Inmunohistoqumica

aplicada en musculo
Jorge Carrasco Sanhueza
Tecnlogo Mdico
Morfofisiopatologa y Citodiagnstico
Hospital Dr. Luis Calvo Mackenna

Sumario

Generalidades del tejido muscular

Aplicaciones Diagnosticas de la IHQ
Formas de procesamiento
Procedimiento de tcnica
Anticuerpos utilizados

Generalidades del tejido

muscular
Tejido altamente
mesodermo

especializado,

deriva

del

Responsable de las fuerzas de contraccin del

organismo
Nomenclatura especfica:

Clula muscular fibra muscular

Membrana plasmtica Sarcolema
Citoplasma sarcoplasma
Retculo
endoplasmatico
liso

sarcoplasmico
Mitocondrias sarcosomas

retculo

Generalidades del tejido

muscular
Se
encuentran
coordinadas
conjunto con tejido conectivo:
Fibras colgenas
Reticulares
Elsticas

en

Presentan
una
alta
irrigacin
sangunea
Presentan terminaciones nerviosas

Fibras reticulares del

sarcolema e irrigacin del
musculo

Tejido muscular: tipos

Musculo esqueltico
Estriado
Voluntario
Permite
movimiento
aparato locomotor

Musculo liso
No posee estras
Forma parte de las vsceras
Bajo control autnomo y
hormonal

del

Musculo cardiaco
Caract.
De
musculo
esqueltico y estriado
Permite contraccin rtmica
continua del corazn

Tejido muscular:
organizacin

El TM Esqueltico se organiza mediante

agrupaciones de fibrillas musculares (clulas
musculares)
Esta agrupacin es mediada por:
Tejido conectivo empaquetan las fibras
formando paquetes mioconectivos
Sistema de protenas de unin permiten la
unin molecular del sarcolema al tejido conectivo
Ambas permiten la trasmisin de las fuerzas de
tencin de los huesos que unen

Paquetes mioconectivos:
epimisio perimisio endomisio

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ

Tipificacin, diagnostico y tratamiento

Tumores

Desmoide
Fibromatosis
Rabdomioma
Rabdomiosarcoma

Distrofias
Distrofia muscular de Duchenne
Distrofia miotnica de Steiner
Distrofia muscular de Becker

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Fibromatosis
tumores

Grupo de proliferaciones de fibroblastos

del
tejido
conectivo
que
tienen
crecimiento infiltrativo, tendencia a la
recidiva, sin heterotipa ni metstasis.
Pueden ser:
superficiales de crecimiento lento y tamao
pequeo
Profundas asociadas a tejido muscular de
fibrosarcomas tumor desmoide

Fibromatosis mamaria

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Tumor desmoide
tumores

neoplasia fibrosa benigna originada de

las estructuras msculo-aponeurticas
del cuerpo.
Se caracteriza por crecimiento de
tejido fibrosos, duro, generalmente
bien diferenciado e infiltrativo.
Estos tumores estn constituidos por
la
lenta
proliferacin
de
miofibroblastos diferenciados.

Tumor desmoide

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
rabdomioma
tumores
tumor benigno muy infrecuente, considerado
veces una malformacin

rabdomiosarcoma
tumor maligno ubicado preferentemente en
envolturas
testiculares,
retroperitoneo,
extremidades.
Formado por clulas musculares estriadas,
en general inmaduras y polimorfas.
Requiere diagnostico diferencial con Tumor
de clulas pequeas redondas y azules

Rabdomioma /
Rabdomiosarcoma

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Enfermedades degenerativas primarias del
Distrofias
musculares
msculo esqueltico,
que tienen una base
gentica.

Grupo heterogneo de trastornos hereditarios

que cursan con debilidad y atrofia musculares
Las mas comunes son ligadas al cromosoma X,
en menor grado las hay autonmicas recesivas
Requieren un diagnostico diferencial con
miopatas
mitocondriales
y miopatas
metablicas

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Distrofias
Distrofia muscular
de Duchenne
musculares

trastorno
hereditario
ligado
al
cromosoma X.
Es la mas frecuente en nios
Causa destruccin progresiva del
msculo, y se asocia con la ausencia
de una protena muscular, la
distrofina

Distrofia muscular de
Duchenne
HE
GOMORI

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Distrofia miotnica de Steinert
Distrofias musculares
trastorno
hereditario
ligado
al
cromosoma X.
Se presenta mayoritariamente en adultos
Presenta un relajamiento anormalmente
lento de los msculos tras la contraccin,
y la disminucin irregular del tamao de
las fibras de ciertos msculos.
La distrofina se encuentra anmala

Distrofia miotnica de
Steinert

Aplicaciones
Diagnosticas de la IHQ:
Distrofia muscular de Becker
Distrofias musculares

trastorno
hereditario
ligado
al
cromosoma X.
De aparicin mas tarda que la de
Duchenne
Caracterizado
por
debilidad
en
msculos proximales de los miembros
inferiores.
La disfrofina es anmala estando
defectuosa o en pequea cantidad

Formas de
procesamiento

Toma de muestra
Segn clnica: (tipo de patologa) se
proceder
a
biopsiar
para
un
procesamiento diferido o mediante
congelacin
Tumores fijacin en Formalina
tamponada
Distrofias
Miopatias

congelacin

Formas de
procesamiento

Toma de muestra: Tumores

Biopsias excisionales
Fijacin:
formaldehido 10%
tamponada

Rabdomiosarcoma peditrico

Formas de
procesamiento

Toma de muestra: Miopatiasdistrofias

Biopsias por sacabocados o incisional

Formas de
procesamiento
Toma de
distrofias

muestra:

Miopatias-

Fijacin:
Congelacin en alcohol isopentano
enfriado en nitrgeno liquido

Formas de
procesamiento
Toma de muestra: Miopatias-distrofias

Requieren aparte de la IHQ, tcnicas histoqumicas

enzimticas necesarias para poder emitir un
diagnostico final

ATPasa
COX
SDH
NADH
Fosforilasa
Fosfatasa Acida
Fosfatasa alcalina

Estas enzimas son hidrosolubles y sensibles en

solventes orgnicos y T .

Procedimiento de tcnica
Fijacin en
formalina
1.Bloqueo de peroxidasa
2.Recuperacin
antignica
3.Bloqueo de protenas
4.Incubacin Ac. 1
5.Sistema de deteccinrevelado
6.Contraste con H.
7.Deshidratar, aclarar y
montar en medio
anhidro

Fijacin por
congelacin
1.Postfijacin en metanolacetona 1:1
2.Bloqueo de protenas
3.Incubacin Ac. 1
4.Sistema de deteccinrevelado
5.Contraste con
Hematoxilina a eleccin
6.Deshidratar, aclarar y
montar en medio anhidro

Procedimiento de tcnica
Fijacin en formalina
1.Bloqueo de peroxidasa

Para evitar tincin de

fondo por eritrocitos y
PMN.

2.Recuperacin
antignica

Para revertir el
enmascaramiento
antignico causado por
la formalina

Fijacin por
congelacin
1.Postfijacin en
metanol-acetona 1:1

Permite una fijacin

ideal para protenas
de
Citoesqueleto
Sarcolema
Y Extracelulares
asociadas

Procedimiento de tcnica:
pasos crticos
Fijacin en formalina
1.T de fijacin apropiada
2.Temperaturas de
procesamiento
3.Recuperacin
antignica apropiada
4.Respetar lavados
5.Dilucin de Ac T
incubacin
6.Sistema de deteccinrevelado

Fijacin por
congelacin
1.Lavados con extremo
cuidado,
pese a la adherencia de
portaobjetos, presentan
un % de
desprendimiento mucho
mayor a cortes en
parafina
Dilucin de Ac T
incubacin
Sistema de deteccinrevelado

Sistema de protenas de
unin del musculo

Sistema de protenas de
unin del musculo

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

Actina musculo especifica

Actina musculo liso
Desmina
Disferlina
Distrofina 1, 2 y 3
Emerina
Merosina
Miogenina
Mioglobina
MyoD1
Sarcoglicano

Anticuerpos Utilizados
Ac usados en
fijacin con
formalina
Actina musculo
especifica
Actina musculo liso
especifica
Desmina
Merosina
Miogenina
Mioglobina
MyoD1

Ac usados en
fijacin por
congelacin
Disferlina
Distrofina 1, 2 y 3
Emerina
Sarcoglicano

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

ACTINA MUSCULO ESPECIFICA (HHF35)

La Actina, una protena citoesqueltica ubicua
altamente conservada de las clulas musculares
y no musculares
Especificidad
no reacciona con la a-actina de origen no
muscular (clulas endoteliales).
Reacciona con isotipos de a-actina y g-actina de
msculo liso, esqueltico y cardaco.
Patrn de marcacin Citoplasmtico
Controles Msculo o apndice

Actina musculo
especifica (HHF35)

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

ACTINA MUSCULO LISO ESPECIFICA (1

A 4)
Protena del Citoesqueleto de todo tejido
muscular liso
Especificidad
Isoformas de la alfa-actina musculo liso
Reacciona con clulas musculares lisas de
vasos y diferentes parnquimas
Patrn de marcacin Citoplasmtico
Controles Apndice o leiomioma

Actina musculo liso

especifica

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

Desmina
protena de tipo III de los filamentos intermedios
del citoesqueleto intracelular en particular de
clulas musculares, tanto estriadas como lisas
Especificidad
Marca las clulas del msculo liso y estriado, as
como las clulas mesoteliales, y constituye una
herramienta til para la identificacin de
rabdomiosarcomas, leiomiomas y mesoteliomas.
Patrn de marcacin Citoplasmtico
Controles Apndice

desmina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

DISFERLINA
Protena asociada a la reparacin del musculo
esqueltico, los defectos en el gen de la
disferlina resultan en dos distrofias musculares.
Especificidad
Reacciona con la molcula Disferlina del musculo
esqueltico
Patrn de marcacin Principalmente de
membrana, en menor grado Citoplasmtico
Controles

musculo
procesado
congelacin / en defecto control negativo

por

Disferlina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

DISTROFINAS 1, 2 Y 3
Familia de protenas de transmembrana (, , , or )
envueltos en un complejo de protenas responsables de
conectar el citoesqueleto de las fibras musculares
con la matriz extracelular, previniendo el dao del
sarcolema de la fibra muscular tras fuerza mecnica
ejercida durante las contracciones musculares
La mutacin de los genes , , or genes (no ) que
codifican estas protenas estn asociados con distrofia
muscular
Patrn de marcacin Membrana
Controles musculo procesado por congelacin / en
defecto control negativo

distrofina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

EMERINA
protena de la membrana nuclear en
vertebrados. Este media el anclaje de la
membrana nuclear al citoesqueleto

Patrn de marcacin
nuclear

membrana

Controles musculo procesado por

congelacin / en defecto control negativo

Emerina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

MEROSINA
Reacciona intensamente con la cadena alfa 2
(merosina) de la laminina en msculo esqueltico
humano
Especificidad
Reacciona intensamente con la cadena alfa 2
(merosina) de la laminina en msculo esqueltico
humano
Patrn de marcacin marcacin de matriz
extracelular de msculos
Controles musculo procesado por congelacin /
en defecto control negativo

Merosina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

MIOGENINA
El gen de la miogenina integra una familia de
genes reguladores miognicos, incluidos MyoD,
myf5 y MRF4.
Codifican un conjunto de factores de transcripcin
esenciales para el desarrollo del msculo.

Patrn de marcacin nuclear y en menor

grado citoplasmatica
Controles rabdomiosarcoma, tumor de willms,
musculo fetal.

miogenina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

MIOGLOBINA
Hemoprotena muscular, estructural y
funcionalmente muy parecida a la
hemoglobina, contiene un grupo hemo con
un tomo de hierro, y cuya funcin es la
de almacenar y transportar oxgeno.
Patrn de marcacin citoplasma
Controles msculo

mioglobina

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

MyoD1
protena humana con un importante papel en la
regulacin de la diferenciacin del tejido
muscular.
Especificidad
Negativa para tejido muscular maduro, muy
intenso
en
celulas
tumorales
de
rabdomiosarcomas
Patrn de marcacin nuclear
Controles rabdomiosarcoma

MYOD1 en
rabdomiosarcoma

Anticuerpos Utilizados
en tejido muscular

Sarcoglicano
Forma parte del complejo de protenas
responsables de conectar el citoesqueleto de las
fibras musculares con la matriz extracelular,
Especificidad
El clon Ad1/20A6 detecta la protena alfasarcoglicano (adhalina) en el sarcolema de las
fibras musculares esquelticas y cardacas.
Patrn de marcacin membrana
Controles

musculo
procesado
congelacin / en defecto control negativo

por

sarcoglicano

APLICACIN:
RABDOMIOSARCOMA

Tumor maligno indiferenciado de tejidos blandos

que afecta generalmente a nios.
Puede afectar estructuras de la cabeza y cuello,
aparato genitourinario, y extremidades.
Bajo la HE la morfologa indiferenciada de sus
clulas hace imposible determinar a que tipo de
patologa corresponde.
La ihq permite por lo tanto, determinar con
ciertos marcadores la estirpe del tumor

HE de rabdomiosarcoma

PANEL BASICO Y
ESPECIFICO
Marcador/Patologa

Leiomioma
s

Leiomiosarcomas

Rabdomiosarcom
a

M. Cardiaco

Actina Muscular
Especfica

Desmina

Miogenina

+ (90%)

MyoD1

Mioglobina

+ (40%)