ASSALAMU ALAIKUM WR.

WB

Nama: Ade
irmawahyu
Nim: 70100113106
Kelas: farmasi b

Elektroforesis
Elektroforesis ini adalah bahwa DNA dapat
berimigrasi di dalam gel dalam bentuk
padatan yang di letakan dalam larutan
buffer atau penyangga yang di aliri arus
listrik.
Pergerakan ion-ion dibawah pengaruh
medan listrik.

Dua macam gel yang dapat digunakan

dalam elektroforesis :
1. Gel agarosa
2. Poliakrilamida
Fragmen DNA yang berukuran 0,1-20 kb
dapat di pisahkan dengan elektroforesis
gel agarosa,
Sedangkan fragmen yang berukuran 62000 pb dapat dipisahkan dengan
elektroforesis gel poliakrilamida.

Faktor-faktor yang mempengaruhi kecepatan

pergerakan DNA dalam elektroforesis
DNA memiliki bentuk atau kompormasi yaitu:
1. Berupa lingkran tertutup
2. Lingkaran terbuka atau kompormasi linier.
DNA ini ukuran nya sama tapi mempunyai
kompormasi yang berbeda, akan bergerak
dengan kecepatan yang berbeda

DNA plasmid harus dipotong dengan

menggunakan enzim resrtiksi yang
hanya memotong plasmid pada satu
tempat, sehingga bentuk plasmidnya
menjadi linier.
Kecepatan pergerakan dipengaruhioleh
-kosentrasi agarosa dalam gel
-kekuatan arus listrik yang digunakan
( kekuatan volgate)
-kekuatan ion buffer
-kosentrasi etidium bromida dalam gel

Pemisahan molekul dengan elektroforesis

Molekul DNA seperti dengan protein dan
banyak senyawa biologik lainya,
membawa muatan listrik ( muatan listrik
DNA adalah negatif). Bila melalui DNA di
tempatkan pada medan listrik maka
molekul DNA ini akan migrasi
menujunkutup positif
Penampakan molekul DNA dalam gel
hal ini dapat dilakukan dengan beberapa
cara:

1.

2.

Pengecatan. Cara ini mudah untuk melihat

hasil elektroforesis gel yaitu dengan
pengectan gel dengan senyawa yang
menyebapkan DNA dapat dilihat.
Autoradiografi DNA dilabel dengan radioaktif.
Kelemahan pada pengecatan ETBr adalah
terdapat keterbatasan sensitivitasnya.

Perkiraan ukuran molekul DNA

Dalam penggunaan elektroforesis gel akan
memisahkan molekul DNA dengan ukuran
yang berbeda.

Cara penentuan ukuran fragmen-fragmen

molekul DNA
Cara yang paling akurat untuk menentukanya
adalah dengan menggunakan rumus
hubungan matematik antara kecepatan
migrasi dengan berat molekulnya:
D= a-b ( log M)
KETERANGAN: D= Jarak migrasi
M=berat molekul
a dan b= kosentrasi pada kondisi
elektroforesis

Elektroforsis gel agarosa

Secara fisik , agarosa tampak seperti
serbuk berwarna putih yang sangat
halus.
Prosedur kerja elektrofaresis
Hal yang harus disiapkan
1.

Larutan EDTA 0,5 M dengan ph 8,0

2.

Buffer TAE

3.

Larutan etidium bromida (10 mg/ml)

4.

Pembuatan ioding buffer

5.

Larutan DNA standar

6.

Pembuatan gel agerosa

TERIMA KASIH