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CITOMETRIA

Lic. T.M. Jos A. Rios Carbajal


Hospital III Iquitos - EsSalud
RECUENTO CELULAR

Introduccion
Los recuentos celulares son una serie de procedimientos

que tienen por objetivo determinar el nmero de cada uno de los

tipos celulares que estn comprendidos en una unidad de

volumen de sangre (Generalmente en 1 mm3)


RECUENTO CELULAR

Todos los recuentos celulares constan de 3 fases:


1era.- Dilucin de la sangre.

2do.- Cmputo del nmero de clulas.

3era.- Clculo matemtico del nmero de clulas presentes en 1 mm3 de sangre

Los recuentos celulares pueden realizarse mediante:


Mtodos manuales (recuento en cmara)

Mtodos automticos (recuento en contadores electrnicos)


RECOLECCION DE MUESTRA
Ayunas
Sangre venosa:
Anticoagulante: EDTA
Proporcin EDTA/muestra
Sistemas al vaco: correcta puncin
VALORES NORMALES
Eritrocitos
Hombres : 5.0 0.8 millones/mm3
Mujeres : 4.8 0.6 millones/mm3
Nios : 4.1 - 5.1 millones/mm3
Leucocitos: 5.000-10.000/mm3
Mielocitos: 0% [0 por mm 3]
Neutrfilos juveniles: 3-5% [150-400/mm3]
Neutrfilos segmentados: 54-62% [3.000-5.800/mm3]
Linfocitos : 25 - 33% [1.500-3.000/mm3]
Monocitos : 3 - 7% [285-500 mm 3]
Eosinfilos: 1 - 3% [50-250 mm3]
Basfilos : 0 - 0.75% [15-50 mm3]
Plaquetas : 150.000 - 450.000 / mm3
Reticulocitos : 0.5 - 1.5% del nmero de eritrocitos
Coeficiente de Variacin (%) de los Principales
Parmetros de MANUAL*
PARAMETRO
Hematologa
ELECTRNICO**
(%) (%)
Parmetros eritrocitarios
Hemoglobina 9.0 a 10.8 < 1.0
Recuento de eritrocitos 11.0 a 22.0 < 1.0
VCM 11.8 a 16.2 < 1.0
HCM > 10.0 1.5
CHCM > 10.0 1.0
Parmetros leucocitarios
Recuento de leucocitos 11.8 a 25.2 2.0
Parmetros plaquetarios
Recuento de plaquetas 22.0 a 60.0 < 4.0
METODO MANUAL
RECUENTO EN CAMARA
Materiales
-Cmara de recuento de Neubauer o Burker

-Cubreobjetos

-Pipetas especiales para dilucin de la sangre

-Solucin diluyente para la sangre

-Microscopio
CAMARA DE NEUBAUER
Qu es una cmara de recuento y dnde se utiliza?

Tambin se llama cmara cuentaglbulos o hemocitmetro.

La cmara de conteo es un aparato de vidrio ptico especial de precisin. Se utiliza para contar clulas u

otras partculas en suspensiones bajo el microscopio. En la porcin central esta dividida en 3 bandas

perpendiculares al eje longitudinal de la cmara. De elllas, las dos laterales se hallan sobreelevadas 0.1

mm con respecto a la central, y en est hay grabado un retculo cuadrangular.

La banda central puede estar, a su vez, subdivida en 2 semibandas idnticas y separadas por un surco

paralelo y con un retculo idntico en cada una de las dos semibandas.


CAMARA DE NEUBAUER
PIPETAS ESPECIALES PARA
DILUCION

Pipeta de leucocitos ( De Thoma)

(Perla blanca)

Pipeta de eritrocitos (De Thoma)

(Perla roja)
SOLUCION DILUYENTE
PARA LA SANGRE
Para recuento de Para recuento de

Leucocitos Hematies

Solucin de TURK Solucin de HAYEM

Cloruro de sodio 0.9%


MICROSCOPIO
DILUYENTES PARA HEMATIES
SOLUCIN DE HAYEM
Reactivos
Bicloruro de mercurio 0,5 g
Sulfato de sodio 5,0 g
Cloruro de sodio 1,0 g
Agua destilada 200 mL
Procedimiento
Se mezclan todos los reactivos y se guarda en frasco de vidrio en lugar
fresco.

SOLUCIN SALINA FISIOLGICA AL 0,9%


Reactivos
Cloruro de sodio 0,9 g
Agua destilada c.s.p. 100 Ml
Procedimiento
Mezclar el cloruro de sodio en el agua destilada. Guardar en lugar
fresco.
DILUYENTES PARA
LEUCOCITOS
SOLUCIN DE TURK
Reactivos
cido actico glacial 2,0 mL
Solucin acuosa de violeta de genciana al 1% 1,0 mL
Agua destilada c.s.p. 100 mL

Procedimiento
Mezclar los reactivos y guardar en frasco mbar en lugar fresco
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS

Principio del recuento


El recuento de leucocitos es uno de los mtodos de rutina. La
condicin previa de todos los mtodos de recuento es la dilucin y
preparacin programadas de una muestra de sangre. El cido
actico contenido en la solucin de Trk hemoliza los eritrocitos y el
colorante contenido tie los leucocitos. Se recuenta el tipo de clula
deseado en un volumen definido y se calcula el nmero de clulas
en un microlitro de sangre.
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Llenado de la pipeta
Aspirar sangre en una pipeta de leucocitos hasta la marca 1.0,
seguidamente aspirar solucin de Trk hasta la marca 11.
La dilucin es 1:10.
Tambin es posible una dilucin de 1: 20 (sangre hasta la marca
0.5 y solucin de Trk hasta la marca 11).
Mezclar cuidadosamente la sangre y la solucin de Trk, dejar
en reposo como mximo durante 1 hora.

Llenado de la cmara de recuento


Desechar las 3 primeras gotas del lquido,
llenar la cmara de recuento y efectuar el
recuento.
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Tcnica de conteo
Recuento en el microscopio
Recuento con objetivo 10x, en microscopios antiguos
con condensador bajado, cuya lente frontal est
desplegada.Se cuentan los 4 grandes cuadrados de
las esquinas, de 1 mm de lado cada uno.
Se recomienda hacer siempre determinaciones dobles
cuyos resultados no deben diferir ms del 15 %.
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Clculo

Partculas por l volumen = partculas contadas .


superf. cont. (mm2) x profundidad cmara (mm) x dilucin

Ejemplo: Leucocitos
Cmara: Neubauer
1. Clulas contadas: 120 leucocitos.
2. Superficie contada: 4 cuadrados grandes
corresponden a 4 mm2
3. Profundidad cmara: 0,1 mm
4. Dilucin: 1 : 20 120 .
4 mm2 x 0,1 mm x 1/20
= 6,000 leucocitos/l sangre
RECUENTO DE GLOBULOS
BLANCOS
Correccin de valores para restar eritrocitos nucleados
Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el lquido de dilucin, por lo tanto pueden observarse al realizar el
recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente
frmula:
Clculo:
La concentracin del nmero de normoblastos (por litro) es:
Nmero de normoblatos contados x concentracin o nmero de leucocitos
100 + N de normoblastos contados
Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin del nmero de leucocitos es 16 000 /mm3, la concentracin
del nmero de normoblastos ser:
50 x 16 000 = 5300 / mm3
100 + 50
Recuento corregido de glbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3
RECUENTO DE HEMATIES
Diluyente de glbulos rojos:

Cloruro de Sodio al 0,9%

Diluyente de Hayem
RECUENTO DE HEMATIES
Partculas por l volumen = partculas contadas .
superf. cont. (mm2) x profundidad cmara (mm) x dilucin

Ejemplo: Eritrocitos
Cmara: Neubauer
1. clulas contadas: 528 eritrocitos
2. superficie contada: 5 cuadrados medianos
corresponden a 0,2 mm2
3. profundidad cmara: 0,1 mm
4. dilucin: 1 : 200 528 .
0,2 x 0,1 x 1/200
= 5,28 x 106 eri/l sangre
= 5,28 millones de eri/l sangre
RECUENTO DE PLAQUETAS
Principio
El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste
de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede observar en
un microscopio convencional.

Recuento en lmina (microscopio convencional)


Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la
frmula convencional para recuento de plaquetas.

Valores de referencia
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
RECUENTO DE PLAQUETAS
Recuento en cmara

Materiales
Hemocitmetro o cmara de Neubauer.
Solucin de procana
Pipetas automticas de 100 a 1000 mL y 0 a 100 mL.
Tubos de plstico de 12 x 75.
Microscopio convencional.
RECUENTO DE PLAQUETAS
SOLUCIN DE PROCANA
Reactivos
Procana (polvo) 3g
Cloruro de sodio 200 mg
Agua destilada c.s.p. 1000 mL

Procedimiento
Mezclar los reactivos en agua destilada y completar hasta llegar a un litro.
Guardar en refrigeracin a 4C.
RECUENTO DE PLAQUETAS

Mtodo
Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.
Hacer una dilucin de 20 uL de sangre total con 380 uL de solucin de
procana en un tubo de plstico de 12 x 75 (dilucin 1/20).
Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla.
De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer.
Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda.
Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retculo central de
1 mm2 cuadrado.
Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin:
RECUENTO DE PLAQUETAS
Resultados
Se aplica la siguiente frmula:
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
rea mm2 x altura mm x dilucin
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
1/5 mm2 x 1/10mm x 1/20
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos
1/1000 mm3
N de plaquetas x mm3 = Plaquetas contadas x 1000 / mmm3

Valores de referencia
150 000 - 450 000 plaquetas/mm3
RECUENTO DE
RETICULOCITOS

Fundamento
Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros formados por ARN y protoporfirina en
el citoplasma.
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede
teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una
misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la
temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes
visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Materiales
Lminas portaobjetos.
Tubos de ensayos de 12 x 75 mm.
Embudo.
Filtro de papel.
Pipetas Pasteur con chupones.
Contador manual (no imprescindible).
Solucin saturada de azul de cresil brillante (filtrada).
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Procedimiento
En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante.
Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma
cantidad de colorante.
Mezclar la solucin.
Se coloca luego en bao mara por espacio de 10 a 15 minutos.
Se realizan frotices sanguneos.
Se lee con objetivo de 100x.
RECUENTO DE
RETICULOCITOS
Resultados
Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente
cuidadosamente:
Cantidad total de glbulos rojos.
Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos.
El recuento se ha venido haciendo clsicamente de forma manual mediante la
observacin en el microscopio ptico. El resultado se da en porcentaje sobre
cada 100 hemates. Es ms til calcular el nmero de reticulocitos por litro,
mediante la frmula:
Reticulocitos/L = % reticulocitos x nmero hemates/L
100
METODO
AUTOMTICOS
METODOS AUTOMATICOS
METODOS AUTOMATICOS
Objetivos de automatizar

FIABILIDAD ( CALIADAD ANALITICA )

PRACTICABILIDAD

SEGURIDAD

PRODUCTIVIDAD

DISMINUCION DE COSTOS