ESPECTROMETRIA DE

FLUORESCENCIA
ANA AGUIRRE RIVERA
IBAI DE VILLASANTE LLAQUET

INTRODUCCI
N
FLUORESCENCIA

FOSFORESCENCIA

QUE QUIERE DECIR QUE SN

FOTOLUMINISCENTES
LU
Z

ELEMEN
TO
ES
EXCITAD
O

RADIACIN
ELECTROMAG
NETICA

RADIAC
IN =
EMITE

EFECTOS LUMINISCENTES
GAS

LQUIDO

VAPORES
ATOMICOS
DILUIDOS

SOLIDO

COMPLEJOS O
SIMPLES
Atomos de
sodio
vaporizado
(orbital 3s)

Tiempo es minimo
(10-8 s)

Radiacin 580,5
nm
Atomos de
sodio
vaporizado
(orbital 3s se
excita para 3p)

Tiempo es minimo
(10-8 s)

Radiacin
Radiacin
Radiacin

Radiacin
Radiacin
Radiacin

Radiacin

= Fluorescencia
Fluorescencia
de Resonancia

ESTADOS EXCITADOS Y ORBITALES

ESTADO
TRIPLETE

ESTADO SINGULETE

DIFERENCIAS ESTADO TRIPLETE Y SINGULETE

ESTADO TRIPLETE

ESTADO SINGULETE

MEDICIN DE LA
FLUORESCENCIA

COMPONENTES
DETECTORES
FUENTES

CELULAS Y
COMPRATIMENTOS
DE CELULAS
FILTROS
MONOCROMADORES

APLICACIONES DE LA FLUOROMETRIA
Sustancias
Inorgnicas

Formacin
de
Quelatos

Algunos
aniones,
tales
como Fo
CN

Sustancias
Organicas

Analisi
indirectas

Anlisis
directo

La formacin de quelatos
fluorescentes por
combinacin de un in
metlico con un ligando
orgnico proporciona uno
de los mtodos ms
sensibles y selectivos
para la determinacin de

Qumica
Clinica
pertenecientes a
los elementos
Radiactivos
SinteticosCe, Eu, Marcadores
Tb, Dy y Tl
Fluorescentes
Para determinar
tumoraciones
O partes de ADN

Analisi
Forense

detectar
huellas
digitales
latentes por
fluorescencia

PRCTICA

Procedimiento 1.- Preparacin de la serie de soluciones Utilizando matraces y pipetas de doble aforo preparar
como mnimo 6 soluciones de calibracin que contengan entre 0 y 1000 PPB de sulfato de quinina a partir de la
solucin madre disponible. Antes de llevar a volumen con A.D. a cada una agregarle un 10% v/v de H2SO4 1M.

2.- Determinacin de los espectros y mximos de excitacin y emisin. Se tomar la solucin mas concentrada
de la serie utilizada para establecer la recta de calibracin. Fijando una longitud de onda de emisin a 450nm,
ranuras de entrada y salida de 5 nm y filtro de atenuacin al 1%, barrer el espectro de excitacin. Una vez
determinada la longitud de onda mxima para el monocromador de excitacin fijar la misma en ese valor y
barrer el espectro de emisin para obtener el espectro y el mximo de emisin. Seleccionando los valores
ptimos de excitacin y emisin se procede a realizar la cuantificacin.

3.- Preparacin de la muestra Eliminar el CO2 de una cantidad suficiente de muestra, ya sea por vaco,
ultrasonido, hirviendo o mediante burbujeo de gas inerte. Realizar una dilucin 1:100 a la muestra agregando
un 10%v/v de H2SO4 1M antes de llevar a volumen con A.D..

4.- Calibracin del sistema y medida Medir la intensidad de fluorescencia de todas las soluciones utilizando las
longitudes de onda seleccionadas en el punto -3-. Trazar la recta de calibracin y con la intensidad de
fluorescencia de la solucin conteniendo la muestra calcular la concentracin de dicha solucin.

5.- Calcular la concentracin en la muestra original. A partir de la concentracin de la solucin conteniendo la

muestra calcular la concentracin de quinina en la bebida sin diluir en mg/l.

GRACIAS!!!!