Biosensores

Instrumentosanalticosquetransformanprocesos
biolgicosensealeselctricasupticasypermitensu
cuantificacin

BIOSENSORES

Utilizanlaespecificidaddelosprocesosbiolgicos:

Enzimas
x
Sustratos
Anticuerpos
x
Antgenos
Lectinas
x
Carbohidratos
Complementariedaddecidosnucleicos.

Ventajas:

Reutilizacin
Menormanipulacin
Menortiempodeensayo
Repetitividad

Tiposyusosmascomercializados:
1.
2.

Tirascolorimtricas
Electroqumicos:

3.

Potenciomtricos: Glucosa, Lactato, Glicerol,

Alcohol,Lactosa,Laminocidos,Colesterol
Amperomtricos:Glucosa,Sacarosa,Alcohol

pticos:BIAcore:Agproteicos.

PropiedadesdeunbuenBiosensor

BIOSENSORES
1.
2.

3.

4.

5.

Controldemetabolitoscrticosdurantelasoperacionesquirrgicas.
ConsultasyUrgenciasHospitalarias:

Obviaanlisiscarosylentosenlaboratorioscentrales

Aceleraladiagnosisyelcomienzodeltratamiento

Menorriesgodedeteriorodelamuestra
DiagnsticoDomstico:

EnsayosdeEmbarazos

ControldeGlucosaendiabticos
Aplicacionesinvivo:

Pncreasartificial

Correccindenivelesdemetabolitos

Problemas:MiniaturizacinyBiocompatibilidad
AplicacionesIndustriales,militaresymedioambientales:

Alimentacin

Cosmtica

ControldeFermentaciones

ControlesdeCalidad

DeteccindeExplosivos

Deteccindegasesnerviososy/otoxinasbiolgicas

Controldepolucin.

TIPOSDEBIOSENSORES
1.

2.
3.
4.

5.
6.

BIOSENSORESELECTROQUMICOS

Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los

electronesinvolucradosenprocesosredox

Potenciomtricos:Usanelectrodosselectivosparaciertosiones

Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados

concambiosenelambienteinicodelassoluciones
BIOSENSORESTERMOMTRICOS
BIOSENSORESPIEZOELCTRICOS
BIOSENSORESPTICOS

Deondaenvanescente

Resonanciadeplasmasuperficial
BIOSENSORESCELULARES
INMUNOSENSORES

UNIDADESFUNCIONALES
DEUNBIOSENSOR
Reactor

Transductor

Amplificador

S
4.328

P
Electrodode
referencia

Reactor

Transductor

Amplificador

S
4.328

P
Electrodode
referencia

Materialbiolgico+AnalitoAnalitounido

Respuestabiolgica

RespuestaElectrnica

Respuesta
electrnica

(Mximarespuestaelectrnicaposible)x(Concentracindelanalito)
(Constantedesemisaturacin)+(Concentracindelanalito)

Cinticasdereaccinenbiosensores

TIPOSDEBIOSENSORES
1.

2.
3.
4.

5.
6.

BIOSENSORESELECTROQUMICOS

Amperomtricos: Determinan corrientes elctricas asociadas con los

electronesinvolucradosenprocesosredox

Potenciomtricos:Usanelectrodosselectivosparaciertosiones

Conductimtricos: Determinan cambios en la conductancia asociados

concambiosenelambienteinicodelassoluciones
BIOSENSORESTERMOMTRICOS
BIOSENSORESPIEZOELCTRICOS
BIOSENSORESPTICOS

Deondaenvanescente

Resonanciadeplasmasuperficial
BIOSENSORESCELULARES
INMUNOSENSORES

BiosensoresElectroqumicos
Amperomtricos:
ElelectrododeOxgeno

ElectrododeOxgeno

ElectrododeOxgeno

(A) Disco de resina epoxy

(B) Ctodo de platino en el centro de un
saliente.
(C) nodo de plata en forma circular
(D) Anillo de goma que sostiene un papel
espaciador empapado en un electrolito y una
membrana de polytetrafluoroethylene que
separa los electrodos de la mezcla de
reaccin.

DETERMINACIONDEGLUCOSA

Glucosa + O2

Glucosa
Oxidasa

DETERMINACIONDEGLUCOSA
Electrododeoxgeno
O2 + 2H2 O + 2e2H O + 2e2 2

H2 O2 + 2OH2OH-

Ctodo (Pt)
Puente de KCl

4 e- +
0 ,6 0 ,7 v

Anodo (Ag)
4Ag+ + 4e-

4Ag
4Ag+ + 4Cl-

4AgCl

DETERMINACIONDESACAROSA
Glucosa

Sacarosa

O2
Glucosa

Fructosa

Dgluconolactona
H2O2

respuesta
glucosa
sacarosa

tiempo

flujo

Electrodo

Invertasa Glucosaoxidasa

DETERMINACIONDE
LAFRESCURADELPESCADO
Traslamuerte,losnucletidosdelpescadosufrenunaseriede
reaccionesdedegradacinprogresiva:
ATP > ADP > AMP > IMP > HxR > Hx > Xantina > Acido rico

K=

(HxR + Hx ) x 100
ATP + ADP + AMP + IMP + HxR + Hx

DETERMINACIONDE
LAFRESCURADELPESCADO
BIOSENSOR:
xantinaoxidasaynuclesdiofosforilasainmovilizadassobre
unamembranadetriacilcelulosadeunelectrododeOxgeno.
K<20Elpescadopuedesercomidocrudo.
20>K<40Elpescadodebesercocinado.
K>40Pescadonoaptoparaelconsumo

nuclesido
HxR + P fosforilasa
Xantina
Hx + O2 oxidasa
Xantina
Xantina + O2 oxidasa

Hx + Ribosa P
Xantina + H2O2
Acido rico + H2O2

Los nucletidos se podran determinar utilizando el mismo electrodo y

muestra,peroaadiendonucleotidasayadenosndeaminasa

Variosmecanismosredox

Mediadores
redoxen
biosensores
amperomtricos

Miniaturizacin
Posibleporlacapacidad
delpirrolpara
polimerizarmediante
oxidaciones
electroqumicasen
condiciones
suficientementesuaves
comoparaatrapar
enzimasymediadores
sindesnaturalizarlos

Microelectrodoglucosa/lactato

Se puede recubrir la superficie de pequeos electrodos polimerizando

pirroles junto con biocatalizadores y mediadores, utilizando mtodos de
micro fabricacin de microprocesadores, en incluso disponiendo varios
sensoresenlosmismos

BiosensoresElectroqumicos
Potenciomtricos
Determinancambiosenlaconcentracindeionesconcretos

Biosensorespotenciomtricos

Biosensorpotenciomtrico

BiosensoresElectroqumicos
Conductimtricos
Detectancambiosenconductividadelctrica
causadosporalteracionesenlaconcentracinde
iones

SensordeUrea
NH2CONH2+3H2O
Ureasa
2HN4++HCO3+OH
Otrosejemplos:
amidasas,
decarboxilasas,
esterasas,
fosfatasasy
nucleasas.

BiosensoresTermomtricos:
SensoresbioqumicosyTELISA

Biosensor
termomtrico

PrecisaunaislamientoCorrecto
Puededetectardiferenciasde0,0001C

Reaccionesusadasen
biosensorestermomtricos

BiosensoresTermomtricos
1) Pocoxitocomercial
2) Ventaja:sepuedeacoplarfcilmentevariasreaccionesenun
nicoreactor
3) Ejemplo:
1) DetectordeLactato
Lactato+O2(lactatooxidasa)>piruvato+H2O
Piruvato+NADH+H+(lactatodeshidrogenasa)>lactato+NAD+
4) Puedeutilizarseclulasviables
5) Puedeacoplarseauninmunoensayoenzimtico:ELISA
termomtricooTELISA

BiosensoresPiezoelctricos:
Naricesbioelectrnicas

Aprovechanlaspropiedadeselctricasdeloscristales:
Entransmisoresyemisoresderadio
Entransistores
Enchips

EfectoPiezoelctrico
Produccindeuncampoelctricopor
separacindelascargaspositivasy
negativasenalgunostiposdecristalesal
someterlosaciertastensiones
1) Siuncristalpiezoelctricosesometeauncampo
elctricosedeformar.
2)Siuncristalpiezoelctricosesometeauncampo
elctricoqueoscilaaunafrecuenciadeterminada
vibrarconunafrecuenciacaracterstica.

EfectoPiezoelctrico
1) Lafrecuenciaderesonanciaseencuentraenel
rangodelos10MHz(radiofrecuencia).
2) Lafrecuenciaderesonanciadependede:
Lacomposicindelcristal
ElGrosor
Laformaenquefuecortado
3)Uncristalpiezoelctricovarasufrecuenciade
resonanciacuandoseadhierenmolculasasu
superficie.

BiosensoresPiezoelctricos
1) Sedetectanvariacionesmuypequeasenla
frecuenciaderesonancia:cantidadesdehastaun
ngr/cm2
2) Lamedidasecompraconunelectrodode
referenciaconcristalsinmaterialbiolgico.
3) Ejemplos:
1) Detectoresgaseosos:SO2,CO,HCl,NH3,CO2
2) DetectordeCocaina
3) DetectordeFormaldehido
4) DetectordePesticidas(Organofosforados)

BiosensoresPiezoelctricos
1)DetectordeCocana:
Anticuerposcontracocanafijados
sobreuncristalpiezoelctrico.
Detectaunaparteporbilln
50MHzdecambioenlafrecuenciade
resonancia.
Selimpiaensegundosporaireacin.

BiosensoresPiezoelctricos
2) DetectordeFormaldehido:
CH2+H2O+NAD+NADH+HC02H+H2

Catalizadaporlaformaldehidodeshidrogenasa
inmovilizada con glutation (cofactor) por
entrecruzamiento con glutaraldehido en un
cristaldecuarzoa9MHz

BiosensoresPiezoelctricos
3) DetectordePesticidasOrganofosforados:
Colinesterasainmovilizadaenuncristal
decuarzomedianteglutaraldehido.

BiosensoresPiezoelctricos
Inconvenientes:
Muyinfluidosporlahumedad.
Baja=pocosensibles
Alta=desapareceelefecto
piezoelectrico
Inutilizablesenlquidos.
Introducirysecar

Biosensorespticos:
Permitenelusodematerialesdetectoresno
elctricos,segurosenambientespeligrosos
osensibles(invivo)
Noprecisansensoresdereferencia

Biosensorde
fibraptica
paralactato
Detectacambiosenla
enlaconcentracinde
oxgenodeterminandola
reduccindela
fluorescenciadeun
fluorocromo(quenching)

Biosensordeclulapticapara
albminasrica
Detectalaabsorcindeluza
630nmquepasaatravsdela
cluladetectora.
Seevalaelcambiode
amarilloaazulverdosodelverde
debromocresolcuandoseunea
laalbminasricaapH3.8
Respuestalinealalaalbmina
enunintervalode5a35mg/cm3

Biosensorespticos
1) DeteccindeVapores:
Ensayoslidocolorimtricoquedetectavaporde
alcoholutilizandoalcoholoxidasa,peroxidasay2,6
diclorindofenolslidosdispersadossobreplacasdeTLC
(cromatografaencapafina)decelulosamicrocristalina
transparente.
2) Tirascolorimtricasdeunsolouso:
Losmsutilizados:anlisisdesangreyorina.
Controldelaglucemiaendiabticos
Glucosaoxidasa,peroxidasaderbanoyun
cromgenoquecambiaelcoloralseroxidado
Cromgeno(2H)+H2O2(peroxidasa)>colorante+2H2O

Biosensorespticos
3) Reaccionesluminiscentes:
Utilizacindeluciferasa
Detectalapresenciademicroorganismosenorinaal
liberarATPensudestruccin
Luciferina+ATP(luciferasa)>oxiluciferina+CO 2+AMP+ppi+luz

Biosensorespticosdeondaevanescente

Menorndicederefraccin>

Mayorndicederefraccin>

Un haz de luz ser reflejado en su totalidad cuando incida

sobre una superficie transparente presente entre dos medios,
cuando proceda del medio con mayor ndice de refraccin y
cuandoelngulodeincidenciaseamayorqueunvalorcritico

Biosensorespticosdeondaevanescente

Menorndicederefraccin>

Mayorndicederefraccin>

Enelpuntodondeseproducelareflexin,seinduceuncampo
electromagntico que penetra en el medio que tiene menor
ndicederefraccin
Este campo es denominado onda evanescente y decae
exponencialmente con la distancia de penetracin,
desapareciendotrasunospocosnanmetros

Biosensorespticosdeondaevanescente

Menorndicederefraccin>

Mayorndicederefraccin>

Laondaevanescentedecaeexponencialmenteconladistancia
depenetracin,desapareciendotrasunospocosnanmetros
La profundidad a la que penetra depende del ndice de
refraccin,delalongituddeondadelaluzutilizadaypuedeser
controladaconelngulodeincidencia.

Biosensorespticosdeondaevanescente

Menorndicederefraccin>

Mayorndicederefraccin>

La onda evanescente puede interaccionar a su vez con el

medio, provocando un campo electromagntico que puede
volveralmedioconmayorndicederefraccin,dandolugara
cambiosenlaluzquecontinaalolargodelaguadeondas.

Inmunosensordeondaevanescente
Especialmenteindicadospara
inmunoensayos:
Noesnecesariosepararelresto
deloscomponentesdeunamuestra
clnica
Laondasolopenetrahastael
complejoantgenoanticuerpo
Seexcitanfluorocromosunidos
alasuperficiemediantelaonda
evanescente,ylaluzemitidapor
ellosvolveralafibraptica
Lacantidaddemuestra
necesariaesmnima

Resonanciadeplasmasuperficial

Si la superficie del cristal est recubierta por una capa

metlica (oro, plata, paladio) los electrones de su superficie
pueden oscilar en resonancia con los fotones generando un
onda de plasma superficial y amplificando el campo
evanescenteenlacaramasalejadadelmetal

Resonanciadeplasmasuperficial

Si la capa de metal es lo suficientemente delgada como para

permitir al campo evanescente penetrar hasta la superficie
opuesta,elefectosermuydependientedelmedioadyacenteal
metal

Resonanciadeplasmasuperficial

Estefenmenosucedeslocuandolaluzincideconunngulo
especfico,elcualdependedelafrecuencia,elgrosordelacapa
metlica y el ndice de refraccin del medio que se encuentra
inmediatamentesobrelasuperficiemetlica

Resonanciadeplasmasuperficial

La produccin de esta resonancia de plasma superficial

absorbepartedelaenergadelaluzreduciendolaintensidadde
laluzreflejadainternamente

Resonanciadeplasmasuperficial

Los cambios que suceden en el medio provocados por

interacciones biolgicas pueden ser apreciados detectando los
cambios de intensidad de la luz reflejada o el ngulo de
resonancia

Cambioenlaabsorcinpor
efectodelaresonanciadeplasma
superficial

Deteccin de la
gonadotropina
corinica humana
(hCG)medianteun
anticuerpo unido a
la superficie del
biosensor:
La unin cause un
cambio en el
ngulo
de
resonancia

Resonanciadeplasmasuperficial

Permitendetectarpartespormilln
Unanlisistpicorequiere50ldemuestraytarda5a10minutos
PuedeutilizarseconDNAyRNA.

Biosensorescelulares

Inmunosensores

Tiposde
inmunosensores