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CONSERVACIN

CONSERVACIN DE
DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS
EN
EN LA
LA INDUSTRIA
INDUSTRIA

Importancia
Importancia de
de los
los
Microorganismos
Microorganismos en
en la
la Industria
Industria

Producir
Producir fermentaciones
fermentaciones de
de alto
alto
rendimiento.
rendimiento.

No
No ser
ser susceptibles
susceptibles aa mutaciones.
mutaciones.

Generar
Generar menor
menor cantidad
cantidad de
de compuestos
compuestos
secundarios
secundarios no
no deseados.
deseados.

Permitir
Permitir la
la fcil
fcil yy econmica
econmica
recuperacin
recuperacin de
de los
los compuestos
compuestos
producidos.
producidos.

Mantenimiento
Mantenimiento de
de Cultivos
Cultivos
Objetivos:
Objetivos:

Preservar
Preservar la
la pureza
pureza gentica,
gentica, sin
sin prdida
prdida
de
de sus
sus propiedades
propiedades bioqumicas.
bioqumicas.

Preservar
Preservar los
los niveles
niveles de
de produccin
produccin inicial.
inicial.

Facilitar
Facilitar el
el transporte
transporte yy manejo
manejo del
del cultivo.
cultivo.

Eleccin
Eleccin del
del mtodo
mtodo de
de
conservacin
conservacin
La
La mejor
mejor eleccin
eleccin procura:
procura:

Evitar
Evitar la
la contaminacin
contaminacin en
en el
el proceso
proceso
de
de conservacin.
conservacin.

Supervivencia
Supervivencia del
del 70-80%
70-80% de
de las
las
clulas.
clulas.

Clulas
Clulas genticamente
genticamente estables.
estables.

Mtodos
Mtodos de
de conservacin
conservacin aa
largo
largo plazo
plazo

Son
Son los
los ms
ms efectivos.
efectivos.

Paralizan
Paralizan el
el crecimiento
crecimiento de
de las
las clulas
clulas
microbianas
microbianas sin
sin matarlas.
matarlas.

Estabilidad
Estabilidad gentica.
gentica.
Los
Los mtodos
mtodos ms
ms utilizados
utilizados son:
son:

Congelacin.
Congelacin.

Liofilizacin.
Liofilizacin.

Congelacin
Congelacin
Consiste
Consiste en
en
guardar
guardar los
los
microorganismos
microorganismos
en
en suspensin
suspensin
con
con un
un agente
agente
crioprotector
crioprotector aa
temperaturas
temperaturas
menores
menores aa 0C
0C

Proceso
Proceso de
de Congelacin
Congelacin

Hacer
Hacer crecer
crecer el
el cultivo
cultivo hasta
hasta la
la fase
fase
estacionaria.
estacionaria.

Utilizar
Utilizar una
una densidad
densidad celular
celular elevada.
elevada.

Suspender
Suspender en
en un
un agente
agente crioprotector
crioprotector (glicerol
(glicerol
10%,
10%, glucosa,
glucosa, dextranos,
dextranos, etc.)
etc.)

Colocar
Colocar en
en ampollas
ampollas de
de vidrio
vidrio oo plstico
plstico
selladas
selladas yy posteriormente
posteriormente sumergir
sumergir en
en
nitrgeno
nitrgeno lquido
lquido aa (-196C)
(-196C)

Congelacin
Congelacin lenta,
lenta, descongelacin
descongelacin rpida.
rpida.

Viabilidad
Viabilidad yy estabilidad
estabilidad de
de
las
las clulas
clulas
Dependen
Dependen de
de 44 factores:
factores:

Edad
Edad de
de las
las clulas.
clulas.

Velocidad
Velocidad de
de congelacin
congelacin yy descongelacin
descongelacin
(1C/min)
(1C/min)

Temperatura
Temperatura de
de congelacin
congelacin (no
(no ms
ms de
de
-70C)
-70C)

Empleo
Empleo de
de crioprotectores.
crioprotectores.

Ventajas
Ventajas yy desventajas
desventajas
de
de la
la congelacin
congelacin

Reduce
Reduce la
la actividad
actividad
metablica
metablica evitando
evitando
mutaciones.
mutaciones.

Sirve
Sirve para
para cortos
cortos yy
largos
largos perodos.
perodos.

Requiere
Requiere de
de aparatos
aparatos
especiales.
especiales.

No
No es
es recomendable
recomendable
para
para transportar
transportar
cepas.
cepas.

Costo
Costo moderado.
moderado.

Liofilizacin
Liofilizacin
Consiste
Consiste en
en el
el
congelamiento
congelamiento
de
de un
un cultivo
cultivo
seguido
seguido por
por un
un
secado
secado bajo
bajo
vaco.
vaco. Es
Es decir,
decir,
la
la sublimacin
sublimacin
del
del agua
agua de
de la
la
suspensin
suspensin
celular.
celular.

Proceso
Proceso de
de Liofilizacin
Liofilizacin

Se
Se parte
parte de
de un
un cultivo
cultivo en
en fase
fase estacionaria.
estacionaria.

Se
Se resuspenden
resuspenden las
las clulas
clulas en
en un
un medio
medio
crioprotector
crioprotector (leche
(leche descremada
descremada 10-20%,
10-20%, suero
suero
fetal
fetal bovino,
bovino, inositol)
inositol) no
no glicerol.
glicerol.

Alta
Alta densidad
densidad celular.
celular.

Se
Se coloca
coloca la
la suspensin
suspensin en
en una
una ampolla
ampolla yy se
se
congela
congela aa -40C.
-40C.

Se
Se deshidrata
deshidrata mediante
mediante sublimacin
sublimacin al
al vaco.
vaco.

Factores
Factores que
que intervienen
intervienen en
en la
la
eficacia
eficacia de
de la
la Liofilizacin
Liofilizacin

Tipo
Tipo de
de microorganismo.
microorganismo.

Concentracin
Concentracin celular
celular (10
(1099 clulas/ml)
clulas/ml)

Temperatura
Temperatura de
de sublimacin
sublimacin (-50C)
(-50C)

Grado
Grado de
de deshidratacin
deshidratacin alcanzado
alcanzado (1%)
(1%)

Atmsfera
Atmsfera de
de oxgeno
oxgeno en
en el
el tubo.
tubo.

Condiciones
Condiciones de
de almacenamiento
almacenamiento
(temperatura
(temperatura constante
constante 18C,
18C, oscuridad)
oscuridad)

Ventajas
Ventajas yy desventajas
desventajas de
de
la
la Liofilizacin
Liofilizacin

Estabilidad
Estabilidad
gentica
gentica alta.
alta.

Comodidad
Comodidad para
para el
el
almacenamiento
almacenamiento yy
transporte.
transporte.

La
La mayora
mayora de
de
organismos
organismos
sobreviven
sobreviven aa la
la
liofilizacin.
liofilizacin.

Tratamiento
Tratamiento ms
ms
complejo.
complejo.

Tiempo
Tiempo de
de
recuperacin
recuperacin
celular
celular mayor.
mayor.

Alto
Alto costo
costo de
de los
los
equipos.
equipos.

Mtodos
Mtodos alternativos
alternativos
Cuando
Cuando las
las cepas
cepas no
no resisten
resisten los
los mtodos
mtodos de
de
eleccin
eleccin oo no
no existen
existen los
los equipos
equipos necesarios,
necesarios,
se
se pueden
pueden utilizar
utilizar otros
otros mtodos,
mtodos, los
los ms
ms
comunes
comunes son:
son:
Conservacin
Conservacin por
por transferencia
transferencia peridica.
peridica.
Suspensin
Suspensin en
en agua
agua destilada
destilada oo agua
agua de
de
mar
mar estril.
estril.

Conservacin
Conservacin por
por transferencia
transferencia
peridica
peridica

Consiste
Consiste en
en el
el repique
repique peridico
peridico del
del cultivo
cultivo en
en
un
un medio
medio nutritivo
nutritivo fresco.
fresco.

El
El intervalo
intervalo de
de transferencia
transferencia vara
vara con
con el
el
microorganismo.
microorganismo. (15
(15 aa 60das)
60das)

Debe
Debe considerarse
considerarse el
el medio
medio adecuado
adecuado para
para cada
cada
especie.
especie.

Inconvenientes
Inconvenientes

Baja
Baja estabilidad
estabilidad gentica,
gentica, posibilidad
posibilidad de
de
mutacin
mutacin yy prdida
prdida de
de las
las caracterstica
caracterstica del
del
microorganismo.
microorganismo.

Riesgo
Riesgo de
de contaminacin.
contaminacin.

Alteraciones
Alteraciones en
en el
el medio
medio de
de cultivo.
cultivo.

Mantenimiento
Mantenimiento bajo
bajo capa
capa de
de
aceite
aceite

Consiste
Consiste en
en cubrir
cubrir completamente
completamente el
el
cultivo
cultivo despus
despus de
de su
su desarrollo,
desarrollo, sobre
sobre
un
un medio
medio slido
slido con
con una
una capa
capa de
de aceite
aceite
mineral
mineral oo vaselina
vaselina estril.
estril.

Se
Se conservan
conservan aa temperatura
temperatura ambiente
ambiente oo
en
en la
la heladera
heladera por
por varios
varios aos.
aos.

Posibilidad
Posibilidad de
de mutaciones
mutaciones aa los
los 33 aos.
aos.

Suspensin
Suspensin en
en agua
agua destilada
destilada oo
agua
agua de
de mar
mar estril
estril

Alto
Alto porcentaje
porcentaje de
de viabilidad
viabilidad para
para hongos
hongos
filamentosos,
filamentosos, levaduras
levaduras yy algunas
algunas bacterias.
bacterias.

Consiste
Consiste en
en suspender
suspender en
en agua
agua estril
estril el
el
microorganismo
microorganismo (10
(1044-10
-1055 clulas/ml)
clulas/ml)

Para
Para microorganismos
microorganismos marinos,
marinos, agua
agua de
de mar
mar
diluida.
diluida.

Desecacin
Desecacin en
en papel
papel filtro
filtro

Se
Se utiliza
utiliza un
un papel
papel absorbente
absorbente
(Whatmann
(Whatmann n
n 3)
3) que
que se
se impregna
impregna
con
con una
una solucin
solucin densa
densa de
de clulas
clulas yy
se
se deja
deja secar
secar al
al aire
aire en
en condiciones
condiciones
estriles.
estriles.

Desecacin
Desecacin en
en suelo,
suelo, arena
arena yy
silicagel
silicagel

Se
Se aaden
aaden las
las clulas
clulas aa estos
estos sustratos.
sustratos.

Los
Los sustratos
sustratos los
los protegen
protegen al
al desecar.
desecar.

Generalmente
Generalmente se
se utiliza
utiliza para
para los
los
microorganismos
microorganismos productores
productores de
de esporas
esporas
(largos
(largos perodos).
perodos).

Desecacin
Desecacin en
en bolitas
bolitas de
de
alginato
alginato

Eficaz
Eficaz para
para algas
algas yy clulas
clulas vegetales.
vegetales.

Las
Las clulas
clulas se
se colocan
colocan en
en una
una matriz
matriz de
de
alginato.
alginato.

El
El agua
agua se
se elimina
elimina por
por tratamiento
tratamiento con
con
soluciones
soluciones hipertnicas
hipertnicas sucesivas
sucesivas yy posterior
posterior
desecacin
desecacin al
al aire
aire hasta
hasta que
que se
se pierde
pierde un
un 70%
70%
de
de su
su contenido
contenido en
en agua.
agua.

Se
Se guarda
guarda aa temperaturas
temperaturas de
de 4C
4C yy 18C
18C ee
incluso
incluso aa (80C).
(80C).

Desecacin
Desecacin en
en sal
sal gorda
gorda para
para
halobacterias
halobacterias

Se
Se mezclan
mezclan las
las clulas
clulas con
con sal
sal yy se
se
dejan
dejan desecar
desecar espontneamente.
espontneamente.

La
La desecacin
desecacin no
no es
es total
total pero
pero las
las
clulas
clulas dejan
dejan de
de multiplicarse
multiplicarse por
por la
la
insuficiente
insuficiente cantidad
cantidad de
de agua
agua
disponible.
disponible.

CONSERVACION
CONSERVACION DE
DE DIFERENTES
DIFERENTES
GRUPOS
GRUPOS DE
DE MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

GRUPO

MTODO

Algas y
cianobacterias

Subcultivos seriados
Congelacin en nitrgeno lquido

bacterias
virus
hongos

Liofilizacin
Congelacin en nitrgeno lquido
Desecacin en suelo