermentar la
lactosa con produccin
de gas a las 48 h. de
incubacin a 44.5
0.1C. Este grupo no
incluye una especie
determinada, sin
embargo la ms
prominente es
Escherichia coli.

INTRODUCCION

La demostracin y el recuento de
organismos coliformes, puede realizarse
mediante el empleo de medios de cultivo
lquidos y slidos con caractersticas
selectivas y diferenciales.

INTRODUCCION
Escherichia coli es un bacilo corto Gram negativo que se encuentra
clasificado dentro de la familia Enterobacteriaceae, existe como comensal
en el intestino delgado de humanos y animales. Posee cepas de E. coli
patgenas que provocan enfermedades diarreicas.
Este grupo de bacterias se encuentra constituido por las siguientes cepas:
E. coli enterotoxignica (ETEC),
E. coli enteropatgena (EPEC),
E. coli enterohemorrgica (EHEC),
E. coli enteroinvasiva (EIEC),
E. coli enteroagregativa (EAEC) y E. coli enteroadherente difusa
(DAEC).
Existen otras cepas que no han sido perfectamente caracterizadas; de las
cepas anteriores, las 4 primeras estn implicadas en intoxicaciones
causadas por el consumo de agua y alimentos contaminados.

FUNDAMENTO
La determinacin
de
microorganismos
coliformes totales
por el mtodo del
Nmero ms
Probable (NMP)

se fundamenta en
la capacidad de
este grupo
microbiano de
fermentar la
lactosa

con produccin de
cido y gas al
incubarlos a 35C
durante 48 h.,

Esta determinacin
consta de dos
fases, la fase
presuntiva y la
fase confirmativa.

utilizando un
medio de cultivo
que contenga sales
biliares.

FUNDAMENTO
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo
lauril sulfato de sodio el cual permite

la recuperacin de los microorganismos daados que se

encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de
utilizar a la lactosa como fuente de carbono.

Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo

caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo
permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de
tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.

FUNDAMENTO
La determinacin del nmero ms
probable de microorganismos
coliformes fecales se realiza a partir
de los tubos positivos de la prueba
presuntiva y se fundamenta en la
capacidad de las bacterias para
fermentar la lactosa y producir gas
cuando son incubados a una
temperatura de 44.5 0.1C por un
periodo de 24 a 48 h.

Finalmente, la bsqueda de
Escherichia coli se realiza a partir de
los tubos positivos de caldo EC, los
cuales se siembran por agotamiento
en medios selectivos y diferenciales
(Agar Mac Conkey, Agar eosina azul
de metileno) y posteriormente
realizando las pruebas bioqumicas
bsicas (IMViC) a las colonias tpicas.

OBJETIVOS

Evaluar la calidad sanitaria de muestras de

agua mediante la bsqueda de
microorganismos coliformes totales,
coliformes fecales y Escherichia coli.
Interpretar los resultados.

MATERIALES
Materiales de laboratorio
Muestra de Agua
Mecheros
Bombilla de succion
Pipetas
Tubos de ensayo con 10 ml de caldo brilla y
campanas durgham
Pipetas de 0,1;1 y 10 ml
Matraz de 250 ml (con 90 ml de agua estril)
Asa de Koll

MATERIALES
Caldo Brilla = Caldo Verde Brillante Bilis 2%. (en
gramos por litro)
En el medio de cultivo,
La peptona aporta los
nutrientes necesarios para
el adecuado desarrollo
bacteriano,
La bilis y el verde brillante
son los agentes selectivos
que inhiben el desarrollo
de bacterias Gram(+) y
Gram(-) a excepcin de
coliformes, y
La lactosa es el hidrato de
carbono fermentable.
*Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con
produccin de cido y gas.

MATERIALES
E.M.B. Agar (con Eosina y Azul de Metileno)
Es nutritivo por la presencia de
peptona
que
favorece
el
desarrollo
microbiano.
La
diferenciacin entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, est dada
por los indicadores eosina y azul
de metileno; stos ejercen un
efecto inhibitorio sobre una
amplia variedad de bacterias
Gram positivas. Muchas cepas de
Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un caracterstico brillo
metlico.
En este medio se obtiene
adems, un buen desarrollo de

MATERIALES

PROCEDIMIENTO

En este proceso se realiza modificaciones para bien de la practica.

PROCEDIMIENTO
SE PREPARA LA MUESTRA
EN EL CUAL SE TOMA 1ML
DE AGUA RESIDUAL EN
100ML DE AGUA
DESTILADA PARA QUE
ESTA NO ESTE MUY
CONCENTRADA.

PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO

RESULTADOS

RESULTADOS

GRACIAS