6-Dx LB Chikungunya

Colegio Mdico de Honduras / Sociedad
Hondurea de Enfermedades Infecciosas
Diagnstico de laboratorio
Dra. Maribel Rivera

Infectloga Pediatra
SHEI
Tipos de pruebas de laboratorio

disponibles
Para el diagnstico de CHIK se
utilizan tres tipos principales de
pruebas
Aislamiento viral
Reaccin en cadena de la polimerasa
con transcriptasa reversa (RT-PCR)
Serologia
ELISA IgM y IgG
Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.
Preparacin y respuesta ante la eventual introduccin del virus chikungunya en las
Amricas Washington, D.C.: OPS, 2011
Muestras requeridas
Las muestras generalmente son
Sangre total (suero)
LCR (Meningoencefalitis)
Liquido sinovial en caso de artritis con
Tejidos u rganos.
derrame
Poca informacin sobre la deteccin del virus por

aislamiento o RT-PCR.
La eleccin de la prueba de laboratorio se basa en

Origen de la muestra y el momento de recoleccin
de la muestra con relacin al comienzo de los
sintomas.
Aislamiento viral
Tipo de muestra a obtener sangre
total
Primera semana de la enfermedad
Transportada al laboratorio en frio
Temperatura + 2a + 8C o hielo seco
(48 horas)
Se puede inocular en una linea celular
susceptible o en ratn lactante.

Aislamiento viral
El CHIKV producir los efectos
citopticos tipicos (ECP) dentro de los
3 dias posteriores a su inoculacin en
una variedad de lineas celulares, que
incluyen
Clulas Vero
BHK-21 y
HeLa.

Aislamiento viral
El aislamiento del virus puede
realizarse en
Frascos de cultivo T-25 o
Viales shell
Ms sensible
Produce ECP antes que el aislamiento
convencional en frascos de cultivo.
Preparacin y respuesta ante la eventual introduccin del virus Chikungunya en las
Aislamiento viral
El aislamiento del CHIKV debe
confirmarse por
Inmunofluorescencia (IF) con antisuero
especifico para CHIKV o
RT-PCR del sobrenadante del cultivo
El aislamiento del virus slo debe

realizarse en laboratorios con nivel de
bioseguridad 3 (BSL-3) para reducir el
riesgo de transmisin viral.
RT-PCR
Se han publicado diversas pruebas diagnsticas
de RT-PCR para la deteccin del ARN del CHIKV
Gen de envoltura E1
Pastorino et al., 2005
Gen de proteina no estructural nsP1
Carletti et al.,
2007
Gen de proteina no estructural nsP2
Ho et al., 2010
Se deben utilizar pruebas en tiempo real con sistema

cerrado debido a que presentan mayor sensibilidad y
menor riesgo de contaminacin
Caglioti C, Lalle CL., Castilletti C, et al. Chikungunya virus infection: an overview. NEW
MICROBIOLOGICA, 36, 211-227, 2013
Pruebas serolgicas
Para el diagnstico serolgico se
utiliza el suero obtenido de sangre
total
Prueba de inmunoabsorcin enzimtica
(ELISA) y
Prueba de neutralizacin por reduccin
de placas (PRNT).
La muestra debe ser transportada a

28C,
Preparacin
y respuestasin
ante la congelar.
eventual introduccin del virus chikungunya en las
Pruebas serolgicas
El diagnstico serolgico puede
hacerse por
Demostracin de anticuerpos IgM
especificos para CHIKV o
Aumento de 4 veces en el titulo de PRNT
entre muestras de fase aguda y fase
convaleciente.
PRNT: Prueba de neutralizacin por reduccin de
placas

Pruebas serolgicas
Se requiere PRNT para confirmar los
resultados de MAC-ELISA
Reactividad cruzada en MAC-ELISA
Con algunos miembros del serogrupo del virus
Semliki Forest (SFV)
La prueba de PRNT deber incluir siempre

otros virus del serogrupo SFV para validar la
especificidad de la reactividad
Por ej. virus Mayaro
PRNT: Prueba de neutralizacin por reduccin de placas
Pruebas serolgicas
Suero de la fase aguda inmediatamente
despus del inicio de la enfermedad y
Suero de la fase convaleciente 1014 dias
despus
Generalmente se desarrolla la IgM especifica
para CHIKV y anticuerpos neutralizantes hacia
el final de la primera semana de la enfermedad.
Se deben obtener muestras de la fase
convaleciente en pacientes cuyas muestras de
la fase aguda fueron negativas.
Para la recoleccin del

suero
Recoger de forma asptica 45 ml de sangre
venosa en un tubo sin anticoagulante
Permitir que la sangre se coagule a temperatura
ambiente
Centrifugar a 2,000 rpm para separar el suero.
Recolectar el suero en un vial limpio y seco.
Todas las muestras clinicas deben estar
acompaadas de informacin clinica y
epidemiolgica.
Transporte de muestras
Transportar las muestras al laboratorio a 28C
(refrigerador porttil) lo ms rpidamente posible.
No congelar la sangre total
Si se prev una demora mayor a 24 horas para el
envio de las muestras al laboratorio, el suero
debe
separarse y conservarse refrigerado
Las muestras de suero para aislamiento viral y
diagnstico molecular se deben conservar
congeladas
20C para almacenamiento a corto plazo o
70C
para almacenamiento a largo plazo)
Vigilancia de Laboratorio segn escenario

epidemiolgico
Escenario
epidemiolgico
Sin evidencia
de
transmisin
Sospecha de
enfermedad
por
Chikungunya
Prueba a realizar
IgM ELISA
IgG ELISA
Muestras a evaluar
Todas las muestras

de pacientes que
presentan
enfermedad
clinicamente
compatible
IgM ELISA
Todas las muestras
IgG ELISA
de pacientes que
ELISA RT-PCR
presentan
en tiempo real enfermedad
Aislamiento
clinicamente
viral
compatible
Biblioteca Sede OPS - Catalogacin
en la fuente Organizacin Panamericana
de la Salud. Preparacin y
respuesta ante la eventual introduccin del virus chikungunya en las Amricas Washington, D.C.: OPS,
Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en
la fuente Organizacin
Prueba
de Panamericana de la Salud. Preparacin y respuesta ante la
2011
eventual introduccin del virus chikungunya en las Amricas Washington, D.C.: OPS, 2011
Vigilancia de Laboratorio segn

escenario epidemiolgico
Escenario
epidemiolgico
Transmisin
Continua.
Brotes
peridicos (Una
vez que se haya
detectado CHIK
en un rea) o
vigilancia activa
en reas
cercanas a la
transmisin de
CHIK
Prueba a realizar Muestras a

evaluar
IgM ELISA
IgG ELISA
RT-PCR en
tiempo real
Aislamiento viral
limitado
Subgrupo de
muestras de
casos tipicos de
CHIK, de
acuerdo a la
capacidad del
laboratorio y a la
situacin
epidemiolgica.
Se deben
analizar las
muestras de
todos los casos
atipicos o graves

Interpretacin de los resultados

Resultados tipicos de las muestras analizadas

en distintos momentos de la infeccin
Das desde el Pruebas virolgicas
inicio de la
enfermedad
Dia 1 -3
Pruebas
serolgicas
RT-PCR= Positivo
IgM=
Aislamiento= Positivo Negativo
PRNT=
Negativo
IgM= Positivo
RT-PCR= Positivo
PRNT=
Dia 4 - 8
Aislamiento=
Negativo
Negativo
IgM= Positivo
RT-PCR= Negativo
PRNT=
> Dia 8
Aislamiento=
Positivo
Preparacin y respuesta Negativo
ante la eventual introduccin del virus chikungunya en las
Resumen de aspectos de laboratorio

Se dispone de tcnicas moleculares y
serolgicas para el diagnstico de
laboratorio de la infeccin por CHIKV.
Chikungunya (CHIKV), confirmacin

de infeccin reciente
Aislamiento del virus, incluyendo
identificacin confirmatoria (IF, RTPCR o secuenciado)
Deteccin de ARN del Chikungunya
mediante RT- PCR en tiempo real
Chikungunya (CHIKV), confirmacin

de infeccin reciente
Demostracin de seroconversin o
incremento de 4 veces los titulos de
PRNT, HI o ELISA entre las muestras
ontenidas en la fase aguda y
convaleciente

Durante un brote, los laboratorios
debern desarrollar, junto con otros
colaboradores de la salud pblica,
planes de triaje de muestras para
evitar la sobrecarga en los
laboratorios.

Los laboratorios tienen un papel
clave en la vigilancia de la
introduccin y diseminacin del
CHIKV
Es necesaria la capacitacin continua
de los laboratorios para la deteccin
del CHIKV en toda la Regin.

Es importante la colaboracin para
que los laboratorios asociados de la
red (laboratorios de salud pblica)
puedan compartir los materiales.
V A A V IA J A R A L C A R IB E ?
L o s M O S Q U IT O S
c o n ta g ia n e n fe rm e d a d e s c o m o
la CHIKUNGUNYA
y el DENGUE.
Los mosquitos pican

de dia y de noche.
Protjase
para evitar las
picaduras de
mosquitos.
N O D E J E Q U E L O S M O S Q U IT O S L E A R R U IN E N E L V IA J E .
Para obtener ms informacin llame al 800-CDC-INFO (232-4636) o
visite www.cdc.gov/ travel.
U.S. Department of
Health and Human Services
Centers for Disease
Control and Prevention

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Tipos de pruebas de laboratorio

Poca informacin sobre la deteccin del virus por

La eleccin de la prueba de laboratorio se basa en

Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.

Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.

El aislamiento del virus slo debe

Pastorino et al., 2005

Gen de proteina no estructural nsP1

Gen de proteina no estructural nsP2

Se deben utilizar pruebas en tiempo real con sistema

La muestra debe ser transportada a

Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.

La prueba de PRNT deber incluir siempre

Para la recoleccin del

Vigilancia de Laboratorio segn escenario

Todas las muestras

Vigilancia de Laboratorio segn

Prueba a realizar Muestras a

Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.

Interpretacin de los resultados

Biblioteca Sede OPS - Catalogacin en la fuente Organizacin Panamericana de la Salud.

Resultados tipicos de las muestras analizadas

Resumen de aspectos de laboratorio

Chikungunya (CHIKV), confirmacin

Chikungunya (CHIKV), confirmacin

Resumen de aspectos de laboratorio

Resumen de aspectos de laboratorio

Resumen de aspectos de laboratorio

Los mosquitos pican

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