AMBIENTAL
Biorremediacin
Monitoreo
Control de la
ambiental
polucin
AGROPECUARIO MEDICINA
APLICACIONES
Rendimiento de UTILES
Diagnstico
Calidad de Vacunas
cosechas
alimentos
Salud animal Teraputica
Ingeniera de protenas
Ingeniera Inmunologa
Bioqumica CONOCIMIENTO
Computacin
CIENTIFICO
Microbiologa
Gentica
Biologa Molecular Fisiologa
Nos encontramos frente a
una nueva Revolucin
Industrial llamada
Biotecnologa, no basada en
hierro y acero sino en
microbios que, en manos de
cientficos, se convierten en
minsculas fbricas para
producir frmacos,
compuestos qumicos
industriales, combustibles o
alimentos.
El prefijo BIO se refiere a
bacterias, levaduras y otras
clulas vivas, as como a
componentes de estas
clulas.
La TECNOLOGIA
consiste en relucientes
depsitos de acero, llenos de
microbios, conectados a sus
fuentes de alimentacin y
oxgeno mediante una
intrincada red de vlvulas
que se cierran y abren segn
los ritmos que marca una
computadora.
DEFINICION
Segn la Organizacin de
Cooperacin y Desarrollo
Econmicos:
Es la aplicacin de los
principios cientficos y de la
ingeniera al procesamiento de
materiales por agentes
biolgicos para proveer bienes y
servicios.
PRINCIPIOS
CIENTIFICOS Y DE LA
INGENIERIA:
Conjunto muy amplio
de disciplinas que ponen
especial nfasis en la
Microbiologa,
Bioqumica, Biologa
Molecular, Gentica,
Inmunologa e
Ingeniera Bioqumica y
Qumica.
MATERIALES:
Incluye a aquellos
orgnicos e
inorgnicos, en tanto
los agentes biolgicos
son, en general,
catalizadores
biolgicos; en
particular,
microorganismos,
clulas animales,
clulas vegetales, virus
y enzimas.
BIENES:
Todos los productos
(alimentos, productos
farmacuticos, recuperacin
de metales, etc.)
SERVICIOS:
Lo relacionado
especficamente con las
prestaciones tales como
purificacin de agua o
tratamiento de efluentes y
extraccin de derrames de
petrleo.
AREAS TEMATICAS
PRIORITARIAS
SALUD:
Vacunas (desarrollo de
vacunas por procedimientos
que utilicen ingeniera
gentica).
Reactivos de diagnstico:
Desarrollo de reactivos por
tcnicas inmunolgicas
(enzimo-inmunoensayos o
por ingeniera gentica).
AREA AGRICOLA:
Diagnstico de fitopatgenos en plantas
de inters econmico.
Desarrollo de agentes de control biolgico
y plantas.
Desarrollo de plantas transgnicas
resistentes a las plagas, enfermedades y
herbicidas. Modificacin del contenido
celular en macromolculas.
Mtodos de mejoramiento de especies a
travs de tcnicas no convencionales.
Aceleracin en la obtencin de hbridos.
Utilizacin de marcadores moleculares.
Identificacin y caracterizacin de genes
de inters.
AREA PECUARIA:
SANIDAD ANIMAL:
Desarrollo de mtodos para
el diagnstico de
enfermedades animales.
Produccin de nuevas
vacunas virales, bacterianas
y parasitarias por tcnicas de
avanzada.
PRODUCCION ANIMAL:
Manipulacin y sexado de
embriones.
Hormonas para el
mejoramiento de la
produccin animal.
PRODUCCION DE
INSUMOS
INDUSTRIALES:
Mejoramiento y control
de calidad de las
industrias de alimentos,
incluyendo derivados
lcteos, vinos y cervezas.
Tratamiento biolgico de
efluentes.
HISTORIA DE LA
BIOTECNOLOGIA
6000 AC: Arte de fermentar.
Los sumerios y babilonios
usaban levaduras para
fabricar cerveza.
El descubrimiento de los
sistemas de restriccin y
modificacin en bacterias y la
aplicacin de las
endonucleasas.
Los trabajos de Milstein y
Kohler sobre la formacin de
hibridomas con la posterior
utilizacin para la produccin
de anticuerpos monoclonales
(1975).
Un hito que merece resaltarse
ocurri en 1982 cuando la
compaa Eli Lilly consigui
la aprobacin de la Food and
Drug Administration de los
Estados Unidos de
Norteamrica para la
utilizacin de insulina
humana clonada y
producida en Escherichia
coli. A esto siguieron los
interferones, hormonas de
crecimiento humana y
bovina, el antgeno de
superficie del virus de la
hepatitis B, etc.
Entrando ya en
tema
El desarrollo de un proceso
de produccin a gran escala,
en forma exitosa, es el
resultado de acelerar e
intensificar un concepto
original, generalmente un
procedimiento de laboratorio
o a pequea escala.
La actividad de
desarrollo se concentra
en tres reas principales:
Ingeniera de fermentacin.
EL FERMENTADOR
DEFINICION OPERATIVA:
Contenedor en el que se
mantiene un medio ambiente
favorable para la operacin de
un proceso biolgico deseado.
En cuanto al biorreactor:
Para cada proceso
biotecnolgico, el sistema
de contencin ms
apropiado debe disearse
para brindar el mejor medio
ambiente, optimizado para
el crecimiento celular y
actividad metablica.
Equipos accesorios.
Vlvulas de seguridad
Manmetros
Vlvulas de control
Tuberas
Control de temperatura
Control de pH
Control de espumas
Puntos de muestreo
El medio ambiente puede
considerarse en tres aspectos:
BIOLOGICO
QUIMICO
FISICO
AIREACION Y AGITACION.
1- incrementar la velocidad de
transferencia de oxgeno desde
las burbujas de aire al medio
lquido; los microorganismos
no pueden utilizar oxgeno
gaseoso, sino solamente el que
se encuentra en disolucin.
2- aumentar la velocidad de
transferencia de oxgeno y
nutrientes desde el medio a las
clulas. Debido al movimiento
se evita que las clulas creen
reas estancadas con bajos
niveles de oxgeno y
nutrientes.
3- impedir la formacin de
agregados celulares.
4- aumentar la velocidad de
transferencia de productos
metablicos de las clulas al
medio.
5- aumentar la tasa o la
eficiencia de la transferencia
de calor entre el medio y las
superficies de refrigeracin
del fermentador.
Tipos de fermentador:
Crecimiento en suspensin.
Tiempo de generacin:
Se refiere al tiempo
necesario para duplicar
el nmero de clulas.
En un proceso biotecnolgico,
existen tres formas de hacer
crecer a los microorganismos en
un biorreactor:
-Por lotes (batch)
-Semi-continuo
-Continuo
Modos de operacin de los
fermentadores:
Esterilizacin de fermentadores.
En el laboratorio, el mtodo
estndar de esterilizacin es
el calor: 120C de calor
hmedo durante 15 min o
160C de calor seco durante,
al menos, 1 hora. A escala
industrial, el calor seco es
prohibitivamente caro, salvo
en casos muy especiales y se
utiliza, habitualmente, la
esterilizacin por calor
hmedo.
Esterilizacin del fermentador y
el medio conjuntamente.
El calentamiento se
consigue mediante:
Inyeccin de vapor en el
medio, por lo que el medio
se prepara ligeramente
ms concentrado para
compensar la dilucin por
el vapor condensado.
El medio se calienta por
conduccin, haciendo
pasar vapor por la camisa
de termostatizacin.
Esterilizacin por separado del
fermentador y el medio.
-Cambio de escala
-Diseo de medios para
procesos de fermentacin
-Fermentacin en
sustratos slidos
-Tecnologa de cultivos de
clulas de plantas y
animales
-Procesamiento posterior
de la muestra
Procesamiento
posterior de la
muestra.
Purificacin.
El diseo y la operacin
eficiente de los procesos de
purificacin, son elementos
vitales para obtener los
productos deseados para
uso comercial.
Deberan reflejar la
necesidad de no perder ms
que lo absolutamente
necesario del producto
final.
Este procesamiento final
involucrar, principalmente,
la separacin inicial de la
mezcla de cultivo hacia una
fase lquida y una slida, con
la subsecuente
concentracin y purificacin
del producto deseado.
El procesamiento involucrar
ms de una etapa:
-Destilacin
-Centrifugacin
-Filtracin
-Ultrafiltracin
-Extraccin con solventes
-Adsorcin
-Tamices moleculares
-Electroforesis
-Cromatografa de afinidad
-Liofilizacin
TECNOLOGIA
UTILIZANDO
ENZIMAS
La tecnologa de enzimas
involucra la produccin,
aislamiento, purificacin, uso
en forma soluble y,
finalmente, la inmovilizacin
de las enzimas para su
utilizacin en gran variedad
de biorreactores.
La utilizacin de sistemas
enzimticos libres de
clulas, presenta ventajas
respecto de los procesos
qumicos que involucran un
nmero de reacciones
secuenciales.
En fermentacin, el uso de
microorganismos como
catalizadores puede
presentar las siguientes
limitaciones:
1. Una alta proporcin del
sustrato ser utilizada
para convertirse en
biomasa
2. Pueden ocurrir reacciones
secundarias intiles
3. Las condiciones para el
crecimiento de los
microorganismos pueden
ser diferentes de las
requeridas para la
formacin del producto
4. El aislamiento y
purificacin del producto
deseado, a partir de la
mezcla de fermentacin,
puede ser dificultoso.
INGENIERIA
GENETICA E
INGENIERIA
PROTEICA DE
ENZIMAS
La utilizacin de estas
tcnicas ha posibilitado
producir enzimas
industriales con muy buena
calidad y pureza.
Crecimiento de microorganismos
conteniendo la enzima de utilidad
Determinacin de
la secuencia parcial mARN ADN
de aminocidos
Identificacin de clones
Transformacin de microorganismos
F = t * 10(T-121)/z
Donde t= tiempo de aplicacin del
tratamiento letal; T= temperatura
en oC y z= aumento de temperatura
requerido para reducir el perodo de
calentamiento en un 90% (es decir el
valor z).
En la industria alimentaria el
peligro ms serio para la salud
es la presencia de Clostridium
botulinum, el formador de
esporas patognico ms
resistente al calor, as como el
agente ms txico.
En esterilizacin clnica:
Calor hmedo:
Vapor a 134oC (30 psi), 3 min
Vapor a 126oC (20 psi), 10 min
Vapor a 121oC (15 psi), 15 min
Vapor a 115oC (10 psi), 20 min
Como los valores de D para
las esporas son, a 121oC, del
orden de 0,2 min, un tiempo
de mantenimiento de 15 min
de vapor a 121oC equivale a
75xD, lo que hace la
probabilidad de fallo en
relacin a la supervivencia de
C. botulinum casi
imposiblemente remota.
Procesos discontinuos:
Autoclaves:
Todo el aire debe ser
eliminado antes del ciclo de
calentamiento, ya que mezclas
de aire y vapor a una presin
determinada alcanzarn una
temperatura ms baja que la
del vapor puro a la misma
presin.
Inyeccin directa del vapor:
Si se utilizan inyecciones
directas de vapor se debe
tener en cuenta que entre el
10 y el 20% del volumen final
se debern a condensacin.
Mientras la eficiencia trmica
de este proceso es alta, la
fuerte formacin de espuma
durante el burbujeo puede
limitar la transferencia del
calor.
Calentamiento indirecto:
Pasando vapor de agua a travs
de una espiral de intercambio
de calor o de una camisa. El
calor en este procedimiento es
menos eficiente que por
inyeccin directa y, en ambos
casos, permanecen los
problemas de enfriamiento,
generalmente conseguido
mediante espirales.
Esterilizacin por flujo continuo:
En el diseo del equipo deben
considerarse las tres etapas
del ciclo, para conseguir:
1. Un rpido calentamiento
2. Un tiempo de mantenimiento a
la temperatura de
esterilizacin
3. Un rpido enfriamiento
Esterilizacin por
radiaciones:
Normalmente se lleva a cabo
con una fuente de cobalto-60
o de cesio-137.
El efecto letal es siempre
mayor en presencia de
oxgeno y alto contenido en
agua.
La unidad de medida de la
dosis de radiacin es el rad,
equivalente a una energa de
absorcin de 100 ergs/g de
aire. El Roentgen (R) es 83
ergs/g de aire.
Esterilizacin qumica:
Formaldehdo: solamente
efectivo si se puede
garantizar que entre en
contacto con los organismos
contaminantes. Pobre
difusibilidad y poder de
penetracin. Olor picante y
duradero. Solamente en
casos especiales.
Perxido de hidrgeno:
poderoso agente oxidante
que mata clulas vegetativas
y esporas con actividad
creciente con la
concentracin, temperatura
y normalmente pH. Sus
productos de degradacin
son inocuos.
Oxido de etileno y de
propileno: pueden utilizarse en
forma gaseosa. El de etileno
es ms efectivo pero
altamente txico, irritante y
violentamente explosivo en
mezclas con aire. Su efecto
letal sobre las bacterias
depende de la humedad; las
condiciones ptimas incluyen
40-80% de humedad relativa
y temperatura de 60oC
durante 3-4h, para una
concentracin de gas de 800-
1000 mg/l. El proceso se
utiliza cuando el equipo puede
ser daado por altas
temperaturas.
Esterilizacin por filtracin:
Filtros profundos: capa
relativament gruesa de fibra
de vidrio, algodn, lana
mineral, celulosa moldeados
como planchas, tapones o
cilindros.
Filtros de pantalla:
membranas hechas de
steres de celulosa u otros
polmeros
Evaluacin de la eficiencia de
esterilizacin:
1. Termosensores
2. Tubos de Browne: tubos de vidrio
cerrados con 0,15 ml de un fluido
rojo que cambia a verde al aumentar
el calor
3. Tiras de papel impregnadas con
esporas: bioindicadores. Se incuban
luego del tratamiento para evaluar la
supervivencia
4. Tiras indicadoras: responden al calor
hmedo entre 115-123oC. Indican la
dosis de calor por distancia recorrida
de un colorante azul
5. Cinta adhesiva de autoclave: indica
que el vapor, a un mnimo de 120oC,
alcanz la cinta cuyas rayas se tornan
de blancas a negras. No asegura
esterilidad sino que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.
Pruebas de eficiencia de filtracin:
1. Prueba del azul de metileno:
para distribucin de partcula de
0,02-0,2 micrones
2. Prueba del cloruro sdico: para
que haya esterilizacin, el filtro
debe retener el 99,997%
3. Esporas de Bacillus: rango de
tamao 0,7-1 micrn
4. Prueba del bacterifago T3:
0,03 micrones. Un filtro con
penetracin de llama de sodio de
0,001% tiene un equivalente de
0,000005% B. Subtilis y de
0,00005% de T3.