MEDIOS DE

CULTIVO

Los Medios de cultivo son sustratos o soluciones de

nutrientes en los que crecen y se multiplican los
microorganismos en el laboratorio, con el objeto de
aislar las diferentes especies bacterianas.

CONSTITUYENTES
DE
LOS
MEDIOS
DE
CULTIVO
BACTERIOLGICO

Fuentes de energa: carbono,nitrgeno.

Sales minerales: Azufre y fsforo,

Iones metlicos: Sodio, potasio, magnesio. A

concentraciones mas bajas: zinc, manganeso, cobre, cobalto,
molibdeno.

Factores de crecimiento: Cierto tipo de aminocidos ejemplo

cistina, sangre, suero, estracto de levadura.

Factores de arranque: Sustancias que permiten a la bacteria

salir de la fase latente y comenzar con la fase de crecimiento
exponencial Ejm. Algn ion que estimula el crecimiento.

Factores Inhibidores: Sirven para inhibir el crecimiento de

determinadas especies bacterianas no deseadas ejemplo
colorantes de anilina (Ejm. verde brillante o eosina), metales
pesados (Ejm. bismuto) sustancias qumicas (Ejm. azidas,
citrato, selenito). Agentes antimicrobianos (p.ej. neomicina ,
colistina, vancomicina, cloranfenicol).

Entre las condiciones Fsico-qumicas apropiadas de un medio de

cultivo tenemos:
1.Temperatura
2. Grado de humedad
3. pH
4. Presin Osmtica
5. Presencia y ausencia de oxgeno.

La temperatura es uno de los factores ambientales mas importantes que

afectan el crecimiento y supervivencia microbiana.
Siempre se deber mantener la temperatura apropiada segn la especie
microbiana.
Las bacterias psicrfilas crecen a temperaturas menores de 20C.
Las bacterias mesofilas crecen entre 18 a 45C.
Las bacterias termfilas crecen por encima de los 45C.
Las bacterias patgenas para el hombre suelen crecer a una temperatura
ptima de 37C.

Se suele trabajar en condiciones isotnicas aunque existen

bacterias que pueden crecer a condiciones algo superiores.
Las bacterias halgenas su crecimiento se produce
especialmente a concentraciones altas de cloruro de sodio,
Staphylococcus es capaz de crecer a 7.5% ClNa. Las bacterias
no suelen tolerar las grandes concentraciones salinas, de all
que la salazon es un buen mtodo de conservacin.

PH
Optimo cerca la neutralidad.
Existen bacterias que pueden crecer pH bajo Tiobacilos, otros pH
alcalinos pH8 Proteus, pH9 Vibrio.
En los medios de cultivo puede aparecer variaciones de pH
como consecuencia del metabolismo que se produce en la
degradacin de nutrientes y fermentacin glucosdica.

PRESENCIA Y AUSENCIA DE OXIGENO

Los microorganismos varan en sus necesidades o
tolerancia de oxigeno. Aerobios: son capaces de
crecer en presencia de oxigeno, microaerofilos:
necesitan
menor
proporcin
de
oxigeno.
Anaerobios: crecen con absoluta o
relativa
ausencia de oxigeno. Anaerobios obligados solo
se desarrollan en ausencia de oxigeno y
Anaerobios facultativos crecen en aerobiosis y
anaerobiosis.

Entre los requerimientos no energticos de los

medios de cultivo tenemos:
1. Fuente de azufre
2. Fuente de fsforo
3. Iones metlicos
4. Factores de crecimiento
5. Factores de arranque
6. Factores inhibidores

1. Fuente de azufre
Todos los microrganismos que utilizan en su metabolismo azufre
lo hacen mayoritariamente en forma de sulfatos, a veces en
forma de tiosulfatos y en otras ocasiones lo pueden obtener a
partir de algn aminocido, ejemplo: metionina, cisteina,
tiamina, etc.
Agar SIM
Agar TSI
Agar XLD

Agar TSI o KIA

SIM

XLD

2. Fuente de fsforo
En general, las bacterias que utilizan el fsforo lo suelen hacer
en forma de fosfatos.

3. Iones metlicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de iones a concentraciones muy
bajas. Por ej: el Sodio, el Potasio, Magnesio, Hierro,etc.
Tambin se encuentra otro tipo de iones metlicos a Cobalto, Molibdeno.
Estos iones son esenciales para el crecimiento microbiano y dependiendo de su
concentracin pueden inhibir el crecimiento de otros, como el caso del sodio que a
concentraciones altas inhibe el crecimiento de un tipo de microorganismo y facilita
el crecimiento de otros.
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite el crecimiento de
Staphylococus.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite el crecimiento del
Enterococus.

4. Factores de Crecimiento
No todas las bacterias son capaces de crecer sobre medios donde se encuentran
cubiertas las necesidades elementales.
Existen bacterias que an as no crecen en tales medios o, si lo hacen, es muy
lentamente. A este tipo de bacterias les hace falta adems una serie de
componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de fabricar por s
solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algn tipo de aminocido de bacterias muy exigentes o incluso
vitaminas, bases pricas o pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, cido glutmico y cido nicotnico para el
crecimiento de Xanthomonas.

5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir a la bacteria en estudio, salir de su fase de
latencia y comenzar su fase de crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de energa glucosa que es utilizado por las
bacterias.
Un factor de arranque puede ser una fuente no energtica como algn in que
estimule el crecimiento.

6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algn tipo de
microorganismo por bloqueo de sus procesos metablicos.
Los antibiticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sdica inhibe el crecimiento de los Gramnegativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento bacteriano de
los Grampositivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Grampositivos.
Las sustancias inhibidoras son muy tiles para la identificacin y tipificacin de
pruebas bioqumicas de las bacterias.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante

Por su origen
Naturales
Artificiales o Sintticos :
Por su consistencia:
Lquidos: soluciones acuosas, ejm. Caldos nutritivos)
Slidos : Son los medios lquidos ms agar agar: agr nutritivo y agr
sangre.
Semislidos: Son los medios que se hallan en un estado entre los
dos primeros, ejm, estudios de motilidad.
Por su objetivo
Medios de transporte:Cary-Blayr, Hajna, Stuard.
Medio de enriquecimiento
Medios de aislamiento
Medios de identificacin
Medios especializados

MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que tambin se denominan caldos, no contienen
agar y su composicin, adems de agua suele contener al menos
una fuente de carbono, sales minerales, y, en algunas ocasiones
segn las caractersticas del medio, factores de crecimiento,
vitaminas, peptonas, ciertos aminocidos, etc. Son de gran utilidad
para la realizacin de recuentos bacteriolgicos por turbidimetra,
especialmente til en levaduras, para la realizacin de inculos,
para obtener productos metabolitos primarios o secundarios,
creados por los propios microorganismos como, por ejemplo,
antibiticos, cidos lcticos, etc.
Caldo MRVP, para investigar la ruta utilizada en la degradacin de
glucosa
Caldo Peptona, para investigar la produccin de Indol.
Caldo Lactosado, para investigar la formacin de cido y gas

MEDIO LIQUIDO
INFUSION CEREBRO CORAZON
2. FINALIDAD

Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles de

cultivar, en l los grmenes mantienen su virulencia , antigenicidad y otras
caractersticas serolgicas.

MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporcin en agar est siempre
por encima del 15% . Koch utiliz, en 1881, por primera vez la gelatina para
obtener un medio slido; posteriormente un alumno suyo, Hesse, utilizara
en su lugar agar. En la actualidad, para la solidificacin de los medios es el
agar el utilizado, ya que la gelatina presenta el inconveniente de fundir a
unos 24C, adems existen en bacteriologa numerosas bacterias
gelatinasa positiva que destruiran tal medio.
La importancia, pues, de los medios slidos es muy grande, ya que nos
permite el aislamiento, purificacin y visualizacin de su crecimiento en
colonias, as como su posible identificacin a travs de medios especficos y
diferenciales de caracteres slidos, elaboracin de antibiogramas, etc.
Agar Sangre, observar la morfologa de las colonias y el tipo de hemolisis.
para diferenciar estreptococos.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo al consumo de
lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los antimicrobianos.

AGAR SANGRE
Para diferenciar Streptococcus

AGAR MUELLER HINTON

ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusin del antibitico sobre el
agar, y determinar la sensibilidad (formacin
de halo alrededor del antibitico) y/o
resistencia (crecimiento alrededor del
antibitico).

MEDIOS SEMISLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios lquidos y los slidos
donde su proporcin en agar suele ser inferrior al 5% pero
siempre suelen presentar una cierta cantidad que le proporcione
una consistencia semislida.
Son tiles para ciertas pruebas bioqumicas como por ejemplo,
la prueba de oxidacin- fermentacin, que permiter conocer el
tipo de metabolismo oxidativo o fermentativo de la bacteria
problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Produccin de H 2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Produccin de Indol y Ornitina.

AGAR SIM
Sirve para comprobar la formacin de hidrgeno sulfurado, indol y la
motilidad de entero-bacterias. La motilidad se demuestra por turbidez
en el medio y la motilidad por crecimiento slo en el canal de picadura.
La formacin de hidrgeno sulfurado se demuestra por ennegrecimiento
de todo el medio, o slo en el canal de picadura. Y el indol se lee
agregando a el reactivo Kovacs se torna rojo prpura en el borde
superior.

POR SU OBJETIVO
Medios

enriquecidos:
Sirve para multiplicar bacterias, se utilizan para cultivar cualquier
muestra.
Pueden
o
no
llevar
inhibidores,
ejm.
Agar sangre: Contiene Agar TSA enriquecido con 5% al 10% de
sangre de carnero desfibrinada. El Agar debe estar a 45 C cuando
se
aade
sangre.
En este medio se desarrollan todas las bacterias hetertrofas y se
aprecia
la
hemlisis
alfa
y
beta
Agar chocolate: Consiste en un medio de Agar Sangre de lo que
ha sido llevado a 80C en un bao de agua por 5 minutos,
producindose as la ruptura de los eritrocitos que aportan nuevos
factores para el crecimiento bacteriano. El factor X (o hemina
termoestable) y el factor V (o fopiririna termolabil).

HEMOLISIS
Los Streptococus se clasifican en base a
su propiedades hemoliticas en agar
sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos da
como un resultado un color verdoso del
medio slido que rodea las colonias
(alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que lisan
los eritrocitos, produce un aclaramiento
del medio que rodea las colonias (betahemolisis).

MEDIOS ENRIQUECIDOS
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la
presencia
de
dos
tipos
de
microorganismos:
Un morfotipo de colonias grandes
blancas, brillantes y con bordes
irregulares pertenecientes a bacilos
gramnegativos.
El otro morfotipo presenta colonias
blancas, pequeas, enteras, tipicas de
un microorganismo grampositivo.

MEDIOS ENRIQUECIDOS
AGAR SANGRE
Cultivo mixto que demuestra la
presencia
de
dos
tipos
de
microorganismos:
Un tipo de colonias grandes, blancas
pertenecientes a Staphyloccous.
El otro tipo de colonias puntiforme
pertenecientes a Streptococus.

MEDIO ENRIQUECIDO
AGAR CHOCOLATE
Se utiliza Agar nutritivo
esterilizado
y
licuado
y
cuando est a 60 u 80 se
aade sangre desfribrinada.
Para
islamiento
de
gonococos,
Meningococos
y
Staphilococcus

MEDIO ENRIQUECIDO
INFUSION CEREBRO CORAZON
2. FINALIDAD

Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles de

cultivar, en l los grmenes mantienen su virulencia , antigenicidad y otras
caractersticas serolgicas.

POR SU OBJETIVO
Medios de aislamiento:Son medios muy diversos pero con la
particularidad comn de poder obtener a partir de ellos colonias
aisladas. Estos, segn sea su composicin, se pueden a su vez
dividir en:

No selectivos: Desarrollan la mayoria de bacterias, ya que no

cuentan con inhibidores de crecimiento ej., TSA, agar sangre.
Selectivos: selecciona grupos bacterianos al contener
sustancias (sales, colorantes, antibiticos) que inhiben el
crecimiento de algunas bacterias, favoreciendo el crecimiento de
otras. Pueden presentar indicadores.
Poco selectivos: agar MacConkey, agar EMB ENDO

(enterobacterias)
Medianamente selectivos: Agar SS para Salmonela y Shigellas
Altamente selectivos: Agar. Chapman y Manitol Salado, sulfito
bismuto agar y verde brillante (salmonelas),

Especficos: altamente enriquecidos, los inhibidores tienen

relativa importancia, pues su especificidad esta en funcin a su
riqueza ej., Bordet-Genjou (Bordetella), Lowestein Jensen
(Mycobacterium)

POCO SELECTIVOS
AGAR MAC CONKEY

Se basa en la formacin de la lactosa, las colonias que fermentan la lactosa

producen cada del pH, seguido por la absorcin del rojo neutro, imparte un
color rojo a la colonia. Las colonias que no fermentan lactosa, permanecen
incoloras. La presencia de cristal de violeta y sales biliares, inhiben el
crecimiento de bacterias gram positivas

POCO SELECTIVOS
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO

El medio EMB contiene Eosina

y azul de metileno que son
colorantes de anilina y van a
inhibir el crecimiento de los
microorganismos
Grampositivos, permitiendo el
crecimiento de todas las
Enterobacterias.
Las colonias que fermentan la
lactosa y/o sacarosa se observan
de un color prpura. Las que no
fermentan lactosa ni sacarosa se
observan incoloras.
La Escherichia coli se observa
de color prpura y con brillo
metlico.

MEDIOS ESPECIALES
LOWENSTEIN JENSSEN
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.

POR SU OBJETIVO

AGAR KIA (KLIGER)

Muestra una serie de reacciones.

Pico de color amarillo indica fermentacin de lactosa.
Fondo de color amarillo indica fermentacin de glucosa.
Ruptura del agar y/o burbuja, indica formacin de CO 2.
Presencia de un color negro indica produccin de H 2S.
El pico rojo indica que no hay fermentacin de lactosa.
El Pico rojo y fondo rojo indica que no hay fermentacin de glucosa ni lactosa.

AGAR SIM
Sirve para comprobar la formacin de hidrgeno sulfurado, indol y la
motilidad de entero-bacterias. La motilidad se demuestra por turbidez
en el medio y la motilidad por crecimiento slo en el canal de picadura.
La formacin de hidrgeno sulfurado se demuestra por ennegrecimiento
de todo el medio, o slo en el canal de picadura. Y el indol se lee
agregando a el reactivo Kovacs se torna rojo prpura en el borde
superior.

SIM

Tubo con medio para motilidad y

produccin de cido sulfihidrico.
Los microorganismos mviles
muestran desarrollo difuso hacia
fuera de la lnea de siembra.
Los microorganismos inmviles
crecen solamente a lo largo de la
linea de siembra por puncin
exterior.
Se observa un color Negro debido
a la produccin de H2S

INDOL

La formacin de indol a partir del

triptofano se indica por un color
rojo despues del agregado del
reactivo de Kovac.
El tubo de la izquierda es negativo.
El tubo de la derecha demuestra un
halo de color rojo lo que indica la
presencia de Indol.

MRVP (CALDO GLUCOSADO)

Permite investigar que ruta metablica ha utilizado

el microorganismo para consumir la glucosa.
Si utiliza la va de fermentacin de los cidos el pH
resultante es menor de 4.4, y el microorganismo
ser Rojo de metilo (+) el cual se va a evidenciar
por el agregado del indicador rojo de metilo y dar
un color rojo (+) y amarillo anaranjado (-).
Los microorganismos que utilizan la va de la
acetoina sern Voges Proskauer (+) y se evidencian
por un color rojo al cabo de los 10 minutos despus
de agregar el KOH y el alfa-naftol.

AGAR UREA
El tubo de la derecha demuestra un
color rojo, lo que indica una
reaccin positiva.
El tubo de la izquierda no presenta
viraje de color

AGAR CITRATO DE SIMMONS

El tubo de arriba demuestra un

color verde y ausencia de
crecimiento.
El tubo de abajo muestra un color
azul, lo que indica una reaccin
positiva.

1. Medios deshidratados o liofilizados.

2. Medios ya preparados:
A. Slidos en placa petri.
B. Slidos en tubo.
B.1. Inclinado
B.2. Semi-inclinado (pico de flauta)
C. Lquidos en tubo.
D. Semislidos en tubo.
E. De doble fase en frasco o tubo.

1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal cual y una vez en el
laboratorio deben ser preparados adicionando la cantidad de
agua correspondiente en condiciones totalmente aspticas o
una vez preparados lo esterilizaramos en el autoclave. Su
composicin es muy variable y puede ser de tipo bsico o
ms complejo.

B.2. Con agar semi-inclinado o Pico

de flauta
Estos tipos de medios son tiles para
observar
el
crecimiento
aerobio
microbiano si se ha sembrado por estra,
el crecimiento anaerobio microbiano si se
ha sembrado por picadura (anaerobiosis
facultativa).
Agar KIA
Agar LIA
Tambin es til para la conservacin de
cepas, porque la desecacin es menor en
medios slidos en tubo que en las placas
petri.

C. Medios lquidos en tubo

Estos medios no permiten visualizar
colonias
pero
tienen
muchas
aplicaciones como, por ejemplo,
pruebas bioqumicas que permiten:
La determinacin del Indol.
La reduccin de nitratos a nitritos
La fermentacin de la glucosa,
lactosa u otro azcar, etc.
Pueden servir para aumentar la
concentracin del microorganismo
inoculado, es decir, realizar un
inculo, y otras aplicaciones.
Estos medios no contienen en
ningn caso agar.

D. Medios semislidos en tubo

Se siembran por picadura y corresponden a un trmino medio
entre los lquidos y los slidos. Se utilizan en ciertas pruebas
bioqumicas como:
La prueba de la movilidad
La prueba de oxidacin-fermentacin o de Hugh-Leiffson.

para evidenciar la importancia del

significado taxonmico del
metabolismo oxidativofermentativo de los hidratos de
carbono por las bacterias Gram
negativas

E. Medios de doble fase en frasco

Son frascos constituidos por una fase slida y otra lquida, por
ejemplo, para la determinacin rpida de microorganismos en
sangre. Ambas fases crecen en el mismo medio y pueden tener
un carcter aerobio o anaerobio. Suelen contener obturadores
de caucho manteniendo completamente aislado el medio.
Medio de Ruiz Castaeda para el aislamiento de Brucella.
Medio para Hemocultivo