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Replicacin de DNA en

Escherichia coli
Matthew Meselson & Franklin W. Stahl.

Alumno: Zurita Castillo,


Julio A.

Un poco de historia
En 1958 Meselson y Stahl realizaron
un ingenioso experimento en el
cual muestran cmo se replica el
ADN . Producto de su simplicidad e
inteligente deduccin es catalogado
por muchos cientficos como " el
ms bello experimento en biologa.
"

Descubrimie
nto

Friedrich Miescher

Como
funciona?

Como
exactamen
te es que
la
multiplicac
in de ADN
sucede?

Surgieron hiptesis
Conservativo
De una cadena de DNA nace una
completamente nueva, consistiendo en una
cadena antigua y otra nueva.

Semi-Conservativo

Las dos hebras originales de ADN se separan y


las dos molculas hijas consisten en una hebra
"vieja" de ADN de la clula madre y una hebra
nueva.

Disperso
El modelo dispersivo mantiene de que el ADN
es copiado en pequeos momentos y que
ambas hebras hijas de ADN reciben una
mezcla del ADN original y el nuevo ADN.

Replicacin de DNA en Escherichia coli


Procedimiento:

Adentro de un gradiente dedensidad


(Cloruro de cesio)como este, todas
lasmolculasde un extracto de clula
incluyendo
elADN"flotarn"
o
se
"hundirn", migrando al lugar en el
gradiente que corresponde a su densidad.
Las molculas mas densas fueron jaladas
hacia la parte de abajo de una clula,
mientras que las molculas mas livianas se
mantienen mas arriba en la clula.
Para el experimento Meselson y Stahl utilizaron
una
forma
especial
de
nitrgeno:15N.
Normalmente, casi todo el nitrgeno en
cualquier clula es14N . Cuando clulas en
crecimiento son alimentadas con nitrgeno
pesado, elistopo15N entra almetabolismode
la clula y cantidades significantes del mismo
sern incorporadas a losnucletidos ricos en
nitrgeno y enADN.

Pruebas previas
Antes de comenzar su anlisis
dereplicacindeADN, Meselson y Stahl
primero mostraron de que el ADN que
consiste de14N puede ser separado del
ADN que contiene15N. Alcanzaron esto
al cultivar dos grupos separados
debacteriadeEscherichia coli,
alimentando a cada grupo unistopode
nitrgeno diferente. Despus, abrieron
las clulas bacteriales mezcladas con
extractos de ambos grupos en una
clula centrfuga y le dieron vuelta para
establecer el gradiente dedensidad.
Para detectar el ADN, lo alumbraron
conluzultravioleta (UV) en la centrfuga
en movimiento debido a que el ADN
absorbe luz UV y por ende forma una
sombra durante la exposicin a pelcula
fotogrfica.

Siel modelo conservativo de la


replicacin de ADN es verdadero,
entonces uno predicara de que
las clulas bacteriales cultivadas
para una generacin (20 minutos)
con14N tuvieran dos diferentes
tipos de ADN: el ADN original sera
ladensidadde ADN cultivado con
solamente nitrgeno15N, mientras
que ambas hebras del nuevo ADN
seran la banda mas liviana14N.
Sin embargo, si cualquiera de los
modelos de la replicacin de ADN,
el semi conservativo o dispersivo
estn correctos, el ADN de doble
hebra
dentro
de
unabacteriadespus
de
una
generacin sera una mezcla de
ADN nuevo y ADN viejo y por
ende,
una
hebra
estara
15
compuesta de N y una hebra
estara compuesta de de14N. Por

Modelo Semi - Conservativo

Mientras las clulas bacteriales crecan y se dividan ms, Meselson y Stahl observaron de que la
banda ADN15N desapareca y una banda de ADN14N apareca y despus se pona progresivamente
mas obscura y una banda dedensidadintermedia apareca y persista en la misma intensidad. Esto
descrdito fuertemente el modelo dispersivo de lareplicacinde ADN, el cual predijo de que solo una
banda de ADN existira y se hara progresivamente menos densa que la cantidad de ADN 14N el la
mezcla dispersiva incrementaba con cada generacin. Por ende, en un simple experimento con
resultados bien claros, Meselson y Stahl refutaron slidamente dos de los posibles modelos de
replicacin de ADN, al mismo tiempo apoyando fuertemente otro posible modelo.

Resumiendo

El ADN que contiene el 15N es


ms denso que el que contiene
el 14N de modo que se hundi a
una posicin inferior en el
gradiente de cesio.
Tras una generacin en el
medio 14 N, las bacterias
produjeron una sola banda de
ADN
con
una
densidad
intermedia entre la del ADN-14N
y ADN-15N, lo cual indic que
solo una cadena de cada
dplex contena 15N.
Tras dos generaciones en el
medio 14N, se obtuvieron dos
bandas, una de densidad
intermedia (en la que una de
las cadenas contena 15N) y una
baja densidad (en que ninguna

Gracias