MICROCU

LTIVO

Aquino Prez Erikze

Cadena Campos
Alejandra
Cortes Flores Sandr
Loza Hernndez Kar

Objetivos
Ser capaz de realizar la
tcnica de microcultivo
Entender la eficacia de un
microcultivo para identificar
y clasificar un hongo
filamentoso.

Tcnicas para
observacin
microscpica de hongos
Tcnica de Montaje hmedo
Cinta adhesiva (Scotch
tape)
Tcnica de Gota Pendiente
Tcnica del Emparedado
Lmina desecada

Tcnica de montaje hmedo

Es un viejo
mtodo rpido
para preparar
colonias
de
hongos
para
examen
microscpico

Mtodo

1. Con
una aguja
doblada
se toma
una
pequea
proporci
n de la
colonia a
estudiar
incluyend
o una
pequea
proporci
n del
agar
subyacen

2. La
muestra
debe
tomarse
de un
sitio
intermedi
o entre el
centro y
la
periferia
de la
colonia.

3. Este
pequeo
fragment
o de
colonia y
el agar
de sostn
se
transfiere
n a un
porta
objetos el
cual
contiene
una gota
de
lactofenol
azul de

4. Se
presion
a la
prepara
cin con
la goma
de un
lpiz

Montaje Hmedo

Ventajas

Desventajas

Preparacin rpida y
fcil
Es suficiente para la
identificacin de
muchos hongos.
Dificultad para
conservar la
continuidad entre las
esporas, estructuras
con frutos e hifas
debido al riguroso
tratamiento.

Tcnica de gota pendiente

Es
til
para
seguir
la
evolucin completa de un
hongo.
Se emplea para observar la
germinacin de las esporas

Con un
sacabocados
se realiza un
pequeo
orificio

En un porta
objetos se
coloca un
poco de cera

De 2 cm de
dimetro y 1
cm de
profundidad

y una gota de
la muestra

En un cubre
objetos se
coloca un
poco de
vaselina

Colocar el
cubre objetos
con la
muestra
sobre el
porta objetos

Tcnica de cinta adhesiva o Scotch tape

Mtodo que puede

considerarse como
el
ms
simple,
econmico
y
adecuado para la
identificacin
de
hongos

Tcnica de cinta
adhesiva
Es superior a los
Ventajas
montajes por
diseccin
porque se
conserva la
yuxtaposicin
original de
esporas y
segmentos de
las hifas.

Desventa
Si la cinta no se
presiona
jas
firmemente
sobre la
superficie de la
colonia, la
muestra puede
no ser la
adecuada.

Depositar de
5a8
fragmentos
del hongo
por estudiar

Introducir en
incubar
el agar de 4
durante 7 a
a6
15 das a
cubreobjeto
25C
s estriles
en un
Retirar un
ngulo de
cubreobjetos de la
45
caja y colocar
sobre un
portaobjetos que
tiene una gota de
azul de algodn.

Tcnica del
emparedad
o

Tcnica del emparedado

Ventajas:
Se puede incubar
mas de una
muestra a la vez.
Se conservan
bien las
estructuras

Desventajas
:
Las colonias
se pueden
contaminar
fcilmente

Tcnica de la lmina
desecada

Se depositan
5ml de agua
en la caja

Colorar portaobjetos
sobre dos varillas de
vidrio y con una pipeta
estril se pone una capa
de agar

Se fija con una gota de alcohol

absoluto, se colorea con azul de
algodn, se deshidrata con alcohol,
se enjuaga con tolueno y se monta

Sembrar en el
centro un
fragmento del
cultivo e
incubar

Despus del desarrollo

del cultivo, se retira el
exceso de gelosa, y se
seca a 37C.

Microcultivo
Tambin es conocido como cultivo en
portaobjeto, es una tcnica idnea que
permite la observacin de las estructuras
microscpicas de hongos filamentosos que
se distinguen con facilidad sin distorsin,
alteracin o rompimiento de las mismas,
cuando el hongo se desarrolla directamente
debajo del cubreobjetos.
Forma parte de las pruebas para identificar
gnero y especie.

Mtodo
1.

Colocar
trozo de
papel
filtro

Colocar
par de
varillas o
tringulo
de vidrio
dentro de
la caja

Encima
de las
varillas
colocar
un
portaobjet
os

2.

En
condicione
s estriles
cortar un
cilindro de
agar PDA o
Sabouraud

Colocarlo
sobre la
superficie
del porta
objetos

3.
Inocular a partir
de las cepas
aisladas en
cuatro ejes del
borde del medio
de cultivo

4.

Colocarlo
de
Calentar un inmediato
cubreobjeto sobre la
superficie
s con
del agar
suavidad
pasndolo
con rapidez

5.
Cerrar la
caja Petri
e incubar
Agregar a
a
la caja
temperatu
Petri aguara
glicerina
ambiente
estril 5%
(o a 30C)
para
de 3 a 7
saturar el

6.

Revisar
diariamente
el crecimiento
del hongo

Cuando el
cultivo se
encuentre
maduro,
agregar de 1
a 3 mL de
formaldehdo
al 10% o
fenol, 30
min. antes

7.

Una vez
inactivada
s las
esporas,
retirar con
cuidado el

colocarlo
en un
portaobje
tos que
tiene una
o dos
gotas de
azul de

Sellar la
preparac
in con
esmalte
para
uas y
observar
a seco
dbil y a
seco

8.
Observar
al
Aplicar una o microsco
dos gotas de pio
azul de
algodn de
Retirar el
lactofenol al
agar del
portaobjetos y
portaobjetos
colocar encima
y depositar
un
en un vaso
cubreobjetos.
con fenol al
10%

Precauciones
Durante todo el proceso se debe
garantizar que el microcultivo est
cerrado y debe mantenerse abierto
el menor tiempo posible, nunca
introducir los dedos al interior de la
caja.

Medios de cultivo
empleados
Agar PDA
Agar Sabouraud
Extracto de malta
Agar Borelli
Medio de Czapek.

Utilidad de los reactivos.

Agua-glicerina: Se utiliza para
humectar la preparacin y as evitar
la desecacin.

Formaldehdo o fenol al 10%:

Son agentes fungicidas que
desnaturalizan sus protenas,
ocasionando dao a la membrana
celular.

Ventajas y Desventajas
del Microcultivo
Vent
No es idneo para un
diagnostico rpido.
ajas

Procedimiento idneo
para la identificacin de
estructuras fngicas.
Permite observar al
microscopio al micelio
en su conjunto no solo
una parte del mismo
como ocurre con el
mtodo de disociacin.
Permite la observacin
de microarreglos.
Es economico porue
minimiza el gasto de
medios de cultivo.

Desve
ntajas

Permite
observar las
estructuras de
los hongos
filamentosos
en forma casi
intacta.

Bibliografa
BonifazAlejandro,MicologaMdicaB
sica, Mndez Editores, Mxico, D.F.,
1994
KonemanR.,MicologaPrcticasde
laboratorio,EditorialPanamericana,A
rgentina,1993.