TIPOS DE AGUA UTILIZADOS EN

LABORATORIO Y SU IMPORTANCIA
Introduccin al agua para uso en
laboratorios
Principios:
Como cualquier reactivo de uso en el laboratorio, el
agua debe cumplir con especificaciones bien
definidas, de acuerdo a los procesos en que participa.
Debe ser agua con la calidad necesaria para realizar
los procesos analticos, que garantice la calidad de los
resultados de los ensayos
El agua purificada es un medio natural para el
crecimiento microbiano
Los sistemas de purificacin deben ser validados
correctamente.
El agua para uso en tcnicas de biologa molecular
debe estar libre de contaminacin de bacterias,
pirgenos o endotoxinas.
Fuentes y tipos de agua para
uso de Laboratorios
No hay en ladel
Contaminantes
naturaleza
agua: agua pura, ya que puede
contener hasta 90 posible contaminantes no
aceptables
Grupos contaminantes :
Compuestos inorgnicos
Compuestos orgnicos
Slidos
Gases
Microrganismos
Contaminantes del agua
El tratamiento depende de la qumica y de los
contaminantes del agua, influenciados por:
Agua de lluvia
Erosin Minerales problema
Calcio y magnesio
Polucin
Hierro y manganeso
Disolucin
Silicatos
Lixiviacin
Dixido de carbono
Evaporacin
Sulfuro de hidrgeno
Sedimentacin
Fosfatos
Descomposicin
ntaminantes del agua

Minerales problema Microorganismos

adicionales Biocapas
Cobre Algas
Aluminio Protozoarios
Metales pesados Cryptosporidium
Arsnico, plomo, Giardia
cadmio Bacterias
Nitratos Pseudomonas
Bacterias gram
negativas, no
fermentadoras
Escherichia coli y
coliformes
Pirgenos y endotoxinas
Contaminantes del agua natural
Durante el ciclo natural del agua adquiere diferentes compuestos que se
consideran impurezas. Estas impurezas presentes en el agua se pueden
clasificar en tres grandes grupos:
Inicas Disueltas (inorgnicos)
No inicas Insolubles (orgnicos, microorganismos, pirgenos, partculas)
Gaseosas

Inicas Disueltas
No inicas
Gaseosas
Cationes Aniones Insolubles

Ca2+ HCO3- Slidos CO2

Mg2+ CO32- Suspendidos H2S

Na+ OH- Turbidez NH3

K+ SO42- Color CH4

Materia
NH4+ Cl- O2
Orgnica
Fe2+ NO3- SiO2 coloidal Cl2
Microorganism
Mn2+ PO43-
os
 Clasificacin del agua purificada
Se han establecido diferentes grados de agua pura para usos en el
laboratorio, por razones tcnicas y econmicas. La razn de esta
clasificacin es asegurar la calidad apropiada del agua que se utiliza
para una aplicacin especfica, y minimizar los costos de operacin
de laboratorio. En general, cuanto ms puro es el grado requerido de
agua, ms caro es producirla.

Histricamente se han definido 4 grados de pureza para agua de

laboratorio:
1) Agua de grado primario
2) Agua desionizada
3) Agua de grado analtico
4) Agua ultra pura
 Agua de grado primario:

El agua de grado primario es el de ms bajo nivel de pureza, y

normalmente tiene una conductividad de 1-50 S/cm. Ligeramente
cargadas con aniones tales como dixido de carbono y slice que no
pueda ser separada, por lo tanto estarn presentes en aguas de este
grado.

Puede ser producida por:

1. Intercambio Aninico con resinas dbilmente bsicas,
2. smosis Inversa o
3. Destilacin simple.

Las aplicaciones de este tipo de agua incluyen:

1. Lavado cristalera y utencilios de laboratorio,
2. Baos Mara, Autoclaves, Humificadores, etc.
3. Alimentacin de purificadores de agua.
 Agua desionizada:

El agua desinizada tiene una conductividad tpica entre 1 y 0.1

S/cm (resistividad entre 1 y 10 M). Puede contener cargas
relativamente altas de compuestos orgnico y bacterias.

Es producida mediante:
1. Intercambiadores inicos con lechos mixtos de resinas
catinicas y resinas aninicas fuertemente bsicas.

Las aplicaciones de este tipo de agua incluyen:

1. Enjuague final cristalera para usos especiales,
2. Dilucin de muestras, reactivos y algunas soluciones
patrones.
3. Alimentacin de purificadores para agua de mayor pureza.
 Agua de grado analtico:

El agua de grado analtico no slo tiene alta pureza en

trminos inicos, tambin tiene bajas concentraciones
de compuestos orgnicos y microorganismos.
Una especificacin tpica sera:
Conductividad < 1,0 S / cm (resistividad> 1,0 m cm),
Carbono Orgnico Total (TOC) de <50 ppb y
Recuento Bacteriano < 1 CFU / ml.
Puede ser producida por:
Bidestilacin
Sistemas de purificacin que integren smosis inversa e
intercambio inico o EDI, absorcin y el tratamiento con luz
UV.
Puede ser utilizada para:
Preparacin de reactivos y soluciones buffer
medios nutritivos para el cultivo celular bacteriano y
Estudios microbiolgicos.
 Agua ultra pura:

Las modernas tcnicas de laboratorio permiten la deteccin de

sustancias en concentraciones cada vez ms bajas, lo que hace que los
requerimientos de pureza de los reactivos utilizados sean cada vez ms
exigentes.

El agua purificada, que es el componente mayoritario de las soluciones

empleadas en los laboratorios, no escapa a estos requerimientos de
pureza.

La calidad de agua grado analtico es insuficiente para este tipo de

aplicaciones por lo que se hace necesario el uso de unAgua Ultrapura
(Grado Reactivo).
Agua ultra pura:

Este grado de agua se aproxima a los niveles tericos de

pureza en trminos de resistividad, contenido orgnico,
partculas y recuento bacteriano.
Tpicamente, el agua ultrapura tiene una resistividad de
18.2 m cm, TOC < 10 ppb, filtracin de partculas
menores a 0.1 micras, recuentos bacterianos < 1 UFC/mL.

Este grado se logra mediante pulimiento de agua pre-

purificada por intercambio inico, smosis inversa o
destilacin.
La ultrafiltracin se utiliza para eliminar cualquier
volumen significativo de especies biolgicamente activas
tales como endotoxinas (tpicamente <0,005 EU/mL),
nucleasas y proteasas (no detectable). El agua ultra pura
apirgena se requiere en aplicaciones tales como el
cultivo de clulas de mamferos.
 Usos del agua ultra pura:

Se utiliza en las tcnicas ms crticas en el laboratorio:

ICP-MS / ICP / F-AAS / GF-AAS
HPLC / GC
Cromatografa Inica
GCMS
Biologa Molecular
PCR / Electroforesis / ELISA
Cultivos Celulares
Secuenciacin de ADN
 Normas internacionales para agua de laboratorio

El agua purificada es necesaria en todas las industrias y

organizaciones basadas en la ciencia, por esta razn se han
desarrollado a nivel nacional e internacional las normas para
establecer la calidad del agua para diversas aplicaciones en los
laboratorios.
Las normas ms relevantes son emitidas por los siguientes
organismos:
El Instituto de Normas para Clnicas y Laboratorios (CLSI)
La Sociedad Americana para Pruebas y Materiales (ASTM)
La Organizacin Internacional para la Normalizacin (ISO)
Las farmacopeas ms comunes, incluyendo la USP, EP y JP
 CLSI - C03-A4-AMD Preparation and Testing of Reagent
Water in the Clinical Laboratory; Approved Guideline Fourth Edition

CLSI - C03-A4-AMD Preparacin y Ensayos del Agua Grado Reactivo

en el Laboratorio Clnico; Gua Aprobada Cuarta Edicin

C03-A4-AMD
Vol. 26 No. 22
Replaces C3-P4
Vol. 25 No. 13
Especificaciones para Agua Reagente para Laboratorio Clnico (CLRW)

Impurezas Inicas Resistividad 10 M-cm

Impuerezas Orgnicas TOC < 50 ppb

Impurezas Conteo total heterotrfico en placa < 10

Microbiolgicas CFU/mL(*)
Filtro de 0.2 m o ms fino, en lnea cerca de
Contenido de Partculas
la salida de agua
* Los ensayos de epifluorescencia y endotoxinas son opcionales para
( )

proporcionar informacin extra,

Solamente el Agua CLRW es definida con detalles. Los otros grados, enumerados
a continuacin se describen en relacin a su aplicacin y los detalles definidos
por el usuario :
Agua Especial de Grado Reactivo (SRW)
Agua de Alimentacin para Instrumentos
Agua para usar como diluyente o reactivo
Agua pre-envasada
Agua para aplicaciones en autoclaves y lavado.
 Standards Worldwide

American Society for Testing and Materials

ASTM D1193 - 06(2011) Standard Specification for Reagent Water

ASTM D1193 - 06(2011) Norma de Especificacin para Agua Grado

Reactivo
 Clasificacin del agua, segn especificaciones ASTM D1193 -
06(2011)
Parmetros Tipo I* Tipo II** Tipo III*** Tipo IV

Conductividad elctrica
0.056 1.0 0.25 5.0
mx. (S/cm @ 25C)
Resistividad Elctrica
18.0 1.0 4.0 0.2
mn. (M-cm @ 25C)

pH @ 25C - - - 5.0 - 8.0

TOC mx. (g/l) 50 50 200 No lmite

Sodio mx. (g/l) 1 5 10 50

Slica mx. (g/l) 3 3 500 No lmite

Cloruros mx. (g/l) 1 5 10 50

 ASTM D1193 - 06(2011) Norma de Especificacin para Agua
Grado Reactivo

Estas especificaciones cubren los requisitos para el agua

apropiada para el uso en mtodos de ensayos qumicos y
fsicos, la seleccin de uno o varios grados est designado por
el mtodo o el investigador.
Notas:
Type I* Requiere el uso de filtro de membrana de 0.2 m
Type II** Preparada por destilacin
Type III*** Requiere el uso de filtro de membrana de 0.45
m
Cuando se necesitan controlar los niveles bacterianos, los tipos de
grado reactivos deben tener los siguientes niveles:

Type A Type B Type C

Total bacterial count max.
1 10 1000
CFU/100 ml
Endotoxin max. EU/ml 0.03 0.25 -
 INTERNATIONAL STANDARD

IS0 3696 First edition:1987 04 15

Water for analytical laboratory use - Specification and test methods

Agua para uso en anlisis de laboratorio - Especificacin y metodo de

ensayo
(NTN 04 023 12 - Marzo 2012)
Esta Norma determina las especificaciones y los correspondientes
mtodos de ensayo de tres grados de agua para uso en laboratorio
de productos qumicos inorgnicos.
No es aplicable al agua para el anlisis de contenidos
orgnicos mnimos, ni de agentes tensoactivos, ni para los
anlisis biolgicos o mdicos.
NOTA: Para ciertos fines (como por ejemplo algunos mtodos
analticos o ensayos en que se requiere que el agua sea estril o
exenta de pirgenos o con determinada tensin superficial) pueden
ser
NOTA necesarios
1: a causaensayos complementarios
de las dificultades especficos
asociadas a la medicinyde
una
pH purificacin
del agua de
adicional u otro tratamiento.
alta pureza y de la dudosa importancia del valor obtenido, no se han fijado
limites para el pH del agua de los grados
1 y 2.
NOTA 2: solo valido para el agua recin preparada. Durante su conservacin se
pueden producir cambios en la conductividad debido a contaminantes tales
como el CO2 atmosfrico y los lcalis de los recipientes de vidrio
NOTA 3: no se especifican limites para grado 1 debido a la dificultad del
ensayo
Clasificacin del agua, segn especificaciones ISO 3696:1987
Mtodo de
Parmetros Clase 1 Clase 2 Clase 3
Ensayo
No aplicable No aplicable
Intervalo de pH a 25 oC
(vase nota (vase nota 5,0 a 7,5 Apartado 7. 1
lmites Incluidos.
1) 1)
Conductividad 0,055 0,1
elctrica mS/m a 25 oC, (vase nota (vase nota 0,5 Apartado 7.2
mx. 2) 2)
No aplicable
Materia oxidable, mg/L
(vase nota 0,08 0,4 Apartado 7.3
mx.
3)
Absorbancia(A) a 254 No
0,001 0,01 Apartado 7.4
nm, mx. especificada
Residuo despus de No aplicable
evaporar y calentar a (vase nota 1 2 Apartado 7.5
110 oC mg/kg, mx. 3)
Contenido de slice
No
SiO2 0,001 0,02 Apartado 7.6
especificada
mg/L, mx.
(A): con celda de 1 cm de espesor, medidas en UA

Adoptada en Nicaragua bajo la Norma Tcnica Nicaragense: Agua

para uso en anlisis de laboratorio - especificacin y mtodos de
ensayo (NTN 04 023 12), Marzo 2012
gua para laboratorios grado 3 - ISO 3696:1987
Intervalo de pH a 25 oC lmites Incluidos. 5,0 a 7,5
Conductividad elctrica mS/m a 25 oC mx. 0,5
Materia oxidable, mg/L mx. 0,4
Absorbancia, UA a 254 nm, b = 1 cm, mx. No especificada
Residuo despus de evaporar y calentar a 110 oC, mg/kg mx. 2
Contenido de slice SiO2, mg/L mx. No especificada

Apropiada para la mayora de los trabajos de qumica en laboratorios

por va hmeda y la preparacin de soluciones de reactivos.

Salvo indicacin en contrario, se puede utilizar para el trabajo normal

de anlisis.
Se puede preparar mediante:
por destilacin sencilla,
por desionizacin (intercambio inico)
por osmosis inversa.
gua para laboratorios grado 2 - ISO 3696:1987
Con muy pocos contaminantes inorgnicos, orgnicos o coloidales.

Intervalo de pH a 25 oC lmites Incluidos. No aplicable (vase nota 1)

Conductividad elctrica mS/m a 25 oC mx. 0,1 (vase nota 2)
Materia oxidable, mg/L mx. 0,08
Absorbancia, UA a 254 nm, b = 1 cm, mx. 0,01
Residuo despus de evaporar y calentar a 110 oC, mg/kg mx. 1
Contenido de slice SiO2, mg/L mx. 0,02

Es apropiada para anlisis delicados, incluyendo la Espectrometra de

Absorcin Atmica (EAA) y la determinacin de componentes en
cantidades mnimas.
Se puede preparar por:
destilacin mltiple (bi tri-destilacin ), o por
desionizacin u osmosis inversa seguida de destilacin.
ua para laboratorios grado 1 - ISO 3696:1987
Exenta bsicamente de contaminantes constituidos por iones disueltos o
coloidales y materias orgnicas.

Intervalo de pH a 25 oC lmites Incluidos. No aplicable (vase nota 1)

Conductividad elctrica mS/m a 25 oC mx. 0,01 (vase nota 2)
Materia oxidable, mg/L mx. No aplicable (vase nota 3)
Absorbancia, UA a 254 nm, b = 1 cm, mx. 0,001
Residuo despus de evaporar y calentar a 110 oC, mg/kg mx. No aplicable (vase nota 3)
Contenido de slice SiO2, mg/L mx. 0,001

Es apropiada para los requisitos de anlisis mas exigentes, incluyendo la

cromatografa liquida de alta definicin (HPLC).

Se puede preparar por un tratamiento adicional del agua de grado 2 ( por

ejemplo osmosis inversa o desionizacin seguida de filtrado a travs de
una membrana con tamao de poro de 0,2 m para separa las partculas,
o por redestilacin en un aparato de slice fundido) .