Rekayasa Genetika

Fakultas Farmasi UMP

Rekayasa Genetika
Rekayasa genetika adalah upaya untuk
mendapatkan sifat tertentu dari suatu
sel/organisme melalui tahapan-tahapan
sbb:
Mengisolasi gen
Memodifikasi gen
Menyisipkan gen pada spesies baru
Membiakkan transgens
Organisme Transgenik
Transgen adalah gen yang sudah direkayasa
yang ditambahkan pada suatu organisme
Organisme transgenik adalah:
Organisme yang memiliki transgen
Organisme yang telah mengalami rekayasa genetika
Juga dinamakan GMO- genetically modified
organism
Rekayasa Genetika
Materi genetik bisa ditransfer antar spesies
Bakteri bisa memproduksi hormon manusia
Genetic
Engineering:
Technology
Rekayasa Genetika
1
DNA diisolasi, misalnya dari
darah
Enzim restriksi,, misalnya
EcoRI, HindIII, dll memotong
DNA

Potongan DNA lain yang

dipotong dengan enzim
restriksi yang sama bisa
ditempelkan, atau
direkombinasikan dengan
DNA tersebut
Rekayasa Genetika
2
Plasmid bakteri
dipotong dengan
menggunakan
enzim restriksi
yang sama
Potongan DNA tadi
kemudian
disisipkan pada
plasmid, sehingga
terbentuk DNA
rekombinan atau
plasmid
rekombinan
Rekayasa Genetika
Rekayasa Genetika
3
Plasmid rekombinan
kemudian dicampur
dengan bakteri yang
telah diberi perlakuan
sehingga bakteri
tersebut competent,
atau bisa menerima
plasmid.
Proses pemasukan
plasmid ke dalam sel
inang dengan cara
mencampur ini disebut
sebagai transformasi
Rekayasa Genetika
4
Plasmid secara alami
biasanya mengandung gen
yang menyandi sifat
resistensi terhadap antibiotik
Bakteri yang berhasil disisipi
plasmid yang memiliki gen
tersebut akan tumbuh pada
madia yang mengandung
antibiotik, sedangkan bakteri
yang tidak berhasil disisipi
akan mati.
Dengan demikian, bakteri
yang hidup membawa
plasmid rekombinan
Rekayasa Genetika
5
Sel bakteri yang berhasil
disisipi vektor rekombinan
akan tumbuh dan
membentuk koloni pada
media
Setiap sel pada koloni
yang sama memiliki
plasmid dan fragmen DNA
yang sama
Sel yang tumbuh pada
koloni yang berbeda
memiliki plasmid dan
fragmen DNA yang
berbeda pula
Rekayasa Genetika
Koloni yang
teridentifikasi
membawa gen yang
sesuai akan
ditumbuhkan pada
media untuk
melipatgandakan
jumlahnya, sehingga
jumlah DNA juga akan
bertambah
Sampel juga bisa
disimpan pada suhu
-80o F. Kondisi ini bisa
mempertahankan
viabilitas sel hingga
beberapa tahun.
Bidang Pertanian
Kapas dan tebu tahan
serangga
Tomat tahan simpan
Kedelai, jagung dan
kanola tahan herbisida
Pepaya tahan virus
Beras mengandung
vitamin A
Bunga matahari tahan
jamur
Aplikasi pada Manusia
Produksi obat
Diagnosa penyakit
Terapi gen
Pengobatan
Product Use

Insulin Diabetes

Interferon Cancer

Interleukin Cancer

Human growth hormone Dwarfism

Neuroactive proteins Pain

Aplikasi Lingkungan

Bioremediation - cleanup contaminated

sites; uses microbes designed to degrade
the pollution

Indicator bacteria contamination can be

detected in the environment
Future Health-related Biotech Products

Vaccines herpes, hepatitis C, AIDS, malaria

Tooth decay engineered Streptococcus mutans,

the bacteria that destroys enamel
 Edible Vaccines
Transgenic Plants Serving Human Health Needs

Works like any vaccine

A transgenic plant with a pathogen protein gene is developed
Potato, banana, and tomato are targets
Humans eat the plant
The body produces antibodies against pathogen protein
Humans are immunized against the pathogen
Examples:
Diarrhea
Hepatitis B
Measles
 The Golden Rice Story

Vitamin A deficiency is a major health problem

Causes blindness
Influences severity of diarrhea, measles

>100 million children suffer from the problem

For many countries, the infrastructure doesnt exist

to deliver vitamin pills

Improved vitamin A content in widely consumed crops

an attractive alternative
 -Carotene Pathway Problem in Plants
IPP

Geranylgeranyl diphosphate

Phytoene synthase

Phytoene
Problem: Phytoene desaturase
Rice lacks
these enzymes -carotene desaturase

Lycopene
Lycopene-beta-cyclase
Normal
Vitamin A -carotene
Deficient (vitamin A precursor)
Rice
 The Golden Rice Solution
-Carotene Pathway Genes Added

IPP

Geranylgeranyl diphosphate

Daffodil gene Phytoene synthase

Phytoene
Vitamin A
Phytoene desaturase
Pathway Single bacterial gene;
is complete performs both functions
and functional -carotene desaturase

Lycopene
Daffodil gene Lycopene-beta-cyclase

Golden -carotene
Rice (vitamin A precursor)
 Introducing the Gene
or
Developing Transgenics

Steps

1. Create transformation cassette

2. Introduce and select for transformants

 Transformation Cassettes

Contains

1. Gene of interest
The coding region and its controlling elements

2. Selectable marker
Distinguishes transformed/untransformed plants

3. Insertion sequences
Aids Agrobacterium insertion
 Transformation Steps

Prepare tissue for transformation

Tissue must be capable of developing into normal plants
Leaf, germinating seed, immature embryos

Introduce DNA
Agrobacterium or gene gun

Culture plant tissue

Develop shoots
Root the shoots

Field test the plants

Multiple sites, multiple years
 Delivering the Gene
to the Plant
Transformation cassettes are developed in the lab

They are then introduced into a plant

Two major delivery methods

Agrobacterium

Tissue culture
Gene Gun required to generate
transgenic plants
The Lab Steps
The Next Test Is The Field
Herbicide Resistance

Non-transgenics

Transgenics
Final Test of the Transgenic
Consumer Acceptance

RoundUp Ready Corn

Before After