Testarea susceptibilitatii

bacteriilor la antibiotice

Ce trebuie sa stie laboratorul de

bacteriologie
Ce bacterii se testeaza?
Ce metode se folosesc?
Fata de care AB se face
testarea ?
Care sunt rezultatele?

Ce bacterii se testeaza?
Bacterii care produc infectii si apartin unor specii
ce pot dezvolta rezistenta fata de AB utilizate
obisnuit
Exista standarde de interpretare bazate pe date
clinice si de laborator
Nu se efectueaza testarea pe amestecuri de specii
bacteriene

Ce bacterii se testeaza?
Pseudomonas aeruginosa
Enterobacteriaceae
Staphylococcus spp
Enterococcus spp.
Streptococcus spp
Streptococcus pneumoniae.
Neisseria spp.
Haemophilus spp

Metode de rutina de testare a

sensibilitatii la antibiotice a
bacteriilor (TSA)

Teste de rutina pentru testare

Antibiograma difuzimetrica (Kirby
Bauer)
Determinarea CMI (microdilutii)
Metoda de referinta

E-test

Antibiograma
difuzimetrica

Inoculul bacterian
Turbididate corespunzatoare 0,5 unit. McFarland
Comparatie fata de etalon sau spectrofotometrie
Insamantare a 2-5 colonii,incubare 2-6 ore, 37
grade Celsius
Densitate 150 000 000/ml

Prepararea
inoculului

Selectarea coloniilor

Omogenizare

Standardizarea
inoculului

Mediul utilizat
Se utilizeaza agarul Muller-Hinton
Steril, turnat in placi Petri perfect plate, 4 mm
grosime
Racire la temperatura camerei, utilizare sau
conservare refrigerat max.7 zile
Controlul sterilitatii
Ph- 7,2-7,4

Insamantarea placii
Se introduce un tampon in suspensie
Se inlatura excesul de lichid prin presare
Se insamanteaza uniform pe toata suprafata,
repetand operatia inca de 2 ori si rotind placa
cu cate 60 de grade
Se lasa placa sa se usuce, cu capacul
intredeschis 5-15 min

Insamantare

Prelevare

Microcomprimate antibiotice

Pastrare 2-8 grade Celsius sau congelate

Reechilibrare termica 1-2 ore
Utilizare de desicanti in recipiente
Distribuitorul se pastreaza in frigider
Valabilitate corespunzatoare

Distribuirea microcomprimatelor

Contact complet cu suprafata placii

Distanta minima intre microcomprimate 24 mm
Nu e permisa mutarea discurilor
Predifuzie 15 min la temperatura camerei
Incubare, rasturnata, 16-18 ore, la 35-37 grade

Incubare

Distributia discurilor

Masurare
Masurarea zonei de inhibitie completa, inclusiv
diametrul discului
Rigle sau instrumente speciale
Masurare pe spatele placii
Pentru medii cu sange, masurare cu lumina
reflectata, dupa inlaturarea capacului
Colonii in zona de inhibitie, se face retestare

Masurarea zonelor de inhibitie

Lumima
transmisa

Metode
modificate
pentru bacteriile
cu crestere
dificila - lumina
reflectata

Criterii de interpretare (mm)

exemple
Cont.
disc (ug)

Rez

Int

Sens

cefazolin

30

14

15-17

18

gentamicina

10

12

13-14

15

Antibiotic

Antibiograma difuzimetrica
Rezultate calitative:
Sensibil: categoria implica faptul ca infectia poate fi
tratata cu agentul antimicrobian, in doza indicata
tipului de infectie
Intermediar include agenti antimicrobieni cu CMI
apropiate de nivelurile serice obtinute in urma
administrarii dozelor terapeutice; poate fi eficace
daca se concentreaza la locul infectiei (ex. urina)
sau daca se poate administra in cantitati mai mari
decat in mod obisnuit

Antibiograma difuzimetrica
Rezultate calitative:
Rezistent - tulpinile nu sunt inhibate de
nivelurile de antibiotic realizate dupa
administrarea dozelor terapeutice; nu au
aplicabilitate clinica

Cauze obisnuite de eroare

Citirea eronata a diametrelor zonelor de inhibitie

Contaminarea sau modificarea tulpinii de control
Inocul necorespunzator(densitate, contaminare)
Incubare incorecta (temp,atm)
Variabilitatea calitatii mediului utilizat
Pierderea eficacitatii discurilor

Limitele metodei difuzimetrice

A fost standardizata pentru bacteriile cu
crestere rapida
Pentru germenii cu crestere dificila testarea a
fost modificata si adaptata
Rezultatele nesatisfacatoare pot apare dupa o
terapie prelungita; initial germenii sunt sensibili,
dar pot deveni rezistenti dupa 3-4 zile de la
inceperea terapiei

CMI
Concentratia minima inhibitorie
Cea mai mica concentratie de antibiotic
care inhiba cresterea unei bacterii
Interpretare:
Sensibila
Intermediara
Rezistenta

Conditii clinice cand CMI este util:

Endocardita
Meningita
Septicemia
Osteomielita
Pacienti imunodeprimati (HIV, cancer, etc.)
Pacienti cu proteze valvulare
Pacienti care nu raspund la tratament in ciuda unui
rezultat sensibil la AB

Prepararea inoculului pentru CMI

(Metoda de referinta CLSI)
Standardizarea suspensiei de
inocul
concentratia finala
3 5 x 105 UFC/ml
(3 5 x 104 UFC/godeu)

Prepararea suspensiei
de inocul

Microdilutie in placa CMI

Diluarea si amestecul
suspensiei de inocul

Turnarea inoculului
Si distributia in placa

Incubare

Inocularea placii
de control

Examinarea
placii de control

Lumina reflectata

Lumina transmisa

Citirea CMI

CMI
0.5
1
2

- +

4
8
16
32
64
>64

>64

CMI pe benzi

S. pneumoniae
CMI Penicilina
= 3 g/ml

Criterii de interpretare CMI

( g/ml)
Antibiotic

Sens

Interm

Rez

cefazolin

16

32

gentamicina

16