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Colgio Santa Maria Qumica Experimental

Fluorescncia molecular
e
Quimiluminescncia
Carolina Mira, n -2 E
Henrique Bezerra, n 10 2 C
Isabela Schoen, n 30 2 E

Introduo

Mtodo de Luminescncia Molecular


a emisso de radiaes eletromagnticas a partir do retorno de eltrons, que
foram excitados, ao seu estado fundamental.
A produo da luminescncia ocorre por meio de uma reao qumica
altamente exotrmica em que a oxidao de uma molcula orgnica,
genericamente chamada de luciferina, libera energia preferencialmente na forma
de luz visvel. Essa reao catalisada por enzimas genericamente chamadas de
luciferases.7
A luminescncia tanto pode estar associada a reaes qumicas quanto a
estimulao energtica dos tomos

Amedidadaintensidadedefotoluminescnciaouquimiluminescnciapermitea
determinaoquantitativadeumavariedadedeespciesorgnicaseinorgnicas
importantesemconcentraesmuitobaixas(traos).
Uma vantagem dos mtodos fotoluminescentes a sua extensa faixa de
concentrao linear, que, com frequncia, significativamente maior que as
encontradas em mtodos de absoro.

Os mtodos de luminescncia tm uma ampliao menos ampla, em decorrncia


do fato que muitas espcies absorvem radiao e no emitem.
Trs mtodos pticos relacionados entre si so conhecidos coletivamente como
mtodo de luminescncia molecular: Fluorescncia molecular; fosforescncia e
quimiluminescncia;

Fluorescncia molecular

Diferena entre fluorescncia e fosforescncia:

Diferena est na forma como a radiao dissipada. Na fluorescncia, a


emisso da radiao direta, ou seja, passa direto do estado fundamental para
o excitado e, deste, para o fundamental. Portanto, no caso da fluorescncia,
quando a emisso de luz externa acaba, a radiao finalizada.

Na fosforescncia, o eltron passa do estado excitado para um intermedirio e


s depois para o fundamental, assim a energia que excitou os eltrons vai sendo
liberada gradativamente na forma de ftons e, por isso, a luz dos objetos
fosforescentes dura mais tempo.

Em termos prticos, no caso da fluorescncia, a substanciasemitearadiao


enquantoestarecebendoafontedeenergiaexterna,portanto,quandoessa
fontedeenergiacessa,aradiaonomaisemitida. Nesse sentido, a
fosforescncia retm mais a radiao pelo estado intermedirio.

A luminescncia molecular formalmente dividida em fluorescncia e


fosforescncia, dependendo da natureza do estado excitado envolvido no
processo. Se o estado excitado envolvido singleto, onde o spin do eltron no
orbital excitado mantem sua orientao original, tem-se a fluorescncia. Por
outro lado, na fosforescncia, a orientao do eltron que foi promovido ao
estado excitado invertida (estado excitado tripleto, Tn). Em consequncia da
reteno da orientao original, o retorno de uma populao que se encontra
no estado excitado singleto para o estado fundamental (que tem carter
singleto), permitido e ocorre muito rapidamente (tempo de vida na ordem de
anos). Assim, a fluorescncia intrinsecamente um fenmeno luminescente
mais comum que a fosforescncia, competindo eficientemente com processos
de desativao no-radiativos do estado excitado. Como consequncia direta
disso, possvel observar facilmente fluorescncia na temperatura ambiente e
diretamente em soluo, o que torna o procedimento experimental fluorimtrico
bastante simples.

A fluorescncia de ressonncia observada mais para espcies atmicas


do que moleculares

Na fluorescncia com deslocamento Stokes o fton absorvido perde


energia por inmeras vibraes microscpicas

Fatores que afetam a fluorescncia


Para que ocorra a fluorescncia, uma molcula precisa ter estrutura apropriada e
estar em um meio que favorea a desativao radiativa S1 " S0, sendo esses dois
fatores crticos na magnitude da eficincia quntica fluorescente (f ) de uma
substancia.
A eficincia quntica fluorescente de uma substancia a razo entre o numero de
ftons emitidos por fluorescncia e o numero de ftons absorvidos. Uma molcula
ser significativamente fluorescente se sua eficincia quntica tiver magnitude
considervel (entre 0,1 e 1).
A estrutura molecular, assim como o ambiente qumico, influenciam a ocorrncia ou
no da luminescncia de uma molcula. Estes fatores tambm determinam a
intensidade de emisso, quando esta ocorre:

Rendimento quntico ou eficincia quntica F:


simplesmente a razo do nmero de molculas que luminescem pelo nmero de
molculas excitadas. A fluorescena possui uma eficincia quntica prxima da
unidade.

Tipos de transio
Dificilmente a fluorescncia resulta de absoro de radiao com l menor que
250 nm, porque tal radiao suficientemente energtica para promover a
desativao dos estados excitados por pr-dissociao ou dissociao. A
emisso fica restrita a transies p* p (maior eficincia quntica) e p* n.

Estrutura
Ainda que alguns compostos carbonlicos e alguns com estruturas de
duplas ligaes altamente conjugadas floresam, a fluorescncia mais
intensa e mais til encontrada em compostos com grupos aromticos
com transies de baixa energia.

A rigidez da estrutura favorece a fluorescncia:

Uma estrutura molecular planar favorece a fluorescncia, pois aumenta


a interao e conjugao entre o sistema de eltrons.

Fatores que reduzem a


intensidade de fluorescncia
A eficincia quntica diminui com o aumento da temperatura por causa do
aumento da frequncia das colises ocasionando converses externas.
Um decrscimo na viscosidade causa igual efeito.

No caso das transies mais comuns na fluorescncia, a molcula no


estado excitado mais polar e tem carter mais bsico do que quando ela
se encontra no estado fundamental. Assim, o aumentodapolaridadedo
solventeoudoseucaraterprtico, acarreta numa diminuio da energia
relativa do estado excitado; essa diminuio de energia pode tambm
acarretar no aumento da eficincia da CI com a contrapartida da diminuio
da fluorescncia.

A fluorescncia diminuda por solventes contendo tomos pesados ou


por solutos contendo tais tomos em suas estruturas. Exemplo: CBr4 e
CH3CH2I

Efeitos de pH podem desfavorecer a fluorescncia; o efeito do pH nos


sistemas de solventes prticos relevante na fluorescnciaemmolculas
aromaticas contendo grupos funcionais bsicos ou cidos, sendo muito
comum observar significante diferena entre as propriedades
luminescentes de molculas protonadas e no-protonadas.

A potncia de emisso de fluorescncia proporcional a potncia


radiante do feixe de excitao que absorvido.

Em fluorescncia, certos ctions e anons de elementos de elevada massa


atmica causam a desativao do estado excitado singleto, seja pela mudana da
multiplicidade do mesmo (S1 " Tn) ou pelo aumento da velocidade dos processos
de desativao no-radiativos. Por exemplo, no caso dos halogenetos, esse efeito
mais comum para o iodeto, seguido do brometo e em muito menor intensidade
para o cloreto e fluoreto. Esse maior efeito desativador do estado excitado singleto
causado por ons mais pesados se deve ao melhor acoplamento spin-orbital
obtido entre esses ons e molculas no estado excitado. Esse efeito, denominado
de efeito externo do tomo pesado, tambm observado para outros ons tais
como Cd2+, Pb2+, Hg2+ e Tl+.

Substancias podem desativar o estado excitado singleto por meio do quenching


dinmico.

Substancias concomitantes, presentes em maiores concentraes, podem


tambm reduzir a luminescncia liquida emitida por uma populao de
fluorforos por meio da reabsoro da fluorescncia (absoro secundaria).

Instrumentos para medir fluorescncia e fosforescncia

Os componentes dos instrumentos para medir a fotoluminescncia so similares


aqueles encontrados nos fotmetros e espectrofotmetros UV/Vis.

A fonte de radiao necessita ser mais intensa que aquelas utilizadas na


absoro molecular.

A maioria dos equipamentos emprega a tica de duplo feixe para compensar


flutuaes na potncia da fonte.

A fluorescncia emitida pela amostra se propaga em todas as direes, mas o


ngulo reto em relao ao feixe incidente mais conveniente para evitar
perdas por espalhamento na soluo e, principalmente, nas paredes da cubeta.

Aplicaes:
Os mtodos de fluorescncia e fosforescncia so intrinsecamente aplicveis a faixas
de concentraes mais baixas que as medidas espectrofotomtricas baseadas em
absorbncias e esto entre as tcnicas analticas mais sensveis facilmente
disponveis.

Essa sensibilidade elevada vem do fato que F aumenta se a potncia da fonte Po


aumentar, ou ento, pelo fato do sinal poder ser amplificado posteriormente. A
absorbncia, por estar relacionada com Po/P, no se altera com o aumento de Po,
pois o aumento desta causa um aumento proporcional em P.
Em contraste a alta sensibilidade, os mtodos fotoluminescentes so menos
precisos e exatos que os mtodos espectrofotomtricos por um fator de 2 a 5.

Derivao fotoqumica

Substancias que no apresentam luminescncia intrnseca natural


podem ser induzidasafluoresceroufosforesceratravs de diversas
reaes que modificam a estrutura da molcula e consequentemente
as propriedades fsico-qumicas dessas substancias, obtendo-se
assim, um derivado luminescente (derivao). Estatcnica
amplamenteutilizadaemmtodosanalticosbaseadosna
fluorescncia.

Existe um outro tipo de derivao onde a molcula do analito de


interesse modificada por meio de reaes fotoqumicas provocadas
principalmente por radiao eletromagntica na regio do ultravioleta
(UV).

Microscpio de fluorescncia
Aimagemobservada (no microscpio) o resultadoda radiao
eletromagnticaemitida pelasmolculasque foram excitadas (emisso de luz
visvel - maior comprimento de onda)

Quimiluminescncia

Dados histricos

Os gregos foram os primeiros a relatar, por escrito, o fenmeno da luz fria


(Aristteles, 384 - 322 AC).

Em 1669, o mdico H. Brandt, que pretendia fazer fortuna com a alquimia, produziu,
a partir da destilao exaustiva de urina com areia, um material que possua a
propriedade de brilhar no escuro

O primeiro composto sinttico orgnico a apresentar uma reao quimiluminescente


foi a lofina, ou 2,4,5-trifenilimidazol, preparada em 1887 por B. Radiziszewski
O primeiro pesquisador a utilizar o termo quimiluminescncia para descrever
reaes qumicas que emitem luz visvel foi E. Wiedemann, que, em 1888.
A primeira reao quimiluminescente bem caracterizada mecanisticamente foi a
oxidao de luminol com perxido de hidrognio (vulgarmente conhecido como
gua oxigenada) em meio bsico, descrita por H. O. Albrecht em 1928.

Definio
o fenmeno que ocorre quando se h emisso de
energia luminosa em uma reao qumica, sem gerar
calor
Reao
Qumica
A+B

AB*

Produtos + Luz
Dois produtos qumicos reagem para formar um
intermedirio excitado (de alta energia), que se
decompe libertando parte da sua energia como
fotes de luz para alcanar o seu estado
fundamental.

Exemplo

Luminol

Quimiluminescnci
a: A luz da justia
Um dos usos da qumica na investigao
forense a identificao de machas de
sangue na cena do crime. Isso possvel
devido ao ferro presente nas hemoglobinas.

Exemplo
Pulseiras de neon

As reaes de quimiluminescncia, como as dos


tubos luminosos, so dependentes da
temperatura. A reao ser mais rpida se a
temperatura aumentar.

Quando o difenil oxalato reage com o perxido


de hidrognio (H2O2) oxidado para formar
fenol e um perxido cclico. O perxido reage
com a molcula do corante para formar duas
molculas de dixido de carbono (CO2) e no
processo um electro na molcula do corante
promovido a um estado excitado. Quando a
molcula do corante excitada (de alta energia)
regressa ao estado fundamental, um foto de luz
libertado. A reao dependente do pH.
Quando a soluo ligeiramente alcalina, a
reao produz uma luz mais brilhante.

Aplicao da quimiluminescncia qumica


analtica
Aplicao relativamente recente.
O nmero de reaes qumicas que produz quimiluminescncia pequeno,
limitando assim o mtodo.
A instrumentao para medidas de quimiluminescncia notavelmente simples.
necessrio um sistema fechado com apenas um tubo fotomultiplicador.
Os mtodos de quimiluminescncia em geral so altamente sensveis porque nveis
baixos de luz podem ser detectados na ausncia de rudos. No h atenuao da
radiao em monocromadores ou filtros. Com isso limites de deteco na faixa de
parts por bilho (ppb) ou partes por trilho (ppt) podem ser alcanados.

Aplicaes da
quimiluminescncia
na Medicina Humana

Caractersticas Bsicas

A tcnica se baseia na ligao de antgeno anticorpo. Um dos dois


reagentes conjugado a uma substncia que, quando ativada, emite
luz visvel. Ento, a emisso de luz proporcional ao reagente
pesquisado.

Bioluminescncia

A bioluminescncia a emisso de luz fria e visvel por organismos vivos. Ela ocorre
em variados organismos (bactrias, fungos, algas, celenterados, moluscos,
artrpodes, peixes), principalmente no ambiente marinho. No ambiente terrestre ela
ocorre em fungos, aneledeos, moluscos e principalmente nos insetos. Ela serve
principalmente para finalidades de comunicao biolgica

A bioluminescncia gerada por reaes qumicas altamente


exotrmicas, catalisadas enzimaticamente, nas quais a energia das ligaes
qumicas de compostos orgnicos convertida preferencialmente em luz visvel.
Nestas reaes, molculas genericamente denominadas de luciferinas so
oxidadas por oxignio, produzindo molculas eletronicamente excitadas que
decaem emitindo luz. Estas reaes so catalisadas por enzimas chamadas
de luciferases

A bioluminescncia constitui uma das assinaturas da vida, e por esta razo ela serve
como um excelente bioindicador desde o nvel molecular at o nvel ambiental, e
como excelente reagente bioanaltico e marcador celular e de expresso gnica.

Vdeo
Como fazer um tornado luminoso (experincia de Qumica e
Fsica):
https://www.youtube.com/watch?v=XQQShzZXn_M

Bibliografia
http://
web.ccead.puc-rio.br/condigital/software/objetos/T3-08/T3-08-sw-s2/guiaDidatico.pd
f
http://
hiq.linde-gas.com.br/international/web/lg/br/like35lgspgbr.nsf/docbyalias/anal_chem
i
http://
web.ccead.puc-rio.br/condigital/software/objetos/T3-08/T3-08-sw-s2/guiaDidatico.pd
f
http://
web.ccead.puc-rio.br/condigital/video/e%20tempo%20de%20quimica/reacoesFotoqui
micas/luminescencia/guiaDidatico.pdf
http://pt.slideshare.net/labimuno/quimioluminescencia-3540384
http://www.medicinageriatrica.com.br/2012/12/13/analise-clinicaquimioluminescencia/
http://www.scienceinschool.org/node/2381#figure2