Metode kromatografi

kolom

A. Membuat kolom
(packing)
1. Cara basah
lebih mudah untuk memperoleh packing yang
mempberikan pemisahan yang baik. Kolom dijaga
untuk tidak kering dengan harus ada selapis fase
gerak diatas lapisan pasir. Pada proses packing,
dinding luar kolom di semprot dengan aseton
untuk mendinginkan kolom agar menghambat
terbentuknya gelembung udara
2. Cara kering
umumnya dilakukan untuk alumina. Packing
kolom disimpan dengan mempertahankan selapis
fase gerak berada diatas lapisan pasir.

B. Penyiapan sampel
sampel dilarutkan pada pelarut yang
sesuai, kemudian dituang pada packing
kolom. Kecepatan menetes fase gerak diatur
sesuai besar/kecilnya kolom. Fase gerak
yang keluar ditampung sebagai fraksi.
larutan ekstrak dicampur dengan fase
diam, kemudian dikeringkan dalam rotary
evaporator hingga diperoleh serbuk ekstrak
kering. Serbuk ditaburkan diatas packing
kolom dan ditutup dengan selapis pasir.
Selanjutnya sampel siap dielusi.

C. Elusi (pengembangan)
Elusi isokratik yaitu selama proses
elusi menggunakan fase gerak
dengan polaritas tetap.
Elusi gradien (bertahap) yaitu
fase gerak dibuat berubah-ubah
polaritasnya, pada umumnya dimulai
dari fase gerak non polar kemudian
berubah ke polar.

D. Mendeteksi komponen yang

dipisahkan
Yang umum digunakan dan mudah
di kerjakan adalah dengan memonitor
fraksi dengan KLT. Fraksi yang
mempunyai profil bercak KLT yang
mirip digabungkan. Kemudian
gabungan tersebut dianalisi lebih
lanjut.