Transformation

cont

anti trombin dimurnikan

dari lisat menggunakan
Ni2 + - NTA. mengikat
resin (QIAGEN),
PEMURNIAN, dicuci
dengan 4 ML, DARI 1X Ni2
+ - NTA ikat penyangga
(300mm Nacl, 50 mM
natrium fosfat Buffer, 10
mM imidazol, pH 8,0)
disentrifugasi pada
1000rpm selama 5 menit,
dan lapisan atas
dihilangkan.

4 ml lisat
dimasukkan
kedalam pasta
Ni2+-NTA Hisbind
kemudia n
dicampur by
shaking pada 4 0 C
selama minimal 60
menit.

Protein
Elutions yang
Purification
didialisis
terhadap 1L

dingin 1X PBS
semalam (dialisis
ukuran tubing 14.3mm, berat
molekul terputus 1214 KDa).
kemudian dimasukkan
ke dalam coulumn
polypropylene sekali
pakai (1-5 ml Volume
bed; Pierce
Bioteknologi), dialirkan
(aliquot diambil untuk
analisis SDS-PAGE) dan
3 dicuci dengan Ni2 +
-NTA Wash Buffer
(300mm NaCl , 50mm
natrium fosfat Buffer,
20mm imidazol, pH 8,0),
(aliquot yang sudah di
cuci diambil untuk

imidazole
yang bebas
dihilangkan
dari sampel
dengan di
dialisis
pada 4C
dengan
buffer
pilihan.